参麦注射液细菌内毒素检查方法的探讨

褚奇星

参麦注射液细菌内毒素检查方法的探讨

褚奇星①

目的：考察参麦注射液细菌内毒素检查方法的可行性，加强对参麦注射液的质量监控。方法：采用细菌内毒素检查法，考察参麦注射液对鲎试剂的干扰试验，并检测供试品细菌内毒素的限度。结果：对样品进行1∶4稀释，用0.125 EU/mL鲎试剂无干扰，与家兔热源检查法结果一致。结论：与家兔法检查本品热原相比，细菌内毒素法可行性高，此方法避免了家兔热源检查法操作的复杂性，且灵敏度高、方便快捷。

鲎试剂； 参麦注射液； 细菌内毒素检查法

参麦注射液为红参和麦冬提取有效成分制成的纯中药注射液制剂，其中主要成分人参皂苷，是红参生理活性的物质，还含有机酸、甾醇、酯类和维生素类等[1]。从保健功能上讲，红参具有大补元气、益血、抗氧化、抗衰老、增强免疫力的作用。在药用功能方面，可以祛湿、治疗气虚、体寒症，如多汗、胃下垂、胸闷、心绞痛、冠心病、心血管等疾病；再如阳气不足、冬季畏寒、老人早衰、妇女内分泌紊乱等。麦冬的化学成分为甾体皂苷、异黄酮类、多糖、氨基酸等，具有抗心肌缺血、抗血栓形成、耐缺氧、抗衰老、降血糖等功效[2-4]。

参麦注射液具有益气固脱，养阴生津，生脉的作用。临床上用于治疗气阴两虚型休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒细胞减少症。能提高肿瘤患者的免疫机能，与化疗药物合用时，有一定的增效作用，并能减少化疗药物所引起的毒副作用[5-6]。参麦注射液标准热源检查法为家兔法，但操作繁琐，灵敏度低，对细菌内毒素的含量不能准确检测。本文参照《中国药典》2005版附录动态比浊发建立参麦注射液细菌内毒素检查法的实验设计，以此法取代家兔法，用以检测参麦注射液细菌内毒素的限度，同时对其可行性分析并进行相关研究[7-10]。

1 材料与方法

1.1 实验仪器 动态浊度鲎试剂（湛江安度斯生物有限公司，标示灵敏度0.125 EU/mL，批号130119，1.25 mL/支），细菌内毒素检查用水（中国药品生物制品检定所，批号130209，5 mL/支）；细菌内毒素工作标准品（湛江安度斯生物有限公司，批号121227，100 EU/支）；参麦注射液（雅安三九药业有限公司，批号121209，121217，130122；规格10 mL/支）BET-72细菌内毒素测定仪（上海昨非实验室设备有限公司），QL-901涡旋混合器（北京恒奥生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 细菌内毒素限值（L）的确定 按照细菌内毒素限值（L）公式L=K/M[1]，K为依照规定给药途径，每人每公斤每小时最大可接受的细菌内毒素剂量，即致热阈。2010版中国药典规定我国内毒素标准品对人或家兔的致热阈为5.0 EU/（kg·h），M为人每千克体重每小时给药最大剂量（药品致热原检查剂量），参麦注射液热原检查剂量为10 mL/kg。细菌内毒素理论值（L）计算出为：L=0.5 EU/mL，本研究即采用0.5 EU/mL为细菌内毒素热源反应阈值。

1.2.2 鲎试剂灵敏度复核 按照2010年版中国药典附录细菌内毒素检查法的要求，进行鲎试剂灵敏度的复核[3]。以细菌内毒素检查用水溶解稀释细菌内毒素标准品工作溶液，混合涡旋混合15 min，后以1∶2分别稀释制备成以标示灵敏度为中间值的稀释液4份，每一步稀释后均混合涡旋30 min。每一浓度平行4支。

1.2.3 样品最大有效稀释倍数（MVD） 最大有效稀释倍数即在实验中供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒素限值的检测。依照公式MVD=cL/λ求算[2]，其中L即参麦注射液供试品细菌内毒素限值，λ为鲎试剂标示灵敏度，即最低内毒素浓度，本动态比浊鲎试剂标示灵敏度为0.125 EU/mL，参麦注射液的最大有效稀释倍数根据L值即可求出为MVD=0.5/0.125=4。

