GRP及GRPR在结直肠癌、黏膜炎症中的表达及其意义

陈银芸　廖江涛　吴娟

[摘要] 目的 检测胃泌素释放肽（GRP）及其受体（GRPR）在结直肠癌、黏膜炎症中的表达及其意义。方法 选择本院2009年1月～2012年10月经病理诊断为结直肠癌患者60例的病理标本为研究组，选取同期病理诊断为黏膜炎性改变患者60例的病理标本为对照组，采用免疫组化方法，分别检测结直肠癌组织及黏膜炎性组织中GRP及GRPR的表达情况。 结果 研究组GRP及GRPR表达阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；研究组中结肠癌及直肠癌患者GRP及GRPR表达阳性率差异无统计学意义（P>0.05）；结直肠癌Duks分期A、B期患者GRP及GRPR表达阳性率明显低于C、D期患者（P<0.05）；低分化癌患者GRP及GRPR表达阳性率明显高于分化及高分化癌患者（P<0.05）。 结论 GRP及GRPR在结直肠癌中表达明显升高，并且随着肿瘤恶性程度增高，GRP及GRPR表达增加，可为临床结直肠癌诊断治疗提供新的方向。

[关键词] 胃泌素释放肽；胃泌素释放肽受体；结直肠癌

[中图分类号] R735.3 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）06-0045-03

胃泌素释放肽（GRP）是一种可调节其他胃肠道激素分泌或功能肽类的物质，是由27 个氨基酸组成的肠脑肽，主要存在于正常人脑、胃的神经纤维及肺的内分泌细胞中[1]。研究显示GRP在人类肿瘤细胞中呈明显异常表达，在胃癌、结肠癌、大肠癌、前列腺癌等癌组织中均有表达[2]。因此有学者认为GRP及其受体（GRPR）可能对肿瘤的发生、发展有特殊作用，GRP与其受体GRPR结合后通过广谱生理和病理学效应调节肿瘤的进展、细胞增殖、血管形成及侵袭等过程[3]。本文选择结直肠癌患者病理标本为研究对象，探讨二者在结直肠癌中的表达及意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院2009年1月～2012年10月经病理诊断为结肠癌或直肠癌患者60例的病理标本为研究组，其中，男38例，女22例，年龄43～75岁，平均（62.0±5.2）岁；其中结肠癌41例，直肠癌19例；肿瘤Duks分期：A期12例，B期31例，C期10例，D期7例。组织分化程度：高分化腺癌28例，中分化腺癌18例，低分化腺癌14例。选取同期病理诊断为黏膜炎性改变的60例患者的病理标本为对照组，其中，男40例，女20例，年龄35～73岁，平均（60.5±6.4）岁，两组患者性别、年龄等一般情况比较，差异无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1病理切片 用石蜡切片机将入选病理标本连续切片，每片厚约5 μm，并将每个病理标本所切去的切片分成两部分，分别进行GRP及GRPR免疫组织化学染色。

1.2.2病理标本的免疫组织化学染色（ABC法） ①已标记的石蜡切片放入57℃烤箱30 min脱蜡，然后依次放入二甲苯×3次、100%酒精×2次、95%酒精×2次、80%酒精、70%酒精水化；②将各标本的病理组织切片入蒸馏水中漂洗；③将病理组织切片放入80℃水浴箱抗原修复；④稍冷却后用0.01MPBS漂洗；⑤用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭；⑥加入0.01M PBS中漂洗×2次；⑦加入封闭液（2%马血清）中室温下封闭，甩去多余液体；⑧滴加兔抗胃泌素释放肽多克隆抗体（按1∶100稀释）或兔抗胃泌素释放肽受体多克隆抗体（按1∶100稀释）， 置常温下过夜；⑨加入0.01M PBS中漂洗×3次；⑩加入抗兔生物素化二抗，室温1～2 h；{11}加入0.01M PBS中漂洗×3次；{12}加ABC 2 h；{13}DAB显色液（即用型DAB底物缓冲液、DAB显色液、底物溶液按1∶1∶1 稀释）中染色至棕黄色，PBS终止染色；{14}将显色后的片子用蒸馏水冲洗3遍后，浸泡于苏木精中进行复染，盐酸乙醇分化30 s，切片避灰尘干燥一晚；{15}贴片晾干后依次入70%酒精中、80%酒精中、95%酒精中×2次、100%酒精中×2次脱水；{16}再入二甲苯中透明处理×3次，中性树胶及盖玻片封片。

