五藤痛风饮对大鼠急性痛风性关节炎模型的 IL-8、TNF-α 的影响

王晓璐 徐静 李慧 郭慧 梁华

随着我国经济的发展人们饮食结构的改变，痛风已经由过去的罕见病变成了当今的常见病。痛风是嘌呤代谢紊乱所导致的疾病，其主要临床特点为血尿酸增高及尿酸盐沉积导致的痛风性关节炎反复发作、痛风石沉积、慢性间质性肾炎和尿酸肾结石形成［1］。痛风已经成为了当今世界中老年男性的常见病［2］，患病率呈逐年增高的趋势［3］，并且出现了发病年龄低龄化的特点［4］。本实验通过对急性痛风性关节炎大鼠模型关节液内IL-8、TNF-α水平变化的研究，探讨五藤痛风饮治疗痛风性关节炎的作用机制。

1 试验过程

1.1 实验动物 健康清洁级wistar大鼠60只，全部为雄性，体重为(200±20)g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。实验动物饲养环境：室温20℃ ～22℃，空气新鲜，自由摄食、饮水，饲固体饲料。分笼饲养。

1.2 实验药品 中药组五藤痛风饮(忍冬藤、海风藤、鸡血藤、络石藤 、青风藤、穿山龙、秦艽、土茯苓、萆薢、威灵仙等组成。将药物加水适量，煎制浓度为7.2 g/ml的水煎液)；西药组秋水仙碱，配制成浓度为0.03 mg/ml的溶液。

1.3 试剂及设备 ①尿酸钠溶液的制备取250 mg MSUC颗粒加入9 ml生理盐水，1 ml吐温80，加温搅拌，制成浓度为25 mg/ml；②IL-8、TNF试剂盒；③0.9%氯化钠注射液；④腺嘌呤制成10 mg/ml的乳浊液，现用现配。

1.4 实验动物分组 将60只Wistar大鼠随机分为6组，分别为空白组，关节炎模型组，中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组，西药对照组，每组10只。每只均使用苦味酸染色标记。

1.5 实验步骤 60只大鼠正常饲养一周后开始给药，空白组常规饲养，中药各组给药：(7.2 g/ml、3.6 g/ml、1.8 g/ml)五藤痛风饮煎液+腺嘌呤各2 ml，西药组给药：秋水仙碱+腺嘌呤各2 ml，模型组给药：9%生理盐水+腺嘌呤各2 ml，空白组给药：9%生理盐水2 ml，均为灌胃给药；第2、3、4天给药同第一天；第5天灌胃给药30 min后在各鼠右踝关节处，立即以碘酒消毒局部，用6号灭菌注射针在大鼠右侧踝关节背侧，从45°方向插入至胫跗关节腔内，注射0.2 ml MSU混悬液；第6、7天给药同第5天。

1.6 取材 第7天给药后30 min取材：10%水合氯醛麻醉，颈动脉取血，脱颈处死后取踝关节滑膜组织，制备血清和组织匀浆，-70℃保存待测。

2 试验结果

五藤痛风饮对大鼠痛风性关节炎模型关节液TNF-α、IL-8含量影响：见表。

表1 各组药物对关节液中IL-8、TNF-α水平的影响(±s)

表1 各组药物对关节液中IL-8、TNF-α水平的影响(±s)

注：与模型组比较：▲P＜0.01

分组 n IL-8(pg/ml) TNF(pg/ml)空白 10 0.49±0.16▲ 0.54±0.07▲模型 10 2.49±0.35 2.14±0.50秋水仙碱 10 0.72±0.16▲ 0.87±0.11▲中药高剂量 10 0.84±0.16▲ 0.95±0.14▲中药中剂量 10 1.88±0.25▲ 1.31±0.26▲中药低剂量10 2.27±0.38 1.84±0.36

对关节液中IL-8水平的影响：与空白组比较，模型组的IL-8水平有明显升高(P＜0.01)，说明本次试验造模成功；与模型组比较，秋水仙碱组、中药高剂量组、中药中剂量组的IL-8水平均有明显下降(P＜0.01)，中药低剂量组的无统计学意义(P＞0.05)；中药高中两个剂量组虽无显著差异，但也存在着量效关系(高剂量＞中剂量)。对关节液中TNF-α水平的影响：与空白组比较，模型组的TNF-α水平明显升高(P＜0.01)，说明本次试验造模成功；与模型组比较，秋水仙碱组、中药高剂量组、中药中剂量组的TNF-α水平有明显下降(P＜0.01)，中药低剂量组无统计学意义(P＞0.05)；中药高中两个剂量组虽无显著差异，但也存在着量效关系(高剂量＞中剂量)。

3 讨论

现代医学认为痛风急性发作其主要的病理改变是尿酸钠晶体(MSUC)在关节周围组织沉积引起急性炎症反应。沉积在关节腔中的尿酸盐结晶(MSU)被吞噬细胞、白细胞吞噬后，破坏细胞的溶酶体等细胞器，释放出蛋白水解酶、激酶、组胺、趋化因子等物质，引起局部血管扩张和通透性增加、血浆渗出、水肿、发热、白细胞聚集等炎症反应，促使炎症细胞释放白细胞介素、肿瘤坏死因子等细胞因子，激活环氧化酶-2(COX-2)合成前列腺素类，导致炎症范围进一步扩大，进而发生急性痛风性关节炎［5］。总的来讲，尿酸盐在滑膜组织沉积并引起炎症介质释放是急性痛风性关节炎发作的基础，PGE2、白细胞三烯 B4(LTB4)、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α 等是参与炎症过程的重要因子。本实验研究发现，五藤痛风饮对大鼠痛风性关节炎模型关节液TNF-α、IL-8的水平有明显下调作用，由此推测五藤痛风饮在消除炎症因子方面有一定的作用。总之，五藤痛风饮对大鼠痛风性关节炎发挥作的机制之一，可能与其降低TNF-α、IL-8的水平起到抗炎作用有关。

［1］ Richette P，Bardin T．Gout．Lancet，2010，375(9711)：318-328．

［2］ 南海荣．高尿酸血症和痛风的遗传学研究进展．国外医学内分泌学分册，2002，22(5)：326．

［3］ Kim KY，Ralph schumaeher H．Hunsehe E，et al．A literature review of the epidemiology and treatment of acute gout．Clin Ther，2003，25(6)：1593-1617．

［4］ Choi HK，Curhan G．Gout：epidemiology and lifestyle choices．Curr Opin Rheumato1．2005，17(3)：341-345．

［5］ Ponce L，Arjona M，Blanco G．The effect of montelukast in a model of gouty arthritis induced by sodium monourate crystals．Invest Clin，2011，52(1)：15．