藤黄中藤黄总酸提取工艺研究

王园园，汪盈盈，汪电雷

（1.亳州职业技术学院药学院，安徽亳州236800；2.安徽中医药大学药学院，安徽合肥230031）

藤黄中藤黄总酸提取工艺研究

王园园1，2，汪盈盈1，汪电雷2

（1.亳州职业技术学院药学院，安徽亳州236800；2.安徽中医药大学药学院，安徽合肥230031）

目的：优选中药藤黄中藤黄总酸的提取工艺.方法：采用正交试验法，以藤黄酸含量和浸膏得率为评价指标，对乙醇浓度、溶剂量、提取时间及提取次数4种因素进行了研究.结果：优选的提取工艺为：90%乙醇，5倍量，提取3次，每次1小时.结论：正交试验优选的藤黄中藤黄总酸提取工艺简便、稳定、可行.

藤黄；藤黄总酸；提取工艺；正交试验

藤黄Resina Garciniae系藤黄科（Guttiferae）植物藤黄树Garcinia hanburyi Hook.f.的干燥树脂[1]，藤黄性寒，有毒，味酸、辛、涩，有破血散结、解毒、止血、杀虫之功效，自古以来就用来治疗瘰疬、痈疸、疖肿等顽疾[2].藤黄总酸是从藤黄中提取的活性成分，主要由藤黄酸、新藤黄酸、异藤黄酸等组成的混合物.研究发现藤黄总酸对人肝癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌等有抑制作用，对肿瘤转移有良好抑制作用等.本文采用正交试验法，以藤黄酸含量和浸膏得率为评价指标[3]，确定藤黄总酸最佳提取工艺.

1 仪器与试药

1.1 仪器

沃特世e2695高效液相色谱仪，Empower色谱工作站，R-205旋转蒸发器，DZF-200型真空干燥箱，Sartorious电子天平，超声波清洗器.

1.2 试药

藤黄酸对照品安徽中医学院自制（含量=99%）

藤黄药材购于安徽亳州中药材交易市场，经安徽中医药大学中药教研室王德群教授鉴定为藤黄科植物藤黄(Garcinia Hanburryi)的干燥树脂.

2 方法与结果

2.1 正交试验

取中药藤黄10g，精密称定.选取乙醇浓度（%）、乙醇用量（倍）、提取时间(h)、提取次数(次)4个因素，每个因素3个水平，按照正交L9(34)正交试验表进行试验，以期得到这些因素对藤黄酸提取率影响的变化趋势和主次顺序.因素水平安排表见表1.

表1 提取因素水平表

2.2 干浸膏得率测定[4]

分别将正交试验各组提取液加入到干燥至恒重的圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中浓缩至浓稠，60℃真空干燥箱干燥40min，移至干燥器中冷却30min，称重，计算浸膏得率.结果见表2.

2.3 含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备

精密称取藤黄酸对照品10.57mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释定容，制成含量为1.057mg/ml的藤黄酸对照品溶液备用.

2.3.2 供试品溶液的制备[5-6]

精密称取藤黄提取物0.1g，置于100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释定容.精密吸取1ml以甲醇定容于100mL容量瓶中，用0.45μm微孔滤膜过滤，续滤液作为样品溶液备用.

2.3.3 色谱条件及专属性考察

沃特世e2695高效液相色谱仪；Empower色谱工作站；色谱柱：大连依利特ODS C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸（98:2）；流速：1.0ml/min；柱温25℃，检测波长360nm；进样量：10μl.在该色谱条件下藤黄酸和峰2分离度为1.67，与峰4分离度为1.77，能较好的分离，理论塔板不低于5000.见Fig.1.

图1-A 藤黄酸对照品HPLC图

图1-B 藤黄提取物样品HPLC图

2.3.4 线性关系考察

精密量取1ml对照品溶液以甲醇定容于100ml容量瓶中，分别精密吸取2μl、4μl、10μl、15μl、20μl、25μl进样，测定峰面积.以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为：得回归方程Y=1280242.10x -6940.85（r=0.9999），表明线性关系良好.

