山西白猪SLA-DQB基因多态性与生产性状的关联分析

杨文平， 张家琦， 曹果清， 周忠孝

(1.河北联合大学生命科学学院，河北 唐山 063000； 2.山西农业大学动物科技学院， 山西 太谷 030801)

主要组织相容性复合体(Major histocompatibility-complex，MHC)作为动物抗病力的遗传标记，在辅助抗病性选择上发挥着重要的作用[1].猪的MHC称为SLA(Swine leukocyte antigen)复合体，按其结构、分布和功能主要有I类、Ⅱ类和Ⅲ类等3大类基因，Ⅱ类基因控制着机体的免疫应答与免疫调节，主要包括DRA，DRB，DQA，DQB，DPB，DPA，DZA和DOB等.研究发现SLA基因与生长、胴体品质、肉质以及繁殖性状均存在一定的关联性[2,3].SLA-DQB基因外显子2的高度多态性成为近年来的研究热点[4～9].山西白猪是用马身猪、长白猪和太湖猪培育的新品系.有关山西白猪的相关研究未见报道.本研究采用PCR-RFLP法对山西白猪的SLA-DQB基因多态性与生产性状进行关联分析，为评价、选育山西白猪提供依据.

1 材料与方法

1.1试验材料

从大同种猪场选择山西白猪培育过程中年龄、体重相近的不同世代后备猪个体174头检测SLA-DQB基因多态性，再选择其中的87头世代、年龄和性别相同的个体用于生产性状研究.

1.2基因组DNA提取

按常规的酚/氯仿抽提法提取基因组DNA.

1.3SLA-DQB基因的PCR-RFLP

引物参照文献[10]进行设计，由大连宝生物工程有限公司合成，扩增片段为273 bp.引物序列为：Forward：5′-cggaattccccgcagaggatttcgtgtacc-3′；Reverse：5′-ccgtcgtgccttcctctat-3′.PCR反应体系为20 μL,其中10×buffer(Mg2+)2.0 μL，250 μmol·L-1的dNTPs，10 pmol的引物，基因组DNA约50 ng，1.0 U Taq酶.PCR扩增条件： 94 ℃变性5 min；94 ℃，30 s；57 ℃，30 s；72 ℃，30 s；30个循环；72 ℃延伸7 min.扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测.

选用HaeⅢ限制性内切酶酶切PCR扩增产物，酶切反应体系为10 μL，其中扩增产物6 μL，限制性内切酶(10 U·μL-1)0.3 μL，10×buffer 1.0 μL，ddH2O 2.7 μL，37 ℃反应过夜.酶切产物采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，并判定SLA-DQB基因的基因型.

1.4生产性能测定和统计分析

测定山西白猪培育过程中后备猪的生长发育和体尺性状，包括初生重、28日龄断奶重、6月龄体重、体长、体高、胸围和背膘厚等.利用SAS软件进行性状关联分析.

2 结果与分析

2.1PCR扩增

引物扩增所得PCR产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测.结果表明，174个样本的电泳检测结果与图1中显示的4个样本的电泳检测结果完全相同，所有样本的扩增片段与目的片段大小一致且特异性好，相对分子质量是273 bp，可进行RFLP分析.

M．DL 1 000 Marker ; 1～4. PCR扩增产物.

2.2SLA-DQB基因的PCR-RFLP

采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对HaeⅢ酶切产物进行分析，结果表明，山西白猪SLA-DQB外显子2在HaeⅢ酶切位点上有多态性，共检测到5种基因，分别是A：167 bp/23 bp/29 bp/54 bp；B：84 bp/83 bp/23 bp/29 bp/54 bp；C：167 bp/102 bp/4 bp；D：167 bp/106 bp，E：167 bp/23 bp/83 bp，呈现6种不同基因型(图2)，分别是AA：167 bp/23 bp/29 bp/54 bp；BB：84 bp/83 bp/23 bp/29 bp/54 bp；CC：167 bp/102 bp/4 bp；EE：167 bp/23 bp/83 bp；AC：167 bp/23 bp/29 bp/54 bp/4 bp/102 bp；CD：167 bp/106 bp/4 bp/102 bp.

1. Marker(50 bp)；2. AA；3. CC；4. EE；5. AC；6. CD；7. BB.

2.3SLA-DQB外显子2多态性与生产性状的关联分析

对山西白猪SLA-DQB基因外显子2多态性与其生产性状进行了关联分析(表1和表2).最小二乘分析结果表明，EE型个体的初生重显著高于AA型和CC型个体(P<0.05)，3 种基因型在初生重的大小排列顺序为CC0.05).

表1 山西白猪不同基因型个体的体重性状

表2 山西白猪不同基因型个体的体尺性状

3 讨论

周波等[8]对五指山猪、二花脸猪和皮特兰猪的研究，包文斌等[9]对苏太猪的研究，孙瑞萍等[11]对海南五指山猪、临高猪及屯昌猪的研究，均发现SLA-DQB基因外显子2具有不同程度的多态性.本研究中，山西白猪SLA-DQB基因外显子2经HaeⅢ酶切后，检测到A，B，C，D和E等5种等位基因，得到AA，BB，CC，EE，AC和CD等6种不同基因型，与SLA-DQB已被证明存在丰富的多态性相一致.但陈江伟等[12]对广西巴马小型猪的研究发现，SLA-DQB基因外显子2无多态性位点，可能与长期封闭选育导致基因座纯合及采集的样本数量较少有关.

研究表明，SLA的遗传多态性与猪生产性能和繁殖性能有关[5,9,13,14].采用血清学或细胞学方法进行研究，王林云等[13]认为，不同SLA单倍型对中国猪种二花脸的产活仔数的影响有明显的差异，季海峰等[14]对中国经产瘦肉猪新品系母猪SLA的研究表明，D型母猪的产仔性能显著高于其他类型.采用分子遗传学方法进行研究，吴圣龙等[5]和包文斌等[9]表明苏太猪SLA-DQB基因与繁殖性能具有一定的相关性.本研究采用分子遗传学方法将HaeⅢ限制性内切酶酶切SLA-DQB基因所得的AA，EE和CC基因型对生产性状进行关联分析，发现EE型个体的初生重显著高于AA型和CC型个体(P<0.05)，3 种基因型在初生重的大小排列顺序为CC

参考文献：

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[8]周 波，谈永松，刘红林，等.五指山、二花脸和皮特兰猪的SLA-DQB基因外显子2的PCR-RFLP多态性分析[J].上海农业学报，2005，2(4)：1-4.

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[12]陈江伟，郭亚芬，兰干球，等.广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子多态性研究[J].广西农业科学，2010，41(8)：824-826.

[13]王林云，刘根桃，李汝敏. 猪白细胞抗原与产仔性能的关系[J]. 畜牧兽医学报，1995,26(4):308-312.

[14]季海峰，刘 彦，莫余忠，等. 猪白细胞抗原和生殖激素水平对产仔性能的影响[J]. 华北农学报，2000, 15(2)：128-132.