红嘴鸥产酸克雷伯菌的生物学特性

赵思越 段 纲 项 勋 代飞燕 常 华

云南农业大学动物科学技术学院，昆明 650302

红嘴鸥产酸克雷伯菌的生物学特性

赵思越 段 纲 项 勋 代飞燕 常 华*

云南农业大学动物科学技术学院，昆明 650302

采集红嘴鸥的粪便并进行细菌分离培养，首次分离到产酸克雷伯菌。红嘴鸥产酸克雷伯菌在普通琼脂、麦康凯、伊红美蓝（EMB）、营养肉汤及SS琼脂培养基上均可生长，多数为单个存在或两两相连，少数依傍聚堆成锯齿状排列。本菌为无鞭毛、无芽孢的革兰氏阴性杆菌，能利用葡萄糖（产酸产气）、可发酵乳糖、甘露醇、麦芽糖及蔗糖；靛基质试验为阳性，MR阴性，VP试验阳性，不产生H2S，可利用尿素及西蒙氏柠檬酸盐，但半固体琼脂（动力）试验为阴性；本菌对氧氟沙星最为敏感；小白鼠对本菌易感，且腹腔接种易感性高。

红嘴鸥；产酸克雷伯菌；生物学特性

克雷伯菌属细菌归属于肠杆菌科，分5个种：产酸克雷伯菌（K）、肺炎克雷伯菌（K.）、植生克雷伯菌（K）、土生克雷伯菌（K.）和变形克雷伯菌（K.）[1]。前两者可导致人畜患病，后三者一般不导致人畜患病。国内外已从兔、乌鸡、鸡、孔雀等动物体内分离到克雷伯菌[2-5]，目前国内外对肺炎克雷伯菌的研究比较多，而有关产酸克雷伯菌的报道甚少。产酸克雷伯菌是重要的条件致病菌，在自然界曾从植物及水生环境中检出，也存在于人和动物肠道，可导致人畜患病[6]。到目前为止，未见季节性迁徙候鸟红嘴鸥感染产酸克雷伯菌的报道。

1 材料与方法

1.1 材 料

1）试验样品及试验动物。采集云南昆明滇池红嘴鸥粪便50份，健康的昆明系雌雄种小白鼠20只（购自昆明医科大学实验动物中心）。

2）主要仪器。MCV-131BNF无菌超净台、MLS-3020高压灭菌器、MOV-212电热恒温干燥箱（SANYO/日本）、恒温培养箱、电子分析天平（上海）。

3）培养基。根据禽类肠道正常菌群的特点，选用肉汤培养基、血清普通琼脂培养基、LB琼脂培养基、伊红美蓝（EMB）琼脂培养基、麦康凯培养基等选择培养基（购自上海生工生物试剂有限公司）。

表1 产酸克雷伯氏菌在不同条件下的培养特性

1.2 方 法

1）细菌形态学和培养特性观察。将采集的红嘴鸥粪便分别接种于普通肉汤培养基，置于37℃下培养36～48 h，观察其生长情况；挑取肉汤培养基中的菌液分别接种于普通琼脂、麦康凯及伊红美蓝（EMB）琼脂培养基上，每种培养基均匀分成3组，分别置于29℃、37℃、45℃下培养36～48 h，观察其生长情况；挑取菌落涂片染色镜检，观察其形态并测定其大小。

2）生化试验。将分离出的菌种，接种于肉汤培养基扩增，并分别接种于各种生化试验培养基中，置于37℃培养48～96 h，测定其生化反应。

3）药敏试验。将该菌种均匀接种于普通琼脂平板上，以各种药敏试纸（头孢拉定、庆大霉素、阿米卡星、呋喃妥因、氨苄西林、新霉素、妥布霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、阿莫西林、头孢噻肟）进行药物敏感性试验研究。

4）动物接种试验。将分离出的菌种，接种于肉汤培养基扩增，取菌液分别经皮下、肌肉、尾静脉、腹腔、滴鼻等途径接种小鼠进行动物试验，观察其致病性。

2 结果与分析

2.1 培养特性

本菌在普通琼脂、麦康凯、伊红美蓝（EMB）、营养肉汤及SS琼脂培养基上均可生长，在不同培养条件下的培养特性见表1。

2.2 细菌形态及大小

37℃培养40 h观察，本菌为革兰氏阴性菌，两端钝圆，两侧平直，且长短不一，有的较长。大小为（0.93～1.25）μm×（0.31～0.75）μm。无鞭毛，无芽孢。多数为单个存在或两两相连，少数依傍聚堆成锯齿状排列。

