甲拌膦高效液相色谱检测方法研究

曾勇胜，钟冬明，钟思群

（1. 化州市疾病预防控制中心， 广东 化州 525100； 2. 广州市萝岗区东区社区卫生服务中心， 广东 广州 510730；3. 广州市萝岗区卫生局（食品药品监督管理局），广东 广州 510530）

甲拌膦高效液相色谱检测方法研究

曾勇胜1，钟冬明2，钟思群3

（1. 化州市疾病预防控制中心， 广东 化州 525100； 2. 广州市萝岗区东区社区卫生服务中心， 广东 广州 510730；3. 广州市萝岗区卫生局（食品药品监督管理局），广东 广州 510530）

目的 探讨高效液相色谱法检测甲拌膦的方法。方法 采用不同的流动相、检测波长等反复测定甲拌膦的峰面积与峰高，按照规定的标准方法对本试验条件检测甲拌膦的检测限、线性范围与产品及加标回收率的实验。结果 在流动相乙腈+水（85+15）、205 nm波长，甲拌膦在5.1 min附近产生一灵敏色谱峰,线性范围为: 0.02～2.5μg，检出限为：0.005μg。结论 高效液相色谱在一定条件下测定甲拌膦的含量效果理想。

甲拌膦；高效液相色谱；检测

甲拌膦（别 名 3911；西梅脱；O,O-二乙基-S-（乙硫基甲基）二硫化磷酸酯，分子式 C7H17O2PS3）。甲拌膦是透明的、有轻微臭味的油状液体，在室温下稳定，pH 5～7时稳定，强酸（pH＜2）或碱（pH＞9）介质中，能促进水解，其速度取决于温度和酸碱度。

甲拌膦能抑制胆碱酯酶活性，造成神经生理功能紊乱。短期内接触（口服、吸入、皮肤、粘膜）大量接触引起急性中毒。表现有头痛、头昏、食欲减退、恶心、呕吐、腹痛、腹泻、流涎、瞳孔缩小、呼吸道分泌物增多、多汗、肌束震颤等。重者出现肺水肿、脑水肿、昏迷、呼吸麻痹。部分病例可有心、肝、肾损害。少数严重病例在意识恢复后数周或数月发生周围神经病。个别严重病例可发生迟发性猝死。血胆碱酯酶活性降低。

现在检测甲拌膦的国标方法是气相色谱法，本文就用液相色谱检测甲拌膦的方法条件做了分析研究。

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

1.1.1 仪器

（1）高效液相色谱仪：美国安捷伦 1200，色谱数据工作站。

（2）色谱柱：agilent zorbax eclipse XDB-C18 Analytical 4.6×250 mm，5-Micron。

（3）微量进样器：50μL。

（4）溶剂过滤器，滤膜孔径0.45μm；针式过滤器，过滤膜孔径0.45μm。

（5）超声波清洗器。

1.1.2 试剂

（1）甲拌膦标准物质（已知质量分数ω=99%）：国家农药质检中心（沈阳）。

（2）乙腈：特级，天津市大茂化学试剂厂。

（3）纯净水：新蒸二次蒸馏水。

1.2 实验方法

甲拌膦用乙腈溶解并定溶，以乙腈+水为流动相，使用以agilent XDB-C18 4.6×250 mm色谱柱，紫外可变波长检测器下对甲拌磷进分析检测。

2 结果与讨论

2.1 甲拌膦的色谱峰曲线

以乙腈+水（85+15）为流动相，流速1.0 mL/min，进样5 μL，波长205 nm的条件下，甲拌膦在5.10 min左右产生一灵敏的色谱峰，根据峰面积定量，保留时间定性。利用此峰可测定微量甲拌膦含量。

2.2 条件实验

影响甲拌膦峰面积的因素有流动相种类与组成，波长，环境温度等，其中流动相种类及波长的影响最明显。

（1）本人试验了甲醇、乙腈等溶剂，以245 nm波长，进样5 μL进行试验，结果表明，用乙腈效果较好，具体实验数据结果如表1所示，标样：720 μg/mL。

表1 甲醇与乙腈检测甲拌膦效果比较Table 1 Comparison of phorate detection results by using methanol and acetonitrile

甲醇的极性比乙腈的大，甲醇6.6，乙腈6.2，反相洗脱能力应该极性越小，洗脱能力越强，在后来的实验中，相同的溶剂与水的配比中，乙腈与水的流动相要比甲醇与水的流动相保留时间要短。从保留时间、峰面积与峰高方面考虑，用乙腈检测甲拌膦比用甲醇为流动相检测甲拌膦的效果更好。

