赤雹茎叶不同提取物抗炎活性比较*

赵聪亚，蔺 曼，段兴华，张倩瑜，孙冬欣，佟继铭

(1.承德医学院中药学系2010级，河北承德 067000；2.指导教师)

赤雹(Thladiantha dubia Bunge）为葫芦科多年蔓生草本植物，满族民间长期用于治疗风湿痛、腰腿痛、软组织损伤等[1]。文献报道赤雹果乙醇提取物对急、慢性炎症模型均有显著抗炎作用[2];赤雹果水提取物、乙醇提取物及水溶性物质均有显著的镇痛作用[3]；另外，赤雹果治疗风湿性关节炎，原发性和继发性痛经等均有较好的疗效[4-6]；赤雹根乙醇提取物及总皂苷具有显著的镇痛抗炎活性[7-8]。本研究旨在比较赤雹茎叶水提取物和乙醇提取物的抗炎活性，为进一步探讨赤雹茎叶的有效部位奠定基础。

1 材料

1.1 实验动物 健康雄性昆明种小鼠，体重20-22g 购自天津市山川红实验动物科技有限公司，许可证号：SCXK(津）：2009-0001.NO.0003995。

1.2 药品与试剂 赤雹茎叶乙醇提取物(ethanol extract of stem and leaf of Thladiantha dubia Bunge，EETSL) 和水提取物(water extract of stem and leaf of Thladiantha dubia Bunge，WETSL）(承德医学院中药研究所制备)；二甲苯(天津市福晨化学试剂厂，批号20120215）；阿司匹林肠溶片(石家庄康力药业有限公司，批号120316)；醋酸地塞米松片(张家口云峰制药厂，批号1206202)；戊巴比妥钠(广州化学试剂厂，批号20110601）。

1.3 仪器 上皿电子天平(上海精科天平，批号JA2003)。

2 方法

2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 雄性昆明种小鼠90只，随机分为空白对照组，地塞米松组(5mg/kg），阿司匹林组（200 mg/kg），EETSL 大、中、小(9g/kg、4.5g/kg、2.25g/kg，按生药计算）剂量组，WETSL大、中、小(9g/kg、4.5g/kg、2.25g/kg，按生药计算）剂量组，每组10只。小鼠给药容积20ml/kg，空白对照组小鼠灌胃等容积的蒸馏水。各组小鼠连续灌胃给药3d，末次给药45min将二甲苯(0.02ml/只）均匀涂在小鼠左耳前后两面；右耳不涂抹二甲苯，作为对照。1h后将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下两耳，用6mm直径打孔器分别在左、右耳的相同部位打下圆耳片，称重，计算肿胀度：肿胀度=左耳片重量－右耳片重量(mg）/体重(g)。

2.2 小鼠棉球肉芽肿实验

2.2.1 棉球制备：电子天平精确称取脱脂棉180份，每份5mg，团成球形，以1.5kPa压力高压灭菌20min，每个棉球加氨苄青霉素(1mg/0.1ml）浸泡，50℃烘箱放置12h，烤干，备用。

2.2.2 植入棉球：昆明种小鼠100只，将灭菌棉球植入小鼠两侧腋窝皮下。24h后，将小鼠随机分为空白对照组(植入棉球不给药）、EETSL和WETSL大、中、小剂量组、地塞米松组和阿司匹林组，分组及给药方法同2.1，每组10只。各组小鼠连续灌胃给药7d，第8d颈椎脱臼处死小鼠，取出棉球，称重，计算棉球肉芽肿湿重:肉芽肿湿重＝棉球肉芽肿湿重－棉球重量(mg)/体重(g）;然后将棉球肉芽肿放入恒温干燥箱60℃干燥12h后称重，计算肉芽肿干重：肉芽肿干重＝棉球肉芽肿干重－棉球重量(mg)/体重(g）。

2.2.3 对小鼠免疫器官指数的影响：小鼠取出棉球后，取脾、胸腺，称重，计算各组小鼠脏器指数：脏器指数=脏器重量(mg）/体重(g)。

3 结果

3.1 赤雹茎叶提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀度的影响EETSL和WETSL各剂量组小鼠耳肿胀度显著低于空白对照组(P<0.01）；WETSL中剂量组小鼠耳肿胀度显著低于EETSL中剂量组(P<0.05），EETSL和WETSL其它相同剂量组小鼠耳肿胀度比较，差异无统计学意义(P>0.05）。见表1。

表1 赤雹茎叶提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀度的影响( ±s，n=10)

表1 赤雹茎叶提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀度的影响( ±s，n=10)

与空白对照组比较:*P<0.01;与WETSL中剂量组(4.5g/kg）比较:#P<0.05

组别 剂量(g/kg) 肿胀度(mg/10g)空白对照 — 0.80±0.20阿司匹林 0.2 0.48±0.02*地塞米松 0.005 0.52±0.02*9.0 0.38±0.17*EETSL 4.5 0.49±0.12*#2.25 0.60±0.14*9.0 0.40±0.04*WETSL 4.5 0.38±0.20*2.25 0.59±0.16*

