THH对胶原诱导性关节炎大鼠模型病理评分的影响

张帆邹惠美崔道林晏廷亮董超

THH对胶原诱导性关节炎大鼠模型病理评分的影响

张帆①邹惠美①崔道林①晏廷亮①董超①

目的：探讨昆明山海棠（tripterygium hypoglaucum hutch，THH）对胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis，CIA）大鼠模型关节病理评分的影响。方法：60只Wistar大鼠（雌雄各30只），将其随机分为6组：空白组、模型组、地塞米松治疗组以及THH高、中、低剂量治疗组，连续给药30 d，观察大鼠关节病理的改变。结果：给药30 d后，HE染色显示模型组产生多层滑膜细胞，大量炎症细胞和血管翳生成；在3个THH治疗组中中剂量的治疗效果最好，镜下只见2～3层滑膜细胞，少见炎症细胞。结论：HE染色结果显示THH对CIA模型有积极的治疗作用。

昆明山海棠； 胶原性诱导关节炎； 类风湿性关节炎

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种可以引起多个关节破坏、以滑膜组织的慢性炎症为特点的自身免疫性疾病，由于目前临床尚缺乏治疗RA的有效方法，导致许多患者最终形成关节畸形，这严重影响了患者的生活质量[1-2]。昆明山海棠是一种传统中草药，具有抗炎和调节免疫等多种作用，目前该药在临床上用于治疗RA等多种自身免疫性疾病取得了良好的效果[3]。本文通过CIA大鼠模型在THH作用下的病理学改变来验证THH对RA的确切疗效，现具体分析如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物与试剂 健康Wistar大鼠60只，雌雄各30只；昆明山海棠；地塞米松；牛Ⅱ型胶原；不完全弗氏佐剂。

1.2 实验方法

1.2.1 动物的分组、标记、造模 10只大鼠设为空白组（A组）不予任何处理。50只大鼠造模后随机分为5组，每组10只，分别为模型组（B组），地塞米松治疗组（C组），以及THH高（D组）、中（E组）、低（F组）剂量治疗组。每组均给予10%水合氯醛进行腹腔注射，麻醉后在大鼠尾根部皮肤分5处皮内注射乳化胶原共0.5 mL，每处注射0.1 mL。首次免疫第14天后相同方法等量加强免疫一次。

1.2.2 给药 首次免疫第28天后开始药物治疗。A组不予任何处理。而B、C、D、E、F各组则按照每100克大鼠体重0.2 mL的剂量分别灌注蒸馏水，0.04 mg/mL地塞米松灌注液，200 mg/mL、150 mg/mL和100 mg/mL的高中低三个剂量的THH灌注液，灌胃1次/d，连续30 d。

1.2.3 标本制作 所有大鼠于给药第30天后处死，取大鼠踝关节于4%多聚甲醛中固定12 h，然后放入10%乙二胺四乙酸中脱钙。脱水包埋切片，行HE染色。

1.2.4 病理学评分 方法参照Tsubaki等[4]于2005年提出的病理学评分。

1.3 统计学处理 采用SPSS 16.0软件对所得数据进行统计分析；计量资料用（±s）表示，多组间均数的比较应用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠踝关节病理学改变 各组大鼠踝关节病理学改变。

