高效液相色谱法测定麻保沙星溶液的含量

林仙军，穆 琳，吕伟军，周芷锦

(浙江省兽药监察所，杭州 310020)

麻保沙星(Marbofloxacin，MBF)是一种动物专用的新型氟喹诺酮类抗菌药［1－2］，其化学名为9－氟－2，3－二氢－3－甲基－10－(4－甲基－1－哌嗪)－7 － 氧 －7H － 吡啶 －［3，2，1 －ij］［4，1，2］－苯并噁二嗪－6－羧酸，分子式为C17H19FN4O4，分子量362，为第三代喹诺酮类药物，由瑞士罗氏公司研制，并于1995年首次在英国上市，目前仅批准作为宠物药使用于犬和猫。麻保沙星具有抗菌谱广，抗菌活性强，体内分布广泛，耐受性好，与其他抗菌药物无交叉耐药性等特征，其生物利用度高，毒性低，较安全，被列为动物专用药。目前，测定麻保沙星含量的方法有高效毛细管电泳法［3］、HPLC/MS法［4］和梅雪珍等报道的麻保沙星在山羊体内的药物动力学［5］以及黄显会等报道的麻保沙星在鸡体内的生物利用度及药物动力学［6］，均为测定血浆中麻保沙星残留的反相高效液相色谱法，未见使用HPLC法测定麻保沙星溶液的含量。为了制定科学合理的质量控制方法，研究建立了HPLC法测定麻保沙星溶液含量的方法，为麻保沙星溶液的质量监控提供参考。

1 材料

1．1 主要仪器 Waters2695高效液相色谱仪，配Waters2487紫外检测器(美国Waters公司);TU－1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);XS－205电子天平(Mettler公司);SL502 N电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);DELTA 320酸度计(Mettler公司);KQ－500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1．2 主要试剂 乙腈，甲醇均为色谱纯，默克公司;磷酸为优级纯，浙江三鹰化学试剂有限公司;高氯酸钠为分析纯，上海市国药集团化学试剂有限公司;醋酸铵为色谱纯，SIGMA公司;水为超纯水。

1．3 对照品和供试品 麻保沙星对照品，批号为R090501，含量为99．7%;麻保沙星溶液，规格为100mL:2．5 g，批号为090201、090202 和090203，均由浙江国邦制药有限公司提供。

2 方法与结果

2．1 波长的选择 取麻保沙星适量，用甲醇溶解并稀释制成5μg/mL的溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描。结果麻保沙星在291 nm波长处有最大吸收(图1)，故检测波长选择为291 nm。

图1 浓度为5μg/m L麻保沙星对照品溶液紫外光吸收图谱

2．2 对照品溶液的制备 取麻保沙星对照品适量，用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星0．1 mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2．3 麻保沙星供试品溶液的制备及稀释溶液的确定 精密量取麻保沙星溶液适量，用15%、23%、30%和40%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星0．1 mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。结果23%甲醇溶液峰形最好，故选择23%甲醇溶液作为稀释溶液。

2．4 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(Waters symmetry C18，5μm，4．6 mm×250 mm)，以醋酸铵高氯酸钠溶液(取醋酸铵4．0 g和高氯酸钠7．0 g，加水1300 mL使溶解，用磷酸调节pH值至2．2)－乙腈(85∶15，V/V)为流动相，检测波长291 nm，流速1．0 mL/min，柱温40℃，进样量10μL。照2．2项和2．3项下的方法分别制备供试品溶液和对照品溶液，进样分析，色谱图见图2。

图2 麻保沙星色谱图(a、对照品 b、样品)

2．5 线性关系考察 取麻保沙星对照品适量，用23%甲醇溶液超声溶解并稀释制成每1 mL中含麻保沙星1 mg的溶液，摇匀，作为对照品贮备液。分别取贮备液0．25、0．5、1、2、5、10mL，置50mL 容量瓶，用23%甲醇溶液稀释至刻度，浓度分别为5、10、20、40、100、200 μg/mL，依照浓度由小到大的次序，按上述色谱条件进样分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图3)，得线性方程 Y=4．68 ×104X+3．64 ×105，r=0．9998，结果表明麻保沙星在5～200μg/mL范围内线性关系良好。

图3 麻保沙星标准曲线

2．6 精密度试验 取麻保沙星对照品溶液，按上述色谱条件重复连续进样6次，每次进样量为10μL，测定 峰 面 积 分 别 为 2556256、2514556、2537886、2535446、2516895 和 2527081，RSD 为 0．6%，表明此方法的仪器精密度符合要求。

2．7 稳定性试验 取批号为090201的麻保沙星溶液依法配制供试品溶液，分别于0、2、4、6、12和24 h进行测定，结果，麻保沙星溶液的含量分别为102．5%、102．3%、102．1%、102．0%、102．0% 和101．8%，RSD为0．2%，表明供试品溶液稳定性良好。

2．8 加样回收率试验 分别称取麻保沙星原料0．5101 、1．2589和2．5145 g于50 mL 量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，使成为10．20 mg/mL、25．18 mg/mL和50．29 mg/mL的加样样品，依法进行测定。每个浓度连续3 d，每次做5份平行样，计算测定浓度、批内变异系数和批间变异系数。结果，方法的平均回收率为98．3% ～100．3%，批内变异系数为0．4% ～1．0%，批间变异系数为0．4% ～0．9%。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

3 讨论与小结

由于企业所提供的麻保沙星原料有粉末状和颗粒状两种，检测过程中发现，在称样量接近和溶剂相同的情况下，粉末状的麻保沙星易溶解，而颗粒状的麻保沙星很难溶解，甚至不能溶解，但是，当把颗粒磨成粉末时，则易溶解。因此，在加样回收率试验中所加的麻保沙星为粉末状或颗粒磨成的粉状，以确保试验准确可靠。

本文建立了HPLC法测定麻保沙星溶液含量的方法，方法平均回收率为98．3% ～100．3%，批内变异系数为0．4% ～1．0%，批间变异系数为0．4% ～0．9%。结果表明，该方法操作简便，结果准确、可靠，适用于麻保沙星溶液的含量测定。

［1］ 邱银生，吴 佳．动物专用氟喹诺酮类药物研究进展简介［J］．中国兽药杂志，1998，32(3):46 －48．

［2］ 王志强，陈杖榴．动物专用氟喹诺酮为抗菌新药——麻保沙星［J］．中兽医医药杂志，2001，20(4):38 －41．

［3］ 李志伟，崔 哲，刘 波，等．高效毛细管电泳法用于麻保沙星的测定［J］．河北科技大学学报，2011，32(1):75 －77，81．

［4］ 沈慧芳，张燕红，兰仁华，等．α－三连噻吩和麻保沙星的HPLC－MS分析［J］．华南理工大学学报，2001，29(11):48－49．

［5］ 梅雪珍，李引乾，庞利娜，等．麻保沙星在山羊体内的药物动力学［J］．西北农业学报，2009，18(3):38 －41．

［6］ 黄显会，陈杖榴，张淑婷，等．麻保沙星在鸡体内的生物利用度及药物动力学［J］．中国兽医学报，2002，22(3):279 －281．