2.3 生化特性

本菌生化特性见表2，本菌能利用葡萄糖（产酸产气）、可发酵乳糖、甘露醇、麦芽糖及蔗糖；靛基质试验为阳性，M.R阴性，V.P试验阳性，不产生H2S，可利用尿素及西蒙氏柠檬酸盐，但半固体琼脂（动力）试验为阴性。

表2 产酸克雷伯氏菌生化鉴定结果

2.4 药物敏感性

本菌除了对阿莫西林耐药外，对其他抗生药物皆比较敏感，其中对氧氟沙星最为敏感（表3）。

表3 产酸克雷伯氏菌药敏实验结果

2.5 致病性

通过腹腔、尾静脉、滴鼻、皮下及肌肉分别接种21日龄小鼠，接种量约200 μL原菌液。腹腔接种的小鼠初期症状为精神萎靡、毛发凌乱、活动量小、食欲不佳、扎堆等情况，最短死亡时间为18 h，其余小鼠于48 h前全部死亡；尾静脉注射和滴鼻途径的小鼠未见死亡；皮下和肌肉注射仅引起部分小鼠感染死亡，灌胃小鼠于16 h内引起3只小鼠死亡，死亡时均伴有腹泻症状。结果表明，小鼠对本菌易感，且腹腔接种易感性高。

3讨 论

细菌分离培养结果表明本菌在普通琼脂平板上形成灰白色隆起的圆形菌落，麦康凯琼脂平板上形成表面湿润、粉红色的黏稠菌落，营养肉汤琼脂平板上形成灰白色隆起的圆形菌落，SS琼脂平板上形成粉红色菌落，培养基变为红色，伊红美蓝琼脂平板上形成表面湿润的粉红色黏稠菌落，且菌落较小。生化试验表明本菌能利用葡萄糖（产酸产气）、可发酵乳糖、甘露醇、麦芽糖及蔗糖，靛基质试验为阳性，M.R阴性，V.P试验阳性，不产生H2S，可利用尿素及西蒙氏柠檬酸盐，但半固体琼脂（动力）试验为阴性，这些特性可与肠杆菌科的其他属成员进行鉴别。将上述细菌进行形态学观察、革兰氏染色和生化试验，与《伯杰氏系统细菌学手册》和《常见细菌系统鉴定手册》比对，判定该菌为产酸克雷伯氏菌。此外，动物致病性试验表明小鼠对本菌均有易感性，且以腹腔接种最为易感。这与Bleich[10]和 Foreman[11]的报道是相符的，本菌易感染啮齿类动物。

红嘴鸥是野生迁徙候鸟，在迁徙过程中细菌感染后都未能及时使用抗生素治疗，推测其粪便中分离的细菌应该不会产生耐药性，因此对本研究中分离得到的产酸克雷伯菌进行药敏试验，结果与预期相符，该菌对大多数抗生素药物皆比较敏感，其中对氧氟沙星最为敏感。如果红嘴鸥在迁徙过程中受到产酸克雷伯菌大范围感染，药敏试验研究将为其治疗提供重要的试验依据。

产酸克雷伯菌是重要的条件致病菌，主要寄生于人和动物的呼吸道或肠道。红嘴鸥每年冬天飞到昆明越冬，很多游人来此观赏，可如果红嘴鸥携带该菌，那粪便是否会通过水源污染，或是否会通过密切接触而导致人群的感染，这为进一步监测红嘴鸥产酸克雷伯菌提出预警。但红嘴鸥是重要的保护动物，进行试验动物模型时不可以选择红嘴鸥，而小鼠极易感染该菌，这为进一步研究产酸克雷伯菌的致病性奠定基础。

[1]李刚山，范泉水，朱媛，等.云南边防部队产酸克雷伯菌生化特性与致病性研究[J].中国热带医学，2009，9（11）：21-50.

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[4] 刘华英.乌鸡产酸克雷伯氏菌病诊疗报告[J].中国畜禽传染病，1996（6）：40-42.

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[6]方文珍，陈志鸿，陈小麟，等.厦门滨海湿地冬季鸟类群落多样性研究[J].海洋科学，2007，3（1）：10-16.

[7] 王紫江，赵雪冰，杨明.红嘴鸥在贝加尔湖的分布和繁殖[J].四川动物，2007，26（3）：552-554.

[8]李世宗，刘震.昆明翠湖越冬红嘴鸥数量变化及投食量调查分析[J].野生动物，2012，33（3）：146-148.

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[11]FOREMAN O，KAVIRAYANI AM，GRIFFEY SM，et al.Opportunistic bacterialinfectionsin breedingcoloniesoftheNSG mouse strain[J].Vet Pathol，2011（48）：495-499.

2014-11-20

云南省野生禽类重大动物疫病监测

*通讯作者

赵思越，男，1989年生，硕士生。