（2）选择乙腈作为流动相溶剂后，以245 nm波长，进样5μL，乙腈与水按不同比例配制进行高效液相色谱分析测定，具体实验数据结果如表2所示：标样:720μg/mL。

表2 乙腈与水不同配比效果比较Table 2 Comparison of phorate detection results with different ratio of acetonitrile and water

从以上结果可知，流动相（乙腈+水）水的比例增加，峰面积增加不十分显著，但保留时间明显延迟，峰高也降低较多，流动相比例的变化对基线影响不明显，基线较稳定。从保留时间与峰面积及与其他峰分离的情况方面考虑，选择流动相乙腈+水（85+15）较适宜。

（3）检测波长的选择

在没有干扰的情况下用最大吸收波长来进行定量测定的话，灵敏度最高，本次试验在流动相乙腈+水（85+15）与流速1.0 mL/min的情况下，改变波长对同一浓度的甲拌磷进行高效液相色谱分析。

随着波长的减少，峰面积与峰高呈增加趋势，乙腈的溶剂强度较高，粘度较小，且截止波长(190 nm)较甲醇(205 nm)的短，更适合于利用末端吸收的检测。但用乙腈作为流动相进行检测，在200 nm以下时基线不稳，从检测效果来考，205 nm的检测波长基线平稳，峰形稳定对称，因此，选择205 nm波长作为甲拌膦的检测波长。

2.3 检测限与线性范围

2.3.1 检测限

能够定性区别与零的待测物的最低含量，定量10次进样0.005 μg甲拌磷。选取较为平缓的一段基线作为参比，放大后，记录基线噪音峰的高度，由数据结果可知，0.005 μg甲拌磷的进样量约是噪音峰的高度的3倍，可以确定用此法得出甲拌膦的检测限为0.005 μg。如果进样量为5 μL，则甲拌膦的检测限为1.0 μg/mL。

2.3.2 线性范围

在试验最佳的液相色谱分析操作条件下（乙腈（85+15），检测波长205 nm，流速1.0 mL/min）定量进样不同质量的甲拌膦样品，每个质量的样品重复测定3次，取平均值，以平均峰面积对各进样量进行线性回归，由试验结果显示，甲拌膦在进样0.02 μg到2.5μg之间呈良好的线性关系，其线性回归方程为：y=655.967x+11.3336，相关系数为0.999241，线性范围达2个数量级，如果进样量为5μL，则线性范围为4～500 μg/mL。

2.4 精密度的测定

配制40μg/mL甲拌膦标准溶液，在上述操作试验最佳测试条件下，进样5μL，连续进样10针。有测试结果计算，0.2μg甲拌膦进样的精密度相对标准偏差RSD为1.222%。在相同操作条件下，再分别连续10次进样0. 1μg与2.0μg甲拌膦样，测得的精密度为0.1μg进样的相对标准偏差RSD为2.66%，2.0μg进样的相对标准偏差RSD为0.683%。

2.5 样品测定与加标回收率测定

2.5.1 样品测定

从市场购买化州市天力化工有限公司 5%甲拌膦颗粒剂产品，准确称取1.0 g（精确到0.0002 g）样品于100 mL容量瓶中，加80 mL乙腈，在超声浴中震荡20分钟，取出冷却到室温，加乙腈至刻度，离心10 min（2 000 r/min），再吸取10 mL滤液到100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至100 mL，稀释液经0.45 μm针头过滤，滤液备用［1］。

2.5.2 加标回收率测定［2］

准确称取9份5%甲拌膦颗粒剂，每份约1.0 g（精确到0.000 2 g），每3份样品分别加0.01 g、0.05 g、0.1 g甲拌膦标准物质，加标样品按上述样品测定的方法进行样品处理后，测定未加标的甲拌膦颗粒剂中甲拌膦的含量与加标后甲拌膦的含量，具体结果如表3所示。

表3 甲拌膦颗粒剂加标回收率测试Table 3 Phorate addition standard recovery test

本次试验测定了3个不同标准的加入量，加标回收率为95.4%～103.6%，加标回收率在理想的范围内。

3 结 论

（1）用气相色谱检甲拌膦的情况较普遍，但用液相色谱检有机磷农药的状况也越来越常见，在以往的液相色谱检测甲拌膦的论文报告中，主要是用甲醇+水为流动相，但本论文用乙腈作为流动相能得到更高的检测限与更宽的线性范围，甲拌膦的检测，在本文的色谱操作条件下，会得到更加理想的测试效果。

