浅谈fish技术用于检测乳腺癌HER2基因扩增的临床研究

邹玉凤

（吉林省肿瘤医院， 吉林 长春 130021）

浅谈fish技术用于检测乳腺癌HER2基因扩增的临床研究

邹玉凤

（吉林省肿瘤医院， 吉林 长春 130021）

目的 探讨fish技术用于检测乳腺癌HER2基因扩增的临床应用价值。方法 本次医学观察选择我院2010年1月至2012年1月之间收治的51例乳腺癌患者为观察对象，所有患者均接受fish技术进行HER2基因扩增检测，回顾分析患者的临床检测结果。结果 fish技术HER2基因有无扩增患者蛋白表达检测结果对比统计学差异明显（P＜0.05）。结论 由本次临床研究结果可知，fish技术应用于乳腺癌HER2基因扩增的临床检测过程中，具有较高的应用价值。

fish技术；乳腺癌；HER2基因扩增

乳腺癌是临床上较为常见的一种女性恶性肿瘤，且该疾病的发生率呈现出了逐渐上升的趋势。HER2原癌基因是乳腺癌临床研究的重点。医学研究结果证实，乳腺浸润性导管癌患者中，约有20%～30%存在HER2基因过表达现象。HER2基因扩增的发生会对乳腺癌患者的预后、病情发展和发生产生直接的影响，同时也是该疾病药物治疗方案制定的主要依据。随着我国临床医学研究技术的不断发展，荧光原位杂交法（fish）检测技术逐渐被引入了乳腺癌HER2基因扩增的临床检查和治疗过程中，并取得了较为满意的效果。本次临床研究对fish技术用于检测乳腺癌HER2基因扩增的临床价值进行了分析，现将本次临床研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

本次医学观察选择我院2010年1月至2012年1月之间收治的51例乳腺癌患者为观察对象，患者年龄范围在35～75岁，平均年龄为（56.6 ±12.4）岁，乳腺癌患者组织分级结果为：10例III级，36例II级，5例I级。其中，26例患者未发生腋淋巴结转移，25例患者发生腋淋巴结转移。所有患者乳腺癌组织均使用10% 的中性福尔马林进行固定，并行石蜡包埋，4μm切片，HE染色检查确诊为乳腺癌，且符合世界卫生组织制定的临床诊断标准。

1.2 方法

1.2.1 实验试剂

本次临床研究选用福州迈新生物技术有限公司生产的免疫组化S-P试剂盒，以及北京金菩嘉生物技术有限公司生产的HER2-FISH-TM监测试剂盒。

1.2.2 乳腺癌组织切片免疫组化S-P法HER2蛋白表达检测

依据免疫组化S-P试剂盒的说明书，严格依据检测程序进行HER2切片蛋白表达检测。检测结果评定标准为：光镜检查阳性信号，阳性反应度定位于细胞膜部位，并呈棕黄色颗粒。高倍显微镜检查10个视野，若30%以上的肿瘤细胞有较为完整且较强的细胞膜染色，则确诊为强阳性（+++）；若30%以上的肿瘤细胞有较为完整且较弱的细胞膜染色，则确诊为阳性（++）；若30%以上不完整的肿瘤细胞发生染色，则确诊为弱阳性（+）；若30%以下的肿瘤细胞发生染色或未见染色，则确诊为阴性（—）。

1.2.3 HER2基因扩增fish法检测

预处理程序为：将石蜡包埋和福尔马林固定的乳腺癌组织进行4μm多块切片，分别将其放置在利用氨基烷基硅烷处理过的载玻片中，以65℃左右的温度过夜烘烤组织切片，在室温条件下将其置于二甲苯中进行脱蜡处理，乙醇梯度复水，使用30%的W/V酸性亚硫酸钠在50℃以下的温度中对组织切片进行相应处理，37℃条件下消化200μg/mL蛋白酶K，在室温条件下行0.1MHCl浸泡，乙醇梯度脱水，丙酮浸泡，玻片自然干燥后，通过加热将其温度提高到56℃。