2.3.5 精密度试验

精密吸取藤黄酸浓度为10.57μg/ml对照品溶液10μl，重复进样6次，测定藤黄酸峰面积，RSD为0.3%，说明本试验进样精密度良好.

2.3.6 重复性试验

取同一批次藤黄提取物样品，按供试品溶液制备方法处理样品6份，按上述色谱条件操作，进样10μl，测定藤黄酸峰面积，RSD为0.6%，表明该法的重复性好.

2.3.7 稳定性试验

室温条件下，精密吸取已知浓度（10.80μg/ml）的藤黄提取物样品溶液10μl，于0、2、4、8、10、12h进样测定，结果藤黄酸峰面积的RSD为1.4%表明供试品溶液在12h内稳定.

2.3.8 加样回收率试验

精密称取已知藤黄酸含量的藤黄提取物样品6份，分别加入浓度为1.057mg/ml的藤黄酸对照品0.5ml，按制备供试品溶液，分别进样10μl测定峰面积，计算回收率.回收率为98.76%，RSD=1.69试验结果表明该试验的回收率好.

2.3.9 供试品含量测定

将藤黄提取物按2.3.2供试品溶液制备方法制备样品溶液，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，测定藤黄酸含量.结果见表2.

表2 正交试验结果表

表3 方差分析表

由方差分析结果可知：中药藤黄采用乙醇超声提取，提取次数、料液比和乙醇浓度有显著影响；提取时间无显著影响.影响顺序为提取次数＞料液比＞乙醇浓度＞提取时间.C的影响最小且无显著性，为节省时间，提高提取效率，宜选择C1.综合考虑确定最佳提取工艺为A2B3C1D3，即以5倍90%乙醇超声提取3次，每次1小时.

2.4 提取工艺验证

为进一步考察上述优选工艺稳定性，对其进行验证.称取藤黄粗粉10g，3份，按优选工艺条件，即以5倍90%乙醇超声提取3次，每次1小时.药材提取物同上述处理方法和检测方法，计算干浸膏收率和藤黄酸含量.试验结果见表4.

表4 验证试验结果

3 讨论

中药化学成分非常复杂，对其中的所有成分都进行检测控制是不可能也不必要的.中药提取效果直接关系到产品的质量和疗效，所以选择评价指标在研究工作中就显得尤为重要，选择能够反映该中药主要药效的有效成分作为指标对其进行控制，查阅文献，藤黄酸为藤黄总酸的主要有效成分之一，且在主要成分中含量最高（21.75%-36.59%）[5]；在一定程度上可以代表藤黄总酸质量.在藤黄总酸注射液和总藤黄酸亲水凝胶骨架片质量评价时均选择藤黄酸含量为评价指标.

本试验综合藤黄酸含量和干浸膏得率评价提取工艺.

试验结果显示最佳工艺条件为A2B3C1D3，5倍90%乙醇超声提取3次，每次1小时.为进一步开发藤黄提供了参考依据.

〔1〕南京医学院.药材学[M].北京:人民卫生出版社, 1960.1161.

〔2〕杨企铮,贾淑杰,李德华.中药藤黄的近代研究[J].中国肿瘤临床,1994,21(6):464-466.

〔3〕柯仲成，张辉，桂双英.贯叶金丝桃总黄酮提取工艺研究[J].中国中医药信息杂志，2009,16(4): 48-50.

〔4〕桂双英,王举涛,叶杰胜,等.正交试验法优选桔梗总皂苷的提取工艺[J].安徽中医学院学报, 2011,30(5):63-64.

〔5〕江再茂,李遐方,李克，等.高效液相色谱法测定藤黄药材中藤黄酸[J].中草药，2008,39(3):445-447.

〔6〕柳文媛,冯锋,尤启冬，等.藤黄总酸注射液中藤黄酸的高效液相色谱法测定[J].江苏药学与临床研究,2003,11(1):16-18.

R284.2

A

1673-260X（2013）09-0130-03

亳州职业技术学院院级课题（BYK201202）；安徽省高校自然科学研究项目2项（No：KJ2010A210）；（No：KJ2012A186）