1.3 镜下观察

选择染色均匀、清晰、结构完整的切片为观察对象，在高倍镜下观察。阳性信号为棕褐色或棕黄色、淡黄色颗粒，定位于细胞浆。

1.4 统计学方法

数据录入SPSS 17.0统计学软件，计数资料以百分比表示，组内及多组间比较行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组GRP及GRPR表达情况比较

研究组GRP及GRPR表达阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 研究组不同病理分级、组织分化程度患者GRP及GRPR表达情况

研究组中结肠癌及直肠癌患者GRP及GRPR表达阳性率差异无统计学意义（P>0.05）；结直肠癌Duks分期A、B期患者GRP及GRPR表达阳性率明显低于C、D期患者（P<0.05）；低分化癌患者GRP及GRPR表达阳性率明显高于中分化及高分化癌患者（P<0.05）。见表2。

3 讨论

胃泌素是由胃窦部及十二指肠近端黏膜中G细胞分泌的一种胃肠激素，Rehfeld证明人的脑脊液和某些脑组织中存在胃泌素，胃泌素几乎对整个胃肠道均有作用，它可促进胃肠道的分泌功能，促进胃窦、胃体收缩，增加胃肠道的运动，同时促进幽门括约肌收缩，使胃排空减慢；促进胃及上部肠道黏膜细胞的分裂增殖；促进胰岛素和降钙素的释放。胃泌素释放肽（GRP）是蛙皮素样肽的同系物，是一种可调节其他胃肠道激素分泌的肽类物质[4]。调查研究显示在人类胃癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多数肿瘤中均可见GRP的异常表达，由此可见GRP可能对肿瘤的发生、发展有重要调节作用。endprint

研究显示GRP可作用于肿瘤细胞的多种特异性受体，影响不同的信号传导途经，进而间接调控肿瘤细胞的生长[5]，目前可知其主要作用机制是通过增加蛋白质磷酸化促进肿瘤细胞生长，一方面可通过激活磷脂酶C使细胞内钙离子浓度增加，钙调素依赖性蛋白激酶被激活，进而导致蛋白质磷酸化增加，另一方面GRP可激活细胞内腺苷环化酶，使细胞cAMP增加，进一步促进蛋白质磷酸化[6，7]。

GRPR是GRP的受体，目前体外及体内实验研究已经证实阻断或拮抗GRPR的活化可有效逆转GRP对肿瘤细胞增殖的促进作用[8，9]。Scott N等[10]研究表明，GRP及GRPR在胃肠道类癌组织中均有大量表达，GRP可能通过自分泌及旁分泌的方式刺激肿瘤细胞的增殖。本研究结果显示结直肠癌患者病理标本中GRPR、GRP阳性表达率均明显高于对照组，与文献研究相符[11，12]。进一步研究显示结肠癌及直肠癌患者GRP及GRPR表达阳性率无明显差异，提示肿瘤部位对GRP、GRPR表达影响不明显。而Duks A、B期患者GRP及GRPR表达阳性率明显低于C、D期患者（P<0.05）；低分化癌患者GRP及GRPR表达阳性率明显高于中分化及高分化癌患者（P<0.05），说明在结直肠癌中GRP及GRPR表达与肿瘤分化程度密切相关，肿瘤分化级别越低、分期越晚，GRP及GRPR表达率越高。

综上，本文认为，在结直肠癌患者中，GRP及GRPR的表达与患者病情恶性程度明显相关，而GRP及GRPR在调控肿瘤增殖中可能存在内在联系，进一步研究阻断GRP及GRPR的关系或许能为结直肠癌的诊断治疗提供新的方向。

[参考文献]

[1] 杨静静，黄猛，杨佳锦. 胃泌素释放肽前体的研究进展[J]. 国际检验医学杂志，2013，34（3）：337-339.

