狗骨胶中氨基酸等成分的鉴别方法研究

韩映晨 具善姬 李贞顺

狗骨胶古本草未载。近年对其有所报道，在化学，药理方面均有研究。《山东药用动物》［1］、《内蒙古药用动物》［2］、《中国动物药志》［3］均有收载，现今广泛应用于临床。

参照《中华人民共和国药典2010年版一部》中收载的鹿角胶［4］、阿胶［5］、龟甲胶［6］三个品种的质量标准中的方法，对狗骨胶的鉴别做如下实验工作。

1 仪器与试药及实验前准备

1.1 仪器与试药 定量毛细管(美国 Drummond公司)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂)；CQX25-06型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。甘氨酸(110735-200102)、苏氨酸(110889-200102)、精氨酸(110872-200204)、亮氨酸(110876-200204)、缬氨酸(110874-9802)、组氨酸(110890-200001)、苯 丙 氨 酸 (111615-200301)、丙 氨 酸(110873-9802)、谷氨酸(111576-200201)、瓜氨酸(110873-9802)、赖氨酸(140673-200405)、酪氨酸(111577-200201)、脯氨酸(111659-200301)对照品均由中国药品生物制品检定所提供；狗骨胶(批号为090601，090602，090603)及实验用的各味药材和辅料由吉林敖东集团珲春恒源药业股份有限公司提供；其他化学试剂均为分析纯。

1.2 实验前准备 阴性对照药品的制备：除去狗骨外，取其他各味辅料，按本品处方比例及制备工艺自行配制而成的，为阴性对照，即空白实验。

阳性对照药品的制备：按本品处方比例及制备工艺自行配制而成的，为阳性对照，即自制实验。

2 试验方法及结果

2.1 狗骨胶的理化鉴别 取本品粉末2 g，加水10 ml使溶解，滤过，取滤液1 ml，加茚三酮试液0.5 ml，置水浴上加热15 min，溶液显蓝紫色(见图-1)。另取滤液1 ml，加新制的1%硫酸铜溶液和40%氢氧化钠溶液(1：1)的混合液数滴，振摇，溶液显紫红色。(见图-2)，结果：三批供试品均呈正反应，阳性对照也呈正反应，阴性对照不呈正反应，说明该实验可用于狗骨胶的鉴别。

2.2 狗骨胶中氨基酸的薄层鉴别 取本品粉末0.2 g，加甲醇2 ml，超声处理15 min，滤过，滤液，作为供试品溶液。另取阳性对照药品及除去狗骨胶的阴性对照药品，同法制成作为阳性对照溶液及阴性对照溶液。再取甘氨酸对照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部2010年版附录VI B)试验，吸取上述各种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照溶液无干扰，阳性对照溶液由于受到实验室制备设备等的影响，与供试品略显有不同之处，列入正文。(见图-3)

图1 狗骨胶的理化鉴别

图2 狗骨胶的理化鉴别

图3 狗骨胶中氨基酸薄层色谱图

图4 狗骨胶中氨基酸薄层色谱图

图5 狗骨胶中各种氨基酸薄层色谱图

3 讨论

为了验证方法的可行性，还做过如下实验：

3.1 供试品制备方法的选择 1)取本品粉末0.2 g，加甲醇2 ml，超声处理15 min，滤过，滤液，作为供试品溶液。2)取本品粉末0.2 g，加70%的乙醇2 ml，超声处理15 min，滤过，滤液作为供试品溶液。3)取本品粗粉0.2 g，置锥形瓶中，加6 mol/L盐酸溶液8 ml，加热回流2 h，加水6 ml，摇匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇5 ml使溶解，作为供试品溶液。

薄层层析与检视：同标准方法。经实验证明：甲醇提取液与70%乙醇提取液的展开结果基本上相同，而经盐酸溶液水解后用甲醇溶解的提取液明显增加了斑点和每个斑点的量。说明三种提取方法皆可行，因此考虑提取方法的简便，易于在薄层板上点样等等因素，故选择了甲醇作为制备供试品的溶液，并选择超声处理的方式制备供试品溶液，使方法更加简便易行。(见图-4)

3.2 对照品的选择 甘氨酸(110735-200102)、苏氨酸(110889-200102)、精氨酸(110872-200204)、亮氨酸(110876-200204)、缬氨酸(110874-9802)、组氨酸(110890-200001)、苯丙氨酸(111615-200301)、丙氨酸(110873-9802)、谷氨酸(111576-200201)、瓜氨酸(110873-9802)、赖氨酸(140673-200405)、酪氨酸(111577-200201)、脯氨酸(111659-200301)对照品，加甲醇分别制成约含0.5 mg/ml溶液。薄层层析与检视：同标准方法。经实验证明：各种氨基酸在此条件下进行展开，有些是相互重叠的，因此参考相关的质量标准，选择甘氨酸作为对照品。(见图-5)

［1］ 纪加义，等．山东药用动物．山东科学技术出版社，1979：402.

［2］ 赵肯堂，等．内蒙古药用动物．内蒙古人民出版社，1981：446.

［3］ 高士贤，等．中国动物药志．吉林科学技术出版社，1996：868.

［4］ 国家国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)．化学工业出版社，2010：302.

［5］ 国家国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)．化学工业出版社，2010：175.

［6］ 国家国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)．化学工业出版社，2010：169.