反定型微板法在疾病预防控制中心的应用

周正茂 李育霞

反定型微板法在疾病预防控制中心的应用

周正茂 李育霞

保证反定型微板法在实际工作中顺利进行，并不断总结出血型误判的原因，以便在血型鉴定中引起重视，保证检测结果准确判读，提高输血安全系数。

反定型；微板法；血型误判；血型鉴定

1 材料与方法

1.1 仪器STAR全自动加样处理机，KUBOTA-4000平板离心机，上海无相微型振荡器，帝肯SUNRISE酶标仪，ITWELL实验室软件，96孔U型板，手工加样器。

1.2 试剂国家批准使用的反定血型试剂（上海血液生物医药有限责任公司-国食药监械准字2011第3400169号）。

1.3 操作方法

1.3.1 加样品（STAR加样）

1.3.1.1 在STAR软件上添加了XF1-48、XF49-96、O细胞检测加样程序的编辑，包括板的布局SA、SB位置从上到下重复一次的液体SAMPLE的加样，编号分别为1-48、49-96、1-96，加样量设定为40μl（血清和血球试剂），无预稀释液体的加入，无对照空加入，质控手工加入。

1.3.1.2 进行加样通道1000μl容量的核查，保证A、B、O三种血球凝集实验所需标本量的添加在整个1000μl允许范围内。

1.3.1.3 定义实验微板顺序，分别将反定型三块微板定义为XF年月日01、XF年月日02、XF年月日03。

1.3.2 加试剂用手工加样器在第一、第二（1-48、49-96）块板上手工加入等量的A、B血球试剂，在第三（1-96）块板上手工加入等量的O血球试剂。

1.3.3 离心KUBOTA-4000离心机有试管和微板两种离心轴，在进行此种血型操作时需要用微板离心轴进行血型微板的离心。KUBOTA-4000离心机设定1000转/min，离心时间为2min。血型微板要加盖后进行离心以防止外溅。

1.3.4 振荡振荡悬浮温度37℃，1000r/min，振荡2min取出静置5～10min。

1.3.5 判读借助ITSWELL实验室软件进行判读。读取规则为主波长620nm；振动强度为弱；振动时间为1秒；4.3.4.5临界值公式：A球=0.8，B球=0.8；临界值A球=0.8，B球=0.8；表达式阳性（+），阴性（-），灰区或无效。

2 结果

试验具体结果见实验记录见表1。

表1 血型对比实验结果

此检测方法实现了自动化加样，避免了人为差错的发生，同时实现了仪器判读结果，保存了原始质料；此方法尤其适合批量标本处理，节省了操作时间；满足实验室要求，符合确认标准；在此方法实际应用过程中0090913005199的标本一例正反定型不符，正定型结果为O型，经肉眼观察AB两侧均无凝集。反定型判读结果为AB型，经肉眼观察AB两侧均无凝集。

3 处理

疑为该标本正反定型不符，于是同时进行微板及纸片和试管三种方式同时手工复核，结果反定型仍为AB型，报省血液中心血型参比实验室检测，反定型结果判定为O型。

4 讨论

根据卫生部关于印发《血站技术操作规程（2012版）》的通知中明确规定卫医政发〔2012〕1号4.11.2血型检测方法：血型筛查常用方法有平板法和微板法、血型鉴定常用试管法和微板法。按照试剂说明书和《全国临床检验操作规程》（第3版）的规定进行具体操作和质量控制。附录E提供了建立微板法，可供实验室自行建立微板法时参考。

若出现2.4情况可从以下方面进行原因的排查。首先是操作者，是否有操作不当的环节造成结果的偏差。其次是机器，运行是否正常，是否在有效的校准期内。第三是物料，试剂是否在有效期内，试剂的保存是否符合要求，微板是否刷洗干净，在微孔板内是否有少量残留的水蒸气，提供用于判读的微板厂家是否具有相应的资质，其产品是否合格。第四是操作方法，是否存在缺陷。最后是实验环境，温度、湿度是否达到相应的要求。从上述的人、机、法、环都满足实验要求的情况下，最有可能导致问题出现的原因则是物料。而在物料中，微板厂家具有相应资质，微板涮洗洁净并进行了干燥处理，最有可能导致问题出现的原因则是反定型试剂在有效期末（购置的反定型试剂有效期为2个月），造成部分反定型试剂的血球出现离心后溶血现象。

由此可得到结论，本室使用的反定型鉴定方法是标准方法，可以常规用于血液检测。出现血型正反定型不符时，从上述方面找出原因，尤其在试剂使用有效期末，可手工配制血球试剂或有新批号血球试剂进行比对实验，以减免类似差错的发生。

[1]中华人民共和国卫生部.血站技术操作规程·卫医政发(2012)1号[S].北京,2012.

[2]王培华.输血技术学[M].北京：人民卫生出版社,2002：113.

R817.1

A

1673-5846(2013)08-0305-02

吉林省辽源市疾病预防控制中心，吉林辽源 136200