[2] 赵开军，沈建康. 胃泌素释放肽受体在肿瘤治疗中的研究进展[J]. 世界华人消化杂志，2009，17（1）：63-67.

[3] 郑丹，谭文华，魏鸿麟，等. 胃泌素释放肽受体在妇科肿瘤中的研究进展[J]. 国外医学：计划生育·生殖健康分册，2010，26（1）：52-55.

[4] 赵开军，沈建康，孙青芳. 胃泌素释放肽受体在肿瘤中分布的临床意义[J]. 国际肿瘤学杂志，2008，35（9）：23-25.

[5] 茆家定，钱海鑫，吴佩，等. ERK-MAPK信号转导通路在胃泌素促进人结直肠癌细胞增殖中的作用及其机制[J]. 中华消化外科杂志，2013，12（2）：139-144.

[6] Cassano G，Resta N，Gasparre G，et al. The proliferative response of HT-29 human colon adenocarcinoma cells to bombesinlike peptides[J]. Cancer Lett，2001，172（2）：151-157.

[7] 穆媛媛，吴会超，杨莹莹，等. 胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及HB-EGF表达的影响[J]. 肿瘤防治研究，2012，39（2）：133-136.

[8] 顾群浩，张晓东，蔡照弟，等. 结肠癌患者血清胃泌素改变的临床研究[J]. 中国综合临床，2013，29（2）：173-175.

[9] 刘骏，周建奖，赵艳，等. 胃泌素促进胃癌细胞的迁移和侵袭[J].中国病理生理杂志，2013，29（4）：730-738.

[10] Scott N，Millward E，Cartwright EJ，et al. Gastrin releasing peptide and gastrin releasing peptide receptor expression in gastrointestinal carcinoid tumours[J]. J Clin Pathol，2004，57（2）：189-192.

[11] 徐华，陈易，王少峰，等. 监测结直肠癌患者幽门螺杆菌感染及血清胃泌素水平的临床意义[J]. 中国医师进修杂志，2009，32（16）：126.

[12] 王建军，张晓鸣，张军，等. 胃泌素释放肽受体在鳞状细胞癌中的检测及临床意义[J].中国皮肤性病学杂志，2011，25（5）：25-27.

（收稿日期：2013-11-13）endprint

研究显示GRP可作用于肿瘤细胞的多种特异性受体，影响不同的信号传导途经，进而间接调控肿瘤细胞的生长[5]，目前可知其主要作用机制是通过增加蛋白质磷酸化促进肿瘤细胞生长，一方面可通过激活磷脂酶C使细胞内钙离子浓度增加，钙调素依赖性蛋白激酶被激活，进而导致蛋白质磷酸化增加，另一方面GRP可激活细胞内腺苷环化酶，使细胞cAMP增加，进一步促进蛋白质磷酸化[6，7]。

GRPR是GRP的受体，目前体外及体内实验研究已经证实阻断或拮抗GRPR的活化可有效逆转GRP对肿瘤细胞增殖的促进作用[8，9]。Scott N等[10]研究表明，GRP及GRPR在胃肠道类癌组织中均有大量表达，GRP可能通过自分泌及旁分泌的方式刺激肿瘤细胞的增殖。本研究结果显示结直肠癌患者病理标本中GRPR、GRP阳性表达率均明显高于对照组，与文献研究相符[11，12]。进一步研究显示结肠癌及直肠癌患者GRP及GRPR表达阳性率无明显差异，提示肿瘤部位对GRP、GRPR表达影响不明显。而Duks A、B期患者GRP及GRPR表达阳性率明显低于C、D期患者（P<0.05）；低分化癌患者GRP及GRPR表达阳性率明显高于中分化及高分化癌患者（P<0.05），说明在结直肠癌中GRP及GRPR表达与肿瘤分化程度密切相关，肿瘤分化级别越低、分期越晚，GRP及GRPR表达率越高。

