蒙药阿那日五味漂浮片提取工艺的研究

周旻昱 王跃武

(1.内蒙古医科大学附属医院，内蒙古 呼和浩特 010010;2.内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010010)

阿那日五味散原处方收载于中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册，由石榴、肉桂、砂仁、荜茇、干姜5味药材组成，具有温胃、清食作用，用于胃脘寒痛，清化不良，肾寒腰痛之功效［1］。经多年临床使用验证，对消化系统疾病有着独特的疗效。阿那日五味散传统剂型为散剂。散剂存在服用剂量大，服用剂量不准确，挥发性有效成分容易丢失等缺点。本课题旨在完成阿那日五味漂浮片提取工艺和制备工艺研究。文献报道，处方中石榴［2］的主要成分有维生素和类黄酮、没食子酸、氨基酸、矿物质、鞣花酸、脂肪酸、多酚等。肉桂［3］的主要成分有挥发油、桂皮醛、桂皮酸、醋酸树皮酯、多酚类等。荜茇［4］的主要成分有生物碱、酰胺类、挥发油、木脂素类、萜类、甾醇类等。砂仁［5］的主要成分有挥发油类、皂苷类、黄酮苷类、有机酸类等成分。干姜［6］的主要成分有挥发油类、B－谷甾醇、棕榈酸、环丁二酸酐、胡萝卜苷等成分。综上所述，阿那日五味漂浮片原处方药材中含有挥发油，水溶性成分和醇溶性成分。所以，本课题设计阿那日五味漂浮片的提取工艺为:使用二氧化碳超临界萃取方法提取肉桂、荜茇、砂仁、

干姜中的挥发油，收集挥发油，进行环糊精包合，包合物待用。药材残渣与石榴一起进行乙醇提取，提取液浓缩，干燥，粉碎，备用。药材掺渣再进行水提取，水提液醇沉，过滤，浓缩，干燥，粉碎，备用。本实验就阿那日五味漂浮片的醇提工艺和水提取工艺进行了详细论述。

1 材料，仪器与试剂

1.1 仪器:DHT型磁力搅拌恒温电热套(山东荷泽石油化工学校仪器设备厂)，P1201高效液相色谱仪(大连依利特科学仪器有限公司)。

1.2 药材:石榴、砂仁、干将、荜茇、肉桂均购于内蒙古自治区凯蒙药业。胡椒碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110775－201104);没食子酸对照品，(中国药品生物制品检定所，批号:110831－201204)。

2 实验方法与结果

2.1 正交试验优选醇提工艺

2.1.1 正交试验因素水平的确定:根据生产实际及文献报道，选取乙醇浓度、加液量、提取时间、提取次数作为考察因素，每个因素设计3个水平，见表1。

表1 正交试验因素水平表

2.1.2 实验内容:按阿那日五味散原处方称取9份样品，每份样品由石榴10g、砂仁6g、干姜4g、荜茇4g、肉桂6g组成，按照L9(34)正交表，加乙醇，回流提取，过滤，回收乙醇，定容至100mL容量瓶中。

2.1.3 色谱条件:色谱柱:HYPERSIL C18 柱(4.6mm ×200mm，5μm)，大连依利特科学仪器有限公司;流动相:甲醇:水(V:V=75:25);流速:1.0mL·min－1;检测波长:343nm;柱温:室温。

2.1.4 标准曲线的绘制:精密称定胡椒碱标准品5.1mg，置10mL容量瓶中，加无水乙醇溶解，用水稀释至刻度，摇匀。取上述制备的标准溶液 0.25mL、0.5mL、0.75mL、1.0mL、1.25mL，分别置于5mL棕色容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，备用。精密量取各胡椒碱标准溶液10.0μL进样，测定峰面积，以进样浓度X(μg·mL－1)为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=16176+14849435X，r=0.9999。结果表明胡椒碱在 25.5 ～127.5μg·mL－1范围内峰面积与进样浓度具有良好的线性关系。

样品溶液的制备与含量测定:将九份样品分别过滤，精密量取续滤液5mL置100mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取各样品溶液10.0μL，注入液相色谱仪中，测定峰面积，计算胡椒碱含量，测定结果见表2。

2.1.5 醇提最佳条件的确定:正交试验结果分析见表2。对正交试验结果进行方差分析见表3。

综合正交试验直观分析和方差分析结果可知:阿那日五味漂浮片最佳醇提工艺为A2B1C2D3，即:乙醇浓度为60%，加液量为8倍，回流提取3次，每次1.5h;各因素对胡椒碱提取率的影响大小顺序为D＞B＞A＞C，但每个因素各水平之间无显著性差异。

