熊去氧胆酸衍生物的合成

张 飞，赵静国，赵蒙浩

(武汉轻工大学生物与制药工程学院，湖北武汉430023)

熊去氧胆酸 (Ursodeoxycholic Acid，UDCA)又称3α，7β-二羟基-5β-胆烷酸，是名贵中药熊胆所含的主要有效成分，临床上有效治疗原发性胆汁性肝硬化(PBC)、原发性硬化性胆管炎(PSC)、妊娠肝内胆汁淤积(ICP)、慢性丙型肝炎(CHC)、酒精性肝病(ALD)、非酒精性脂肪肝(NASH)等多种肝胆疾病。［1-4］。目前药物研发者对UDCA的修饰，通常是将氨基酸、多肽、核苷类似物以及杂环胺等连接到UDCA的羧基上［5-7］，以期望提高药效。

以熊去氧胆酸为起始原料，参照文献［8］制备甘氨熊去氧胆酸中间体，然后参考经典酰胺合成方法［9］对其羧酸进行修饰，合成13个新型熊去氧胆酸衍生物，其结构经1HNMR和MS表征。合成路线如图1所示。

1 实验

1.1 试剂与仪器

熊去氧胆酸(≥98%)实验室自制，经熔点、1HNMR和MS确证，其余均为国产分析纯试剂。

YRT-3熔点仪，天津大学精密仪器厂;Mercury Plus-400型核磁共振氢谱仪，美国 Varian公司;Trace MS2000型气相质谱联用仪，美国Finnigan公司。

图1 合成路线图

1.2 合成

1.2.1 甘氨熊去氧胆酸乙酯(2)的合成

在反应瓶中依次加入9.8 g(70mmol)甘氨酸乙酯盐酸盐，乙酸乙酯600 mL，三乙胺1 ml，室温下搅拌30 min，然后加入19.6 g(50mmol)熊去氧胆酸和17.30 g(70mmol)EEDQ，将浑浊液搅拌回流过夜12 h，冷却至室温，过滤，用乙酸乙酯洗涤，收集有机相，用5%NaOH溶液洗涤，水洗，5%盐酸溶液洗涤，再次水洗，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂得甘氨熊去氧胆酸乙酯得白色固体22.5 g，收率94.3%，熔点(84—86 ℃)。1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ:6.18(1H，t，NCH2CO)，4.20(2H，t，-C00CCH2-)，4.02(2H，d，NHCCO-)，3.57—3.63(2H，m，3-H，7-H)，1.12(3H，s，19-CH3)，0.97(3H，d，21-CH3)，0.64(3H，s，18-CH3)。

1.2.2 甘氨熊去氧胆酸(3)的合成

将甘氨熊去氧胆酸乙酯溶于120 ml乙醇中，加入10%K2CO3水溶液120 mL，回流搅拌1 h，蒸干乙醇，残余物加水溶解，往水溶液中加5%盐酸溶液，剧烈搅拌，有大量白色沉淀生成。静置、过滤、烘干，得甘氨熊去氧胆酸粗品。无水乙醇重结晶，得甘氨熊去氧胆酸白色粉末20.4 g，收率90.8%，熔点(220—221 ℃)。1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ:8.09(1H，t，NCH2CO)，4.30(2H，d，NHCCO-)，3.33—3.89(2H，m，3-H，7-H)，1.04(3H，s，19-CH3)，0.95(3H，d，21-CH3)，0.62(3H，s，18-CH3)。

1.2.3 Y-1—Y-13 的合成通法

将0.45 g(1 mmol)甘氨熊去氧胆酸溶于50 mL二氯甲烷中，冰浴搅拌10 min，然后依次加入EDCI 0.57 g(3 mmol)，DMAP 0.12 g(1 mmol)和正丙醇1 mL，搅拌30 min后撤去冰水浴，室温搅拌反应10 h，用NaCO3溶液洗涤，水洗至中性，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂后经柱层析纯化得Y-1固体0.38 g。

同法制备Y-2—Y-13。

2 结果和讨论

2.1 目标化合物的结构表征

Y-1白色固体，收率 77.4%，熔点(135—137℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.02(1H，t，NCH2CO)，4.13(2H，t，-C00CCH2-)，4.05(2H，d，NHCCO-)，3.57—3.63(2H，m，3-H，7-H)，1.10(3H，s，19-CH3)，0.97(3H，d，21-CH3)，0.64(3H，s，18-CH3);C29H49NO5，MS(EI，70EV)M/Z:［491.59］。

Y-2白色固体，收率 75.2%，熔点(106—108℃)。1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ:6.08(1H，t，NCH2CO)，4.16(2H，t，-C00CCH2-)，4.04(2H，d，NHCCO-)，3.56—3.63(2H，m，3-H，7-H)，1.10(3H，s，19-CH3)，0.97(3H，d，21-CH3)，0.68(3H，s，18-CH3);C30H51NO5，MS(EI，70EV)M/Z:［505.65］。

Y-3白色固体，收率68.9%，熔点(78—80 ℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.01(1H，t，NCH2CO)，4.15(2H，t，-C00CCH2-)，4.04(2H，d，NHCCO-)，3.56—3.63(2H，m，3-H，7-H)，1.09(3H，s，19-CH3)，0.96(3H，d，21-CH3)，0.67(3H，s，18-CH3);C31H53NO5，MS(EI，70EV)M/Z:［519.70］。

Y-4白色固体，收率 48.7%，熔点(72—74℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.04(1H，t，NCH2CO)，4.13(2H，t，-C00CCH2-)，4.05(2H，d，NHCCO-)，3.56—3.63(2H，m，3-H，7-H)，1.10(3H，s，19-CH3)，0.97(3H，d，21-CH3)，0.68(3H，s，18-CH3);C32H55NO5，MS(EI，70EV)M/Z:［533.58］。

