慢性胃炎病人血清CagA抗体和胃黏膜炎症活动性及Hp密度检测

谢兆兰，周立云，王明林，郭遂怀

（武汉市武昌医院消化内科，湖北 武汉 430016）

幽门螺杆菌（Hp）相关性疾病主要包括慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤、胃癌等［1－2］。其中，慢性胃炎是最常见的消化系统疾病。目前认为，Hp感染是慢性胃炎发生的最常见原因，但并非每次Hp感染均会产生明显症状。流行病学资料显示，全世界约有一半人感染Hp，但其中仅有10%的感染者可发展为明显的临床疾病，其原因与不同Hp菌株的毒力差异有关。细胞毒素相关基因A（CagA）是Hp重要的毒力基因，编码细胞毒素相关蛋白，与胃黏膜炎症改变甚至胃癌发生有密切关系。但是目前国内较少有CagA对慢性胃炎病人胃黏膜炎性活动度、Hp密度作用的研究，CagA和慢性胃炎胃黏膜萎缩、肠上皮化生关系也鲜有报道。本文对慢性胃炎病人进行血清CagA抗体检测和胃黏膜组织病理学检查，探讨CagA与慢性胃炎病人胃黏膜炎症活动度之间的关系，以及CagA对慢性胃炎病人Hp密度、胃黏膜萎缩和肠上皮化生的影响，以期为慢性胃炎的临床治疗提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2012年4—8月，选择在我院经胃镜检查诊断为慢性胃炎，C14呼气试验阳性病人80例，男49例，女31例；年龄24～60岁，平均（46.25±4.51）岁。慢性胃炎胃镜诊断符合悉尼系统及2000年国内慢性胃炎研讨会标准［3］。排除标准：①对胃部存在影响的器质性疾病如心力衰竭、严重肝衰竭、肾衰竭者；②于4周内使用过对Hp有影响的药物，如质子泵抑制剂、H2受体拮抗剂、抗生素、铋剂等；③孕妇、肿瘤病人。所有受检者均签署知情同意书。所有入选病人行胃镜检查时于距幽门前3～5cm 处钳取胃窦组织3块用于检查。

1.2 检测指标及方法

1.2.1 血清CagA抗体检测 采集病人空腹静脉血2mL，离心10min（6 000～8 000r／min），取上清液，置于－20℃冰箱中保存。应用CagA ELISA试剂盒（深圳欣康基因数码科技有限公司），酶免疫技术测定血清CagA抗体，按试剂盒说明操作。

1.2.2 胃黏膜病理学检查 将胃黏膜组织标本置于40g／L甲醛溶液中固定，常规石蜡包埋、切片，显微镜下观察。参照文献［3］的标准，由病理科医师观察以下指标：黏膜炎症活动性，萎缩、肠上皮化生情况，Hp密度。炎症活动性程度分级为：轻度，黏膜固有层少数中性粒细胞浸润；中度，中性粒细胞较多存在于黏膜层，并在表面上皮细胞间、小凹上皮细胞间或腺管上皮间等均可见；重度，中性粒细胞较密集，或除中度所见外还见小凹脓肿。在苏木精－伊红和GIEMSA染色切片上，应用高倍镜（100倍）观察，Hp主要分布于胃黏膜黏液层、胃小凹和腺管上皮表面、腔内，呈稍弯曲的杆状或棒状。Hp密度分级：轻度，偶见或小于标本全长1／3有少数Hp；中度，Hp分布超过标本全长1／3而未达2／3，或连续性、薄而稀疏地存在于上皮表面；重度，Hp成堆存在，基本分布于标本全长。

1.3 统计学处理

应用SPSS 11.5软件进行统计分析，计数资料比较采用Fisher确切概率或卡方检验，等级资料比较采用秩和检验。P＜0.05为差异有显著性。

2 结 果

2.1 慢性胃炎病人血清CagA抗体阳性情况

本文研究结果显示，80例慢性胃炎病人血清CagA抗体阳性52例（65.0%），阴性28例（35.0%）。CagA抗体阳性病人中男33例（41.2%），女19例（23.7%）；CagA抗体阴性病人中男16 例（20.0%），女12例（15.0%）。