综上，本文认为，在结直肠癌患者中，GRP及GRPR的表达与患者病情恶性程度明显相关，而GRP及GRPR在调控肿瘤增殖中可能存在内在联系，进一步研究阻断GRP及GRPR的关系或许能为结直肠癌的诊断治疗提供新的方向。

[参考文献]

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[12] 王建军，张晓鸣，张军，等. 胃泌素释放肽受体在鳞状细胞癌中的检测及临床意义[J].中国皮肤性病学杂志，2011，25（5）：25-27.

（收稿日期：2013-11-13）endprint

研究显示GRP可作用于肿瘤细胞的多种特异性受体，影响不同的信号传导途经，进而间接调控肿瘤细胞的生长[5]，目前可知其主要作用机制是通过增加蛋白质磷酸化促进肿瘤细胞生长，一方面可通过激活磷脂酶C使细胞内钙离子浓度增加，钙调素依赖性蛋白激酶被激活，进而导致蛋白质磷酸化增加，另一方面GRP可激活细胞内腺苷环化酶，使细胞cAMP增加，进一步促进蛋白质磷酸化[6，7]。

GRPR是GRP的受体，目前体外及体内实验研究已经证实阻断或拮抗GRPR的活化可有效逆转GRP对肿瘤细胞增殖的促进作用[8，9]。Scott N等[10]研究表明，GRP及GRPR在胃肠道类癌组织中均有大量表达，GRP可能通过自分泌及旁分泌的方式刺激肿瘤细胞的增殖。本研究结果显示结直肠癌患者病理标本中GRPR、GRP阳性表达率均明显高于对照组，与文献研究相符[11，12]。进一步研究显示结肠癌及直肠癌患者GRP及GRPR表达阳性率无明显差异，提示肿瘤部位对GRP、GRPR表达影响不明显。而Duks A、B期患者GRP及GRPR表达阳性率明显低于C、D期患者（P<0.05）；低分化癌患者GRP及GRPR表达阳性率明显高于中分化及高分化癌患者（P<0.05），说明在结直肠癌中GRP及GRPR表达与肿瘤分化程度密切相关，肿瘤分化级别越低、分期越晚，GRP及GRPR表达率越高。

综上，本文认为，在结直肠癌患者中，GRP及GRPR的表达与患者病情恶性程度明显相关，而GRP及GRPR在调控肿瘤增殖中可能存在内在联系，进一步研究阻断GRP及GRPR的关系或许能为结直肠癌的诊断治疗提供新的方向。

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[6] Cassano G，Resta N，Gasparre G，et al. The proliferative response of HT-29 human colon adenocarcinoma cells to bombesinlike peptides[J]. Cancer Lett，2001，172（2）：151-157.

[7] 穆媛媛，吴会超，杨莹莹，等. 胃泌素及其受体拮抗剂对人胃癌细胞株MKN45增殖及HB-EGF表达的影响[J]. 肿瘤防治研究，2012，39（2）：133-136.

[8] 顾群浩，张晓东，蔡照弟，等. 结肠癌患者血清胃泌素改变的临床研究[J]. 中国综合临床，2013，29（2）：173-175.

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[11] 徐华，陈易，王少峰，等. 监测结直肠癌患者幽门螺杆菌感染及血清胃泌素水平的临床意义[J]. 中国医师进修杂志，2009，32（16）：126.

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