2012-2013年浙江省黄瓜绿斑驳花叶病毒病的检测及防控

李艳敏，臧宪朋，王荣洲，林云彪，周晓红

(1.浙江省植物保护检疫局，浙江杭州 310020;2.宁波出入境检验检疫局，浙江宁波 315000;3.衢州市柯城区植物保护与检疫站，浙江衢州 324000)

黄瓜绿斑驳花叶病毒 (cucumber green mosaic mottle virus，CGMMV)为烟草花叶病毒属，是我国进境植物检疫性有害生物，也是全国农业植物检疫性有害生物［1］，其危害严重、致病性强、防治难度大，严重威胁西瓜、黄瓜、南瓜等葫芦科作物生产［2］。感病作物一旦染病不但减产，而且因果实味苦不能食用，一般损失可达15% ～30%，严重的甚至绝收。我国于2002年从入境的植物种子中截获该病毒，此病于2006年在辽宁省盖州市首次发生，至2012年已在我国辽宁、上海、江苏、浙江、安徽、湖北、湖南、广东、广西、海南等10省 (市)发生。浙江省2011年7月首次在温岭、乐清两地发现并确诊，之后浙江省连续3年开展疫情普查，并对各地采集疑似样品送实验室进行室内检测，以便及时确诊，及早防控。

1 材料与方法

1.1 材料

病毒检测试剂盒购自美国安德珍 (Adgen)生物公司，送检样品包括西瓜种子、砧木种子、西瓜和甜瓜叶片等，为浙江省内各地区送检的疑似样品。

1.2 方法

采用酶联免疫双抗体夹心 (DAS-ELISA)法，按照试剂盒说明用包被缓冲液稀释包被抗体，每孔100μL，置入一个有潮湿纸巾的塑料盒中，37℃孵育1 h;用PBST洗板3～4次，最后将孔板在干纸巾上拍干。提取1 g待测样品加5 mL常规提取缓冲液研钵中研磨，沉淀后取上清液作为待检测样品。分别将阴性、阳性对照和待检样品各100μL加入已包被孔中，4℃过夜培养 (至少16 h)，洗板3～4次，每孔加入100μL稀释好的酶标抗体，37℃温育1 h，再次洗板4～5次，每孔加入100μL浓度为1 mg·mL-1pNPP(对硝基苯磷酸钠)底物溶液，室温下避光培养1 h。用酶标仪在405 nm读取吸光度，吸光度大于阴性对照则为阳性。

2 结果和分析

2012年4-9月共检测样品249份，以西瓜叶片为主，有少量西瓜及砧木种子。其中阳性样品124个，占49.8%，温岭送检的148份样品中，阳性样品52个，检出率达35.1%。从样品类型看，叶片214份，阳性114份;种子28份，阳性6份;土壤9份，阳性4份，说明土壤带毒，但关于土壤能否用此方法检测尚无相关报道。2013年1-7月共检测样品98份，除西瓜嫁接苗、砧木种子外，还有葫芦、甜瓜、长瓜、蔓瓜、黄瓜等一些其他葫芦科作物叶片和种子，共检出阳性样品37份，检出率37.8%。其中砧木种子样品8份，阳性样品3份，检出率37.5%;西瓜嫁接苗样品39份，阳性样品16份，检出率41%。详见表1。

表1 2012-2013年浙江省CGMMV检测样品结果分布

2012年浙江省检出黄瓜绿斑驳花叶病毒病的县 (市、区)有14个，分别是温州乐清，杭州建德、萧山，嘉兴南湖，金华武义，丽水青田，舟山普陀、定海，台州温岭、路桥、黄岩、三门、临海、椒江。其中，温岭情况最为严重，发病植株的接穗品种有绿丰牌早佳8424、好利得牌早佳8424、天山牌早佳8424，砧木有京研牌京欣砧王、京研牌京欣砧1号、京研牌京欣砧冠、甬禾牌甬砧1号、神通力、京域牌威力砧2号、昌砧牌韩砧1号。带毒的瓜苗叶片多是嫁接而来。2013年的检出地中又新增了金华的浦江、磐安、东阳3地，其种植的浙蜜5号嫁接苗带病，而这些嫁接苗均来自磐安育苗场。2012年萧山、路桥、临海、乐清、南湖等一些疫点经过合理轮作、不再种植西瓜等措施，在普查过程中未再检测到发病。

3 讨论与防控建议

3.1 发病原因

温岭市种植西瓜最多，从2012-2013年检测结果看，其送检样品也最多，检出率较高，具有代表性。对照2011年中国检科院植检所检测鉴定结果，温岭市送检的19份西瓜种子样品全部为阴性，而18份砧木种子有9份呈阳性，品种为京欣砧王、京欣砧冠、京欣砧1号、神通力、韩砧1号、甬砧1号、威力砧2号等，因此，嫁接西瓜植株发病主要由砧木 (蒲瓜)种子带毒引起［3］。建德市更楼街道石岭村2012年发病面积2.4 hm2，2013年继续种植西瓜，送检样品检出率很高，这主要是由于在发病田不采取换茬轮作所致，在发病地继续种植葫芦科作物，发病概率将会提高。3.2 防控建议

对所有西瓜及砧木种子，首先应加强产地检疫，确保生产地土壤无毒，种子也必须经过高温等消毒处理，再经实验室检测安全后才可流通市场。在西瓜及砧木种子、瓜苗销售旺季开展市场检查和抽检，检查有无检疫证，还要取样带回实验室检测，对检测出带毒的种子一律禁止销售，确保市场销售的种子安全无疫病。其次做好定点监测，在西瓜种植较多的地方设置黄瓜绿斑驳花叶病毒病疫情监测点，抓好田间监控，做到“早发现、早防控”。加大宣传力度，通过科技下乡，知识入户等方式，增加农户的防控意识。再次要做好农业防治，合理轮作倒茬。对种子要及时进行消毒处理，如干热处理或药剂消毒，也可将二者结合。干热处理的方法是，把砧木种子放入40℃恒温箱中处理24 h，再72℃处理72 h，然后用清水浸泡种子4 h催芽播种。药剂消毒即将砧木种子放到10%磷酸三钠溶液中浸泡20～30 min，然后用清水洗净催芽播种。对已经发生黄瓜绿斑驳花叶病毒病的土地，第2年改种其他非寄主作物，连续2年不得再种植西瓜。黄瓜绿斑驳花叶病毒极易通过汁液摩擦、叶片接触、嫁接、农事操作等非介体传播，一旦田间出现病苗，即使比例很低，也会以此为初侵染源传播开来［4］。因此对染病植株应及早拔除并销毁，防止接触传染。

［1］ 商明清，张永江，赵文军，等.山东省黄瓜绿斑驳花叶病毒病田间调查与检测鉴定［J］.中国植保导刊，2012，32(3):50-52.

［2］ 蔡明，江冬，张丽英，等.黄瓜绿斑花叶病毒病种子处理试验研究［J］.植物检疫，2011(1):62-63.

［3］ 李云明，顾云琴，项顺尧，等.黄瓜绿斑驳花叶病毒病危害西瓜特点及防治技术 ［J］.现代农业科技，2012(7):175.

［4］ 秦碧霞，蔡健和，陆秀红，等.葫芦种子传黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测［J］.植物保护，2011，37(3):109-112.