正交试验法优选绿原酸提取工艺探讨

王爱萍，徐今宁

（河北北方学院附属第一医院，河北 张家口075000）

金银花和蒲公英均为常用中药，前者具有清热解毒、疏散风热之功效，后者具清热解毒、消肿散结、利尿通淋之功效[1]。绿原酸（chlorogenic acid）是二者的主要活性成分，具有显著的清热解毒和抗菌消炎作用。近年来研究发现，绿原酸还具有利胆、抗菌、降压、抗氧化、抗突变及抗肿瘤等多种药理作用[2－3]。绿原酸在醇中具有可溶性，因此，在金银花和蒲公英的提取工艺过程中，采取醇提法。为保证绿原酸的提取完全，本实验对醇的浓度、加醇量、回流时间及回流次数通过正交设计进行优化，为金银花和蒲公英中绿原酸的提取制备工艺提供科学依据。

1 仪器与试剂

TU－1901紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；BS210S电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753－200413）；金银花、蒲公英等（购自河北省张家口市张垣饮片有限公司）；实验用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计

以绿原酸为指标，因绿原酸在醇中具有可溶性，故确定考察因素为乙醇的浓度、加醇量、回流时间、回流次数，按4因素3水平进行L9（34）正交设计。因素及水平见表1。

表1 因素水平表

2.2 绿原酸的提取

精密称取金银花和蒲公英（1∶1）样品9份，每份10g，按正交试验设计进行绿原酸的提取（表2），合并提取液并过滤、回收乙醇、浓缩得浓缩液50mL。取浓缩液10mL于50mL量瓶中，加75%乙醇稀释至刻度，作为供试液，备用。

2.3 绿原酸的含量测定

2.3.1 溶液的制备与测定波长的选择 取绿原酸对照品10.0mg于50mL量瓶中，75%乙醇至刻度，作为对照品溶液。以75%乙醇为空白，将对照品溶液在紫外可见分光光度计上进行光谱扫描[4]，测得的最大吸收在327nm处，故选择检测波长为327nm。

2.3.2 标准曲线制备 精密吸取绿原酸对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0mL分别置50mL量瓶中，加75%乙醇至刻度，混匀。按分光光度法，在327nm处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，质量浓度C（mg·mL－1）为横坐标，进行线性回归，其回归方程为A＝0.106C＋13.3，r＝0.9991（n＝6）。结果表明，在8～48μg浓度范围内，浓度与吸收值线性关系良好，见图1。

2.3.3 样品测定 取供试品溶液依法在327nm处测定吸光度，代入回归方程，计算绿原酸含量，结果见表2。

图1 绿原酸测定的标准曲线

表2 L9（34）正交试验表及结果

由表2可知，以绿原酸为考察指标时，金银花和蒲公英中绿原酸提取工艺的影响规律为A＞D＞C＞B，A因素对提取工艺的影响非常显著，即乙醇浓度是影响提取工艺最大的因素。

3 讨 论

3.1 金银花、蒲公英常同时用于中草药及中药复方制剂，用于抗菌、抗病毒、清热解毒。其主要活性成分均为绿原酸，目前绿原酸已成为中药制剂质量控制的主要指标之一。

3.2 正交试验证实乙醇浓度是影响提取工艺最大的因素。不同浓度的乙醇溶液透过细胞壁和解吸有效物质的能力是不同的，通常75%乙醇溶液解吸效果最好，解吸效果越好，得率越高。故选75%乙醇作为提取溶剂。

3.3 通过正交试验法对金银花和蒲公英中绿原酸的提取工艺进行优化，正交结果分析后得到最佳因素水平为A1B1C3D2，即75%醇浓度、加醇量为药材10倍量、回流时间为1.5h、回流次数为2次。

[1]李红梅，张榕，常东胜.高效液相色谱法测定蒲公英提取物中绿原酸含量[J].药物分析杂志，2009，29（7）：1230－1232.

[2]沈奇，赵厚民，张卫明，等.蒲公英绿原酸提取分离工艺的研究[J].食品科学，2006，27（7）：140－144.

[3]李喜凤，郝哲，邱天宝.蒲公英中有机酸类成分的提取工艺研究[J].中成药，2011，33（2）：262－265.

[4]李娜，高晓燕，范强，等.金银花提取液中绿原酸的快速定量[J].中国中药杂志，2007，32（4）：312－314.