（2）高效液相色谱用于农药及其残留物的分析有其独特的优势，如何快速、准确地进行农药残留特别是多种残留成分的分析测试，是农药残留分析有待解决的问题。随着科学技术的发展，分析手段与方法得到不断改进和提高，高效液相色谱技术也在不断发展，例如，引入3 µm填料的色谱柱及能分离几何异构体和光学异构体的手性柱［3］。随着科技的发展，技术的日益完善，较之以前色谱分析的方法有了很大程度的提高，很多科学家在对于一些分析上的难点有了新的突破，这样一个不断完善的技术在以后的社会发展中一定会扮演着一个重要的角色。液相色谱分析有机磷农药将会越来越普及［4］。

［1］吕建军.甲拌磷颗粒剂的液相色谱分析[J]. 农药科学与管理, 1998(增刊)：29-30.

［2］张虹.加标回收率的测定和结果判断[J]. 石油与天然气化工,2000，2(1)：50-52.

［3］朱正武.高效液相色谱法在农药残留分析中的应用[J]. 化学工业与工程技术，2004, 25(6)：51-53.

［4］杨茜 液相色谱法在有机磷农药检测中的应用前景[J] .十堰农业信息网, 2013（4）：37-40．

图2 MCM-41介孔材料TEM图Fig.2 TEM photo of MCM - 41 mesoporous materials

3 结 论

本方法采用MCM-41介孔材料作为吸附剂，固相萃取水样中的微量砷，实验对仪器条件、洗脱酸度、吸附及洗脱速率等条件进行优化，达到了微量砷的分离富集的效果，从而准确的测定废水中砷的含量。但是MCM-41介孔材料的选择性还需要进行进一步的研究，因此对MCM-41介孔材料进行修饰从而有选择性的吸收废水中的待测元素是未来的研究方向之一。

参考文献：

［1］许俊翠,卫艳新.砷的广度分析方法进展[J].安徽教育学院学报,2007,11,25(6):70-72.

［2］吴嘉钰,孙嘉彦,陈鹤飞，等. 二硫代二安替比林甲烷吸光光度法测定钒触煤中砷[J]. 理化检验(化) ,2013,29( 6) : 351.

［3］牛建军,汪炳武. 饮料中总砷的测定及其形态分析[J]. 分析试验室, 2011, 11( 3) : 5.

［4］周俊明, 龚育,李吉鹏等. 硼氢化钠乙醇溶液- 有机体系氢化物发生原子荧光光谱法测定饮用水中痕量砷[J]. 分析化学, 2011, 19( 4) : 44.

［5］覃维荣, 黄佩芳. 双叉同时进样- 火焰氢化法原子荧光测定钒触煤中砷[J].岩矿测试, 2012, 11( 3) : 290.

［6］Wei Zeng,Xue-FengQian,Jie yin,Zi-KangZhou.The drug delivery system of MCM-41 materials via Co-condensation synthesis. Materials Chemistry and Physics , 2006,97:437-441.

Study on Detection of Phorate by High Performance Liquid Chromatography

ZENG Yong-sheng1，ZHONG Dong-ming2，ZHONG Si-qun3
（1. Huazhou Center for Disease Control and Prevention, Guangdong Huazhou 525100，China；2. Guangzhou City Luogang District Eastern Community Health Service Center, Guangdong Guangzhou 510730，China；3. Guangzhou City Luogang District Health Bureau , Guangdong Guangzhou 510530，China）

HPLC method was used to determine phorate, peak areas and peaks were obtained by using different mobile phase and detection wavelength. In accordance with the provisions of the standard method, the detection limit of phorate was determined as well as the linear range of products, and recovery rate experiments were carried out. The results show that, when the mobile phase is acetonitrile and water (85+15), the wavelength is 205 nm, phorate produces a sensitive chromatographic peak near 5.1 min, and the linear range is 0.02～2.5 μg, the detection limit is 0.005 μg. So HPLC method has ideal determination effect for phorate under certain conditions.

Phorate; High performance liquid chromatography; Testing

O 657

A

1671-0460（2014）11-2466-03

2014-09-03

曾勇胜（1977-），男，广东化州人，理化检验中级职称，2002年毕业于广东药学院卫生检验专业，研究方向：从事检验检测工作。邮箱：zys28@126.com。