表2 正交试验结果分析表

表3 方差分析表

2.2 正交试验优选水提取工艺

2.2.1 正交实验因素水平的确定:根据生产实际及文献报道，选取加水量、回流时间、回流次数作为考察因素，每个因素设计3个水平，见表4。

表4 正交实验因素水平表

2.2.2 实验内容:按阿那日五味散原处方称取九份样品，每份样品由石榴10g、砂仁6g、干姜4g、荜茇4g、肉桂6g组成，按照L9(34)正交表，加水，回流提取，过滤，浓缩，定容至100mL容量瓶中。

2.2.3 色谱条件:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6mm×200mm，5μm)，大连依利特科学仪器有限公司;流动相:0.2%的甲醇乙腈溶液－0.1%磷酸0.1%的三乙醇胺水溶液(V:V=2:98)流速:1.0mL·min－1;检测波长:273nm;柱温:室温

2.2.4 标准曲线的绘制 :精密称取没食子酸标准品0.98mg，置10mL容量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，摇匀，精密量取2.5mL，置25mL容量瓶中，加50%甲醇溶液至刻度，摇匀，得9.8μg·mL－1的标准溶液。精密吸取上述标准溶液 0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，置 5mL 容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度。精密量取各没食子酸标准溶液 10.0μl进样，测定峰面积，以进样浓度 X(μg·mL－1)为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=2052+50929X，r=0.9996。结果表明没食子酸在0.39～1.96μg·mL－1范围内峰面积与溶液浓度具有良好的线性关系。

2.2.5 样品溶液的制备及含量测定:将9份样品溶液摇匀，分别精密量取1mL至100mL容量瓶中，加水定容。然后再分别精密量取1mL至100mL容量瓶中，加水定容。吸取每份样品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算没食子酸含量，测定结果见表5。

2.2.6 水提最佳工艺条件的确定:正交实验结果分析见表5。对正交实验结果进行因素方差分析，见表6。

表5 正交试验结果分析表

表6 方差分析表

综合正交试验直观分析和方差分析结果可知:阿那日五味漂浮片最佳水提取工艺为A3B2C3，即:加入12倍量的水，回流提取3次，每次2h;各因素对没食子酸提取率的影响大小顺序为C＞A＞B，其中C因素各水平之间有显著性差异。A因素、B因素各水平之间无显著性差异。

3 讨论

蒙医药有着悠久的历史，是在蒙古民族传统医药基础上汲取了藏汉等民族医药，以及印度医药学理论的精华而形成的，具有独特医药理论和治疗经验的医药体系，在我国民族医药中占有重要地位。蒙医药的现代化不仅是蒙医药发展的迫切需求，更是弘扬蒙古族民族文化的重要组成部分。

本实验根据药材所含有效成分的理化性质，选择了科学合理的提取工艺，同时，运用正交实验设计方法，对提取工艺进行了优化。本实验研究所得的最佳提取工艺确保了药材有效成分提取完全，为阿那日五味漂浮片的研制提供了科学的依据。

阿那日五味散传统剂型为散剂。散剂存在服用剂量大，服用剂量不准确，挥发性有效成分容易丢失等缺点。将剂型改革为胃内漂浮片，可以增加药物在胃内的滞留时间，增加药物的释放和吸收，提高药物的生物利用度，还可以对消化系统疾病实现靶向治疗作用。同时，可以实现减少服用量和提高服用剂量的准确性。

［1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准－蒙药分册［M］，1998:118.

［2］任彦飞，曲玮，梁敬钰，等.石榴的化学成分及抗前列腺癌的研究进展［J］.海峡药学，2011，23(9):7 －11.

［3］赵凯，薛培凤，屠鹏飞，等.肉桂的化学成分及其生物活性研究进展［J］.内蒙古医科大学学报，2013，35(1):63－74.

［4］李瑞和，苏日纳，郭林云，等.荜茇化学成分与药理作用研究概况［J］.中国民族医药杂志，2006，13(3):73－74.

［5］胡玉兰，张忠义，林敬明，等.中药砂仁的化学成分和药理活性研究进展［J］.中药材，2005，28(1):72 －74.

［6］营大礼.干姜化学成分及药理作用研究进展［J］.中国药房，2008，19(18):1435－1436.