1.2.4 干扰试验 按2010年版中国药典附录进行干扰试验[3]。将参麦注射液（批号121209）制备成原液，1∶2，1∶4，1∶8，1∶16五个系列浓度，每个浓度分别取0.1 mL样品进行干扰试验检查。分别制备两只阴性对照管（细菌内毒素检查用水和供试品溶液），以1：T（T为稀释倍数）稀释倍数样品分别对两批鲎试剂作干扰试验。

2 结果

2.1 鲎试剂灵敏度复核结果 实验结果为两批鲎试剂反应相同，灵敏度均为0.125 EU/mL。结果如表1，符合规定。

表1 鲎试剂灵敏度复核结果

2.2 参麦注射液干扰试验结果 结果见表2。

表2 参麦注射液干扰试验结果

2.3 样品的动态比浊法鳖实验细菌内毒素检查结果 本供试品以细菌内毒素检查用水1∶4稀释，分别对其采用两批鲎试剂检测分析，结果如表3所示，所得结果一致。

表3 两批样品的细菌内毒素鲎试剂检测结果

2.4 家兔法热原检查 按2010年版中国药典操作[3]，所测3批样品的细菌内毒素鲎试剂检测结果均符合规定。

3 讨论

对于中药注射剂参麦注射液而言，考虑到其作为中草药的成分复杂性，以及来源、工艺等相关原因，干扰因子的变化性不可避免，因此细菌内毒素限值必须严格控制。课题研究中，将本供试品采用多倍稀释的方法进而提高实验的稳定性与可靠性。以细菌内毒素检查用水1∶4稀释本供试品，结果表明，对标示灵敏度为0.125 EU/mL的不同厂家鲎试剂均无明显干扰作用，参麦注射液热源的控制可用细菌内毒素检测法来进行。以1∶4稀释本品后，再以标示灵敏度为0.125 EU/mL的鲎试剂用以检测参麦注射液的细菌内毒素，所得结果与家兔法热原检查一致。

因此，以动态浊度法进行细菌内毒素测定可取代家兔法检查参麦注射液热原，且方法灵敏度高、准确、快捷，在医院临床快速检查热原时，有参考应用价值。

[1]王芳芳，赵亮，高燕军，等.参麦注射液药理作用与临床[J].承德医学院学报，2007，24（2）：189-191.

[2]周汉良，陈季强.呼吸药理学与治疗学[M].北京：人民卫生出版社，1998：67-36，524-537.

[3]张莉，王保和，胡晶，等.参麦注射液治疗小儿病毒性心肌炎的系统评价[J].中国循证医学杂志，2010，15（6）：70-76.

[4]叶笃筠，吴萍，牛汝楫，等.参麦注射液改善疲劳膈肌舒缩功能的实验研究[J].中国中西医结合杂志，2000，20（9）：679-681.

[5]卫生部药典委员会.卫生部药品标准中成方制剂[S].第18分册：169-171.

[6]高宁，罗志琴，谢广茹，等.参麦注射液上市后安全性再评价研究[J].医药导报，2011，16（7）：131-132.

[7]细菌内毒素检查法.中国药典2010年版二部：附录.

[8]王红鑫，张志明，郑有维，等.比色法测定脑复康片的含量[J].药物分析杂志，1996，15（2）：127-128.

[9]陈华龙，王莉蓓，姜丽君.参麦注射液细菌内毒素检测方法的研究[J].海峡药学，2010，22（10）：58-59.

[10]黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计[J].中国药学杂志，1997，6（2）：10-12.

Study on the Bacterial Endotoxins Test of Shenmai Injection

/Chu Qi-xing.//Medical Innovation of China，2014，11（08）：120-121

Objective：To investigate the feasibility of bacterial endotoxin test and enhance the quality control for Shenmai Injection.Method：The bacterial endotoxin inspection method was used for the interference test of Shenmai injection to limulus reagent and the LOQ of bacterial endotoxin was tested.Result：The 1：4 diluted sample was test with 0.125 EU/mL tachypleus amebocyte lysate. No interference was found and the result consistent with the rabbit test results.Conclusion：The bacterial endotoxin test is much more feasible， sensitive and fast than rabbit test method for the pyrogen test of Shenmai Injection.

Limulus lysate reagent； Shenmai Injection； Bacterial endotoxin test

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.08.052

2014-01-03） （本文编辑：蔡元元）

①河南省平顶山市第一人民医院 河南 平顶山 467000

褚奇星

First-author’s address：The First Peoples’Hospital of Pingdingshan City，Pingdingshan 467000 China