3.2 赤雹茎叶提取物对小鼠棉球肉芽肿重量的影响EETSL大剂量组、WETSL三个剂量组肉芽肿湿重显著低于空白对照组(P<0.01，P<0.05）；EETSL和WETSL大剂量组肉芽肿干重显著低于空白对照组(P<0.01，P<0.05）；WETSL中剂量组肉芽肿湿重显著低于EETSL中剂量组(P<0.05），两种提取物其它相同剂量间比较差异均无统计学意义(P>0.05）。见表2。

表2 赤雹茎叶提取物对小鼠棉球肉芽肿重量的影响( ±s，n=10)

表2 赤雹茎叶提取物对小鼠棉球肉芽肿重量的影响( ±s，n=10)

与空白对照组比较:*P<0.01，**P<0.05;与WETSL中剂量组(4.5g/kg）比较:#P<0.05

组别 剂量(g/kg) 肉芽湿重(mg/10g） 肉芽干重(mg/10g）空白对照 — 60.39±9.83 10.79±1.85阿司匹林 0.2 48.14±8.42* 9.14±2.84地塞米松 0.005 39.28±4.93* 4.58±1.39*9 44.34±3.80* 7.84±1.56**EETSL 4.5 56.27±6.72# 9.63±4.09 2.25 56.32±12.63 10.38±2.74 9 41.41±6.47* 6.73±2.73*WETSL 4.5 47.10±6.88* 8.41±1.88 2.25 52.56±7.38** 9.86±3.62

3.3 赤雹茎叶提取物对小鼠免疫器官指数的影响 EETSL和WETSL大、中剂量组脾脏指数显著低于空白对照组(P<0.01，P<0.05）；EETSL大剂量和WETSL大、中剂量组胸腺指数显著低于空白对照组(P<0.01，P<0.05）；WETSL中剂量组脾、胸腺指数显著低于EETSL中剂量组，两种提取物其它相同剂量间差异比较均无统计学意义(P>0.05）。见表3。

表3 对炎症小鼠免疫器官指数的影响( ±s，n=10)

表3 对炎症小鼠免疫器官指数的影响( ±s，n=10)

与空白对照组比较:*P<0.01，**P<0.05;与WETSL中剂量组（4.5g/kg）比较:#P<0.05

组别 剂量(g/kg） 脾脏指数（mg/10g） 胸腺指数（mg/10g）空白对照 — 22.09±1.25 20.90±2.45阿司匹林 0.2 18.19±1.01** 15.78±2.31*地塞米松 0.005 13.89±8.47* 13.76±0.86*9 15.44±1.32* 16.67±2.07**EETSL 4.5 18.48±2.91**# 19.36±3.18#2.25 21.67±2.14 20.97±2.96 9 14.66±1.85* 14.02±2.06*WETSL 4.5 15.40±1.49* 15.84±1.31*2.25 22.89±3.31 20.72±7.34

4 讨论

炎症反应是机体对外界刺激的防御反应，分为急性炎症反应和慢性炎症反应。急性炎性反应是炎性介质引起微血管通透性升高，使血浆成分与白细胞渗出，粒细胞解体并释放溶酶体酶，致使肿胀或组织损伤[9]。慢性炎性反应是由于免疫细胞对异物或死亡细胞的吞噬，并释放多种炎性介质，同时血管和淋巴管以及附近的纤维细胞和巨噬细胞增殖，致结缔组织纤维化和肉芽肿形成[10-11]评价中药的抗炎活性，一般采用以血管通透性为主要改变的急性炎症模型(如二甲苯诱导的小鼠耳肿胀）、以肉芽组织增生为特点的慢性炎症模型(小鼠棉球肉芽肿）及对免疫功能的影响等进行综合评价。

本研究比较了赤雹茎叶两种提取物对小鼠急性炎症模型(二甲苯致小鼠耳肿胀实验）、慢性炎症模型(棉球肉芽肿实验）和免疫器官指数的影响，结果发现，EETSL和WETSL三个剂量对小鼠急性炎症反应、慢性炎症反应均有显著抑制作用，并且二者均能降低小鼠免疫器官的指数。本研究表明，赤雹茎叶两种提取物均能有效抑制急性炎症引起的血管扩张、渗出和水肿，以及慢性炎症引起的肉芽组织形成，虽然WETSL中剂量组的抗炎作用优于EETSL中剂量组，但是否提示WETSL的抗炎作用强于EETSL，尚待进一步的深入研究。

[1]宋立人,洪恂,丁绪亮,等.现代中药大辞典(上册）[M]北京:人民卫生出版社，2001.1022.

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[6]佟继铭，李兰芳，宋丽萍，等.赤雹果不同提取物的镇痛活性比较研究[J].时珍国医国药，2006,17(8):1461-1462.

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