FISH检测技术：依据FISH检测技术的基本程序严格进行操作。梯度乙醇脱水，组织玻片变性，自然风干玻片，在45℃～50℃的烤片机上，对变性好的探针杂交混合物进行预热处理，并置于42℃的保温箱中留置一夜，使用甲酰胺洗液进行洗片，玻片置于暗处进行自然干燥，DAPI复染，将玻片置于荧光显微镜下进行观察。

检测结果判断标准：异常HER2基因扩增细胞，指的是每个间期细胞核中存在2及以上的绿色信号，以及超过2个的红色信号；正常细胞，指的是单个间期细胞核中分别存在2个绿色信号和红色信号。对30个细胞进行计数，并计算Ratio值，Ratio值为30个细胞核中红信号之和与30个细胞核中绿信号之和的比值。若Ratio值＞2.2则结果为阳性，证实组织样本发生了HER 2基因扩增；若Ratio值＜1.8则结果为阴性，证实组织样本未发生HER2基因扩增；若Ratio值介于1.8～2.2，则需以FISH技术重新进行实验，并对结果进行最终判断，或是将计数细胞数量提高到100个。

1.3 统计学处理

使用SPSS17.0软件对本次医学研究数据进行统计学分析。使用（）表示计量资料，使用单因素方差分析法对数据进行比较分析，使用χ2检验方法对计数资料进行统计学分析，若P＜0.05，则表示数据之间差异具有明显的统计学意义[1]。

2 结 果

乳腺癌HER2基因有无扩增fish技术蛋白表达检测结果对比，具有明显的统计学差异（P＜0.05）。如表1所示。

表1 乳腺癌HER2基因有无扩增的蛋白表达结果分析[n/%]

3 讨 论

HER2基因属于一种人体的原位基因，主要定位在人染色体17q21之中[2]。HER2基因过表达的发生一方面会直接影响患者肿瘤的发生和发展，另一方面，也是肿瘤患者临床预后效果的主要评估指标，同时是辅助化疗和曲妥珠单抗治疗的主要参考依据，具有较高的HER2基因扩增检测准确性，FISH检测技术是现阶段临床上较为常用的一种HER2基因扩增临床检测方法[3]，然而，由于不同患者抗体存在较大的差异，抗原修复效果也会受到多重因素的影响，进而产生一定的差异，不同医院之间临床检测结果存在较大的差异[4]。原癌基因Her2的过表达，会赋予肿瘤细胞多方面的生物学优势，HER2肿瘤蛋白属于一种跨膜受体蛋白，为表皮生长因子受体系统中的一部分，能够提高信号转导通路中酪氨酸激酶的活性，因而会直接受到化疗方案选择、预后、远处转移、侵袭性、生存期等因素的影响[5]。

临床医学研究结果证实，HER2基因高表达不仅存在于乳腺癌患者中，肝、胃、肺、卵巢等肿瘤患者的HER2基因扩增发生率也较高，患者预后和肿瘤进展会直接受到HER2基因扩增的影响，且扩增程度越严重，患者预后越差，因而可以作为预后效果的一项评价指标[6]。

[1] 白艳峰.双探针显色和荧光原位杂交法检测乳腺癌HER2基因状态和17号染色体的分析[D].杭州:浙江大学,2010.

[2] 吕亚丽.FISH技术检测乳腺癌HER2基因扩增的临床应用[C].中华医学会,2010:217-218.

[3] 李亚卓,李冰.荧光原位杂交检测胃癌中HER2基因状态[J].诊断病理学杂志,2009,16(3):171-173.

[4] 曾宣,赵大春.荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因状态[J].中华病理学杂志,2005,34(11):701-702.

[5] 王晓兰.FISH在乳腺癌组织HER2/neu原癌基因检测上的应用及其临床意义的研究[J].中国医科大学学报,2008,37(5):664-666.

[6] 吕亚丽,钟梅.335例乳腺癌HER2基因扩增及17号染色体多体的临床病理学分析[J].诊断病理学杂志,2008,15(3):169-173.

R737.9

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1671-8194（2013）27-0090-02