Y-5白色固体，收率 46.2%，熔点(67—69℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.07(1H，t，NCH2CO)，4.15(2H，t，-C00CCH2-)，4.04(2H，d，NHCCO-)，3.56—3.63(2H，m，3-H，7-H)，1.08(3H，s，19-CH3)，0.91(3H，d，21-CH3)，0.68(3H，s，18-CH3);C33H57NO5，MS(EI，70EV)M/Z:［547.95］。

Y-6白色固体，收率38.4%，熔点(63—64℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.02(1H，t，NCH2CO)，4.15(2H，t，-C00CCH2-)，4.04(2H，d，NHCCO-)，3.56—3.63(2H，m，3-H，7-H)，1.09(3H，s，19-CH3)，0.99(3H，d，21-CH3)，0.68(3H，s，18-CH3);C34H59NO5，MS(EI，70EV)M/Z:［561.76］。

Y-7白色固体，收率 62.1%，熔点(137—139℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.05(1H，t，NCH2CO)，5.38(1H，m，3-呋喃)，4.05(2H，d，NHCCO-)，3.84—3.93(2H，m，2，5-呋喃)，3.57—3.63(2H，m，3-H，7-H)，2.10—2.27(2H，m，2，4-呋喃)，1.09(3H，s，19-CH3)，0.95(3H，d，21-CH3)，0.69(3H，s，18-CH3);C30H49NO6，MS(EI，70EV)M/Z:［519.22］。

Y-8白色固体，收率 53.6%，熔点(104—106℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.74(1H，t，NCH2CO)，4.04(2H，d，NHCCO-)，3.59—3.70(2H，m，3-H，7-H)，3.29—3.41(4H，m，N(C-)2)，1.15(3H，s，19-CH3)，0.95(3H，d，21-CH3)，0.68(3H，s，18-CH3);C30H52N2O4，MS(EI，70EV)M/Z:［504.62］。

Y-9白色固体，收率50.2%，熔点(85—87℃)。1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ:6.68(1H，t，NCH2CO)，4.04(2H，d，NHCCO-)，3.57—3.62(2H，m，3-H，7-H)，3.14—3.33(4H，m，N(C-)2)，1.10(3H，s，19-CH3)，0.91(3H，d，21-CH3)，0.67(3H，s，18-CH3);C32H56N2O4，MS(EI，70EV)M/Z:［532.63］。

Y-10白色固体，收率 49.7%，熔点(72—74℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:6.66(1H，t，NCH2CO)，4.04(2H，d，NHCCO-)，3.59—3.62(2H，m，3-H，7-H)，3.16—3.34(4H，m，N(C-)2)，1.10(3H，s，19-CH3)，0.93(3H，d，21-CH3)，0.67(3H，s，18-CH3);C34H60N2O4，MS(EI，70EV)M/Z:［560.72］。

Y-11白色固体，收率 36.8%，熔点(88—90℃)。1HNMR(400 MHz，CDCl3)，δ:6.61(1H，t，NCH2CO)，4.05(2H，d，NHCCO-)，3.66(4H，m，-COC-)，3.57—3.63(2H，m，3-H，7-H)，3.42—3.55(4H，m，-CN-)，1.09(3H，s，19-CH3)，0.96(3H，d，21-CH3)，0.68(3H，s，18-CH3);C30H50N2O5，MS(EI，70EV)M/Z:［518.70］。

Y-12白色固体，收率 40.5%，熔点(66—68℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:7.14—7.31(5H，m，H-Ar)，6.79(1H，t，NCH2CO)，4.55(2H，s，NCAr)，4.12(2H，d，NHCCO-)，3.56—3.66(2H，m，3-H，7-H)，2.95(3H，s，NCH3)，1.09(3H，s，19-CH3)，0.94(3H，d，21-CH3)，0.68(3H，s，18-CH3);C34H52N2O4，MS(EI，70EV)M/Z:［552.65］。

Y-13淡黄色固体，收率48.3%，熔点(94—96℃)。1HNMR(400MHz，CDCl3)，δ:7.24—7.30(5H，m，H-Ar)，7.07(1H，t，NCH2Ar)，6.79(1H，t，NCH2CO)，4.42(2H，d，NHCAr)，3.93(2H，d，NHCCO-)，3.54—3.60(2H，m，3-H，7-H)，1.07(3H，s，19-CH3)，0.91(3H，d，21-CH3)，0.67(3H，s，18-CH3);C33H50N2O4，MS(EI，70EV)M/Z:［538.61］。

2.2 讨论

目前化学合成甘氨熊去氧胆酸衍生物的方法有两种:混合酸酐法和碳二亚胺缩合剂法。混合酸酐法用到氯甲酸乙酯考虑到其毒性较大，碳二亚胺缩合剂法最常用的是DCC和EDCI，分别实验发现使用DCC缩合剂反应不完全，副产物甘氨熊去氧胆酰基脲很多，不容易除去，并且反应的另一产物二环己基脲很难彻底除去，而使用EDCI缩合剂，反应完全，无副产物产生，并且其反应后生成的脲是水溶性的，很容易被水洗掉，因此使用EDCI缩合剂与DMPA催化剂对其进行修饰后的产物易于分离与精制。

3 结论

以熊去氧胆酸与甘氨酸乙酯为原料合成甘氨熊去氧胆酸，然后以EDCI为缩合剂用胺类、醇类对甘氨熊去氧胆酸进行修饰，得到酯类和酰胺类两个系列的目标化合物共13个新型的熊去氧胆酸衍生物。其结构经1HNMR和MS确认，药理活性实验正在进行中，为熊去氧胆酸的结构修饰进行深入而系统的研究奠定了基础。

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