芎芷止痛颗粒的提取工艺研究

闫志芳，段秀俊，张俊英

（山西中医学院，山西 太原 030024）

芎芷止痛颗粒由川芎、白芷、黄芩、柴胡等12 味中药组成，可行气活血、通络止痛，用于血管神经性头痛属气滞血瘀者的辅助治疗。为山西瑞福莱制药有限公司的主要产品，企业曾很长时间被成品制剂中黄芩苷检测不合格而困扰，为帮助企业解决问题，实验兼顾各药味有效成分的特点，对原定水提醇沉工艺进行了改良，黄芩采用单煎，其余十一味药合煎醇沉。本文采用正交实验法对提取工艺条件进行了优化，现报道如下。

1 实验材料

Alltech 高效液相色谱仪及其工作站，LINEARUVIS-201 紫外检测器（Alltech 公司），AB135-S电子分析天平（瑞士METTLER 公司）。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯；黄芩苷（含量测定用，批号110715-200212）及甘草酸单铵盐（含量测定用，批号110731-200510）标准物购自中国药品生物制品检定所。

2 方法与结果

2.1 黄芩煎煮条件的筛选

2.1.1 正交试验 本实验以黄芩苷提取率为考核指标，加水量（A）、煎煮时间（B）、煎煮次数（C）为考察因素，每因素确定3 水平，采用L9（34）正交表安排正交试验，见表1。

表1 因素水平表

2.1.2 药材的提取 称取每份黄芩10 g，共9 份。根据L9（34）正交表的设计方案分别进行煎煮，煎煮液浓缩至稠膏，烘干，准确称量后粉碎，备用。

2.1.3 干膏中黄芩苷提取量的测定 分别称取以上9 种干浸膏粉各0.1 g，精密称定，置50 mL 容量瓶中，加入70%乙醇约40 mL，超声处理20 min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密称取干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL 含0.12 mg 的对照品溶液［1-2］。分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）为流动相，280 nm 为检测波长，HPLC 色谱图见图1。测定峰面积值，计算各个实验条件下的黄芩苷提取率，结果见表2，方差分析结果见表3。由表2、表3 可见，A、B 因素对黄芩苷的提取率影响不显著，而C 因素显著。统计结果最佳组合为A2B3C3，实际试验最佳组合为A2B2C3，将两种方案各做重复实验3 次，结果黄芩苷提取率无明显差异，从省时节能角度考虑，选择A2B2C3为最佳组合，即加水量为10 倍，煎煮时间为1.0 h，煎煮次数为3 次，黄芩苷提取率约75%左右。

图1 黄芩工艺考察HPLC 色谱图

表2 黄芩单煎正交试验结果

表3 黄芩单煎方差分析结果

2.2 川芎、牛膝等十一味药材煎煮条件的筛选

2.2.1 正交试验 本试验以甘草酸提取率为考核指标，加水量、煎煮时间、煎煮次数为考察因素，每因素设计3 水平，采用L9（34）正交表安排正交试验，因素水平见表1。

2.2.2 药材的提取 按处方比例分别称取川芎、白芷、甘草等各适量，共9 份。根据L9（34）正交表的设计方案分别进行煎煮，将煎煮液浓缩至1 mL 约相当于原药材1 g，放冷，加95%乙醇使药液含醇量达70%，静置12 h，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，70 ℃干燥，准确称量后粉碎，备用。

2.2.3 干膏中甘草酸提取量的测定 分别称取以上9 种干浸膏粉约1.5 g，精密称定，置25 mL 容量瓶中，加入流动相22 mL，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）30 min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液［3-4］。另取干燥至恒重的甘草酸单铵盐，加流动相制成每1 mL 含0.2 mg的对照品溶液（折合甘草酸为每1 mL 含0.195 9 mg）。分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵溶液（含3.03%冰醋酸）（67∶33）为流动相，250 nm 为检测波长，HPLC 色谱图见图2，测定峰面积值，计算各个实验条件下甘草酸提取率，结果见表4，方差分析结果见表5。

图2 群药工艺考察HPLC色谱图

表4 他药合煎正交试验结果

表5 他药合煎方差分析结果

由表4、表5 可知，A、C 因素对甘草酸提取率影响显著，而B 因素不显著。统计结果最佳组合为A2B2C2，实际试验最佳组合为A2B2C3，将两种方案各做重复实验3 次，结果甘草酸提取率没有明显差异。从省时节能角度考虑选择A2B2C2为最佳组合，即加水量为10 倍，煎煮时间为1.0 h，煎煮次数为2 次，该条件下甘草酸转移率约45%左右。

3 讨论

芎芷止痛颗粒为山西瑞福莱药业有限公司产品，原工艺采用了水煎醇沉处理，但在成品制剂中黄芩苷检测不合格。考虑其主要原因是黄芩苷溶于热水而在冷水及冷乙醇中溶解度很小，原工艺的醇沉处理造成了黄芩苷大量损失。实验曾初步设计全方水煎而不醇沉，但出膏率近50%，服用量过大。为既解决黄芩提取问题又兼顾服用量问题，实验选择了黄芩单煎，其余十一味药水提醇沉处理，并对提取条件进行了优化，从研究结果看选定的提取工艺既保证了制剂疗效，又保证了成品制剂质量符合要求。

本实验提示了含黄芩中成药的制剂原则。如果黄芩在处方中起主要治疗作用，或黄芩苷是含量测定的主要药效成分或指标性成分，在制剂工艺过程中必须考虑黄芩苷的溶解度问题，避免冷处理对黄芩苷造成的大量损失。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：282-283.

［2］耿红梅，王广庆，段春改，等.当归拈痛丸的鉴别及黄芩苷的测定［J］.华西药学杂志，2007，22（6）：673-675.

［3］裴妙荣，段秀俊，裴香萍.酸碱对药附子与甘草在四逆汤中配伍的化学研究［J］.中国中药杂志，2009，34（16）：2 047-2 050.

［4］裴香萍，段秀俊，裴妙荣.酸碱对药麻黄与甘草在麻杏石甘汤中配伍的化学研究［J］.中国中药杂志，2009，34（19）：2 466-2 468.