2.1 A组 滑膜由1～2层滑膜细胞组成，镜下未见炎症细胞浸润及血管增生，软骨表面光滑，未见骨破坏，关节结构完整。

2.2 B组 滑膜细胞增生明显，形成10～15层滑膜层，并伴有血管翳形成。滑膜组织增生并呈绒毛状伸入关节腔内，关节腔内有大量炎症细胞浸润，关节表面透明软骨与骨组织发生破坏，局部纤维化并相互粘连，关节结构被破坏。

2.3 C组 该组在所有治疗组中的效果最佳，滑膜细胞层数基本处于正常水平，血管翳和炎症也基本消失，偶见造模阶段引起的少许骨组织破坏。

2.4 D组 该组对于模型有一定的抗炎作用，但与C组和E组相比，治疗效果稍显逊色。镜下少见血管增生和炎症细胞浸润，滑膜细胞层数相比空白组稍有增加，达到5～6层，少见软骨与骨组织破坏。

2.5 E组 该组在所有THH治疗组中效果最好，镜下只见2～3层滑膜细胞，很少见到炎症细胞和血管增生，基本没有发生软骨与骨组织破坏。

2.6 F组 镜下仍然可见数层滑膜细胞增生组织，有少许炎症细胞浸润同时伴有血管增生，关节骨组织破坏明显，相对于其他治疗组治疗效果不太理想，具体病理学评分见表1。

表1 各组大鼠滑膜病理学评分（±s） 分

表1 各组大鼠滑膜病理学评分（±s） 分

*与A组比较，P＜0.05；△与B组比较，P＜0.05

组别 总分 滑膜增生 炎症细胞浸润 新生血管A组（n=10） 0.089±0.139△ 0.011±0.001△ 0.022±0.011△ 0.013±0.002△B组（n=10） 0.769±0.078* 0.481±0.001* 0.151±0.041* 0.281±0.160*C组（n=10） 0.514±0.129*△ 0.045±0.149△ 0.081±0.021△ 0.117±0.152△D组（n=10） 0.612±0.086*△ 0.287±0.171*△ 0.948±0.027* 0.208±0.141*E组（n=10） 0.546±0.129*△ 0.311±0.128*△ 0.010±0.003△ 0.198±0.149*F组（n=10） 0.597±0.108*△ 0.339±0.152*△ 0.053±0.017△ 0.244±0.171*

3 讨论

RA是一种病因未明的慢性全身性自身免疫性疾病，以对称性、多关节滑膜炎和关节外病变为主要临床表现，主要累及手、腕、足等小关节，反复发作，呈对称分布[5]。传统治疗RA的药物主要包括激素类和非甾体类抗炎药等药物，但长时间服用这些药物会带来类似骨髓抑制等一些较为严重的毒副反应[6]，这也是许多患者无法坚持服药治疗的主要原因。因此临床上治疗RA的药物虽然很多，但至今尚没有一种特效的治疗方法，所以目前对于RA的治疗依然只能以减轻患者疼痛、降低病理损害和减缓关节畸形为治疗的主要目标。

昆明山海棠是一种与雷公藤同属的传统中草药，与雷公藤相比，昆明山海棠具有毒性更小、安全范围更大的优点，目前在临床上主要用于治疗RA等多种自身免疫性疾病，效果显著[7-8]。胶原诱导性关节炎以多发性关节炎性改变并伴有关节损害为特征，是国内外较为理想的类风湿关节炎动物模型之一，大鼠则因饲养容易，实验成本低廉而成为首选[9]。此种大鼠模型的病理特征甚至包括某些临床表现都非常接近于人类RA[10]，因此本实验采用了这种动物模型。

实验结果显示，在所有治疗组中地塞米松的治疗效果最好，这也是肯定了这一经典药物治疗RA的有效性。同时在THH高中低三个不同剂量治疗组中，中剂量的治疗效果最好，这就提示在临床用药时应该注意人体用药剂量的把握。总之从HE染色结果可以看出，模型建立成功，镜下出现关节滑膜细胞增生、炎症细胞浸润、血管增生和软骨及骨质破坏等病理改变，所有THH治疗组与模型组比较差异均有统计学意义（P＜0.05），说明昆明山海棠对于大鼠模型的治疗是有效的，这也验证了THH在临床上对于治疗RA的积极作用。

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The THH’s Effect on Pathological Score of Rats with CIA

/ZHANG Fan，ZOU Hui-mei，CUI Dao-lin，et al.// Medical Innovation of China，2014，11（08）：013-014

Objective：To explore the THH’s effect on pathological score of rats with CIA.Method：Sixty wistar rats （half male and half female） were randomly divided into six groups：the control group，the model control group，the dexamethasone treatment group，three treatment groups of high-dose，moderate-dose，low-dose of THH.The pathological changes of the rats were observed on the treatment for 30 days.Result：After the treatment for 30 days，HE staining revealed that the model control group were full of layers of synovial cells，a large number of inflammatory cells and vascular pannus were formed.The effect of moderate-dose group was the best among the three treatment groups of THH，there were only 2-3 layers of the synovial cells，inflammatory cells rarely exist.Conclusion：HE dyeing results confirm obvious curative effect of THH for CIA model.

Tripterygium hypoglaucum hutch； Collagen induced arthritis； Rheumatoid Arthritis

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.08.006

2013-12-26） （本文编辑：欧丽）

①曲靖医学高等专科学校 云南 曲靖 655000

邹惠美

First-author’s address：Qujing Medical College，Qujing 655000，China