2.2 慢性胃炎病人血清CagA抗体与胃黏膜病理改变的关系

慢性胃炎CagA抗体阳性组病人胃黏膜炎症活动性程度显著高于同性别的CagA抗体阴性组，差异有显著性（χ2＝12.161、6.111，P＜0.05）。CagA抗体阳性组胃黏膜肠上皮化生、萎缩情况与同性别CagA抗体阴性组相比较，差异均无显著意义（P＞0.05）。不同性别间各指标差异均无显著性（P＞0.05）。见表1～3。

2.3 慢性胃炎血清CagA抗体与Hp密度的关系

CagA抗体阳性组胃黏膜Hp密度与同性别CagA抗体阴性组相比，差异无显著性（P＞0.05）。不同性别间比较差异无显著性（P＞0.05）。见表4。

表1 CagA抗体反应与胃黏膜炎症程度关系（例）

表2 CagA抗体反应与胃黏膜肠上皮化生关系（例）

表3 CagA抗体反应与胃黏膜萎缩关系（例）

表4 CagA抗体反应与Hp密度的关系（例）

3 讨 论

Hp于1983年首先由澳大利亚学者WARREN和WARSHALL从胃黏膜活检组织中分离出来，是一种微需氧、革兰阴性螺旋形细菌。Hp与慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤甚至胃癌等疾病密切相关，已被国际癌症研究机构（IARC）列为Ⅰ类致癌物之一。Hp为一种寄生于人体的条件致病菌，可以在胃黏膜中长期定植，其CagA毒力基因的表达与B型胃炎的发生与发展密切相关［4］。CagA是位于细胞表面的亲水性免疫显性蛋白，血清学检测约60%的Hp含有此蛋白。CagA是Hp的重要毒力因子之一，存在于所有具有空泡毒素活性的Hp菌株中，虽不直接介导毒素活性，但与空泡毒素的表达密切相关，因此称为细胞毒素相关蛋白。

本研究80例慢性胃炎病人血清CagA抗体阳性率为65.0%，慢性胃炎CagA抗体阳性组胃黏膜炎症活动性程度显著高于CagA抗体阴性组，差异有显著性。与文献［5］结果基本相符，提示CagA与慢性胃炎的炎症活动性程度相关，是引起慢性胃炎的重要致病因子［6］。本文结果显示，CagA抗体阳性组与阴性组间Hp密度及胃黏膜肠上皮化生、萎缩情况比较，差异无显著性。提示CagA并非致胃黏膜萎缩、肠上皮化生的特异性因子；同时，性别对以上指标结果无影响。本实验将性别区分开来对各项数据进行分析，排除了性别可能对分析结果产生的干扰。

既往研究结果已证实，在与Hp感染相关的B型胃炎中，CagA阳性的Hp可通过Ⅳ型分泌系统将CagA蛋白注入到胃上皮细胞中，并诱导IL－8转录及蛋白水平表达上调，从而导致中性粒细胞的募集和胃黏膜组织的炎性损伤［7－8］，有利于人体对Hp进行清除。本文结果显示，CagA抗体阳性的慢性胃炎病人胃黏膜中炎症活动性程度显著强于CagA抗体阴性组，推测这一现象可能与上述机制密切相关。然而，与未携带CagA基因的Hp相比，CagA蛋白表达阳性的Hp在胃黏膜层中的密度未见显著降低。该结果提示，尽管CagA基因的表达会诱导中性粒细胞在胃黏膜组织的浸润和炎性损伤的加重，人体却无法有效清除Hp在胃黏膜中的定植，导致慢性胃炎反复发作，迁延不愈，增加了癌变的潜在危险。其原因可能为CagA并非Hp感染致病的单一因素，人体的细胞免疫应答功能可能在清除Hp感染的过程中起着关键性作用［9］，具体机制还有待进一步深入研究。

综上所述，CagA作为Hp的毒力蛋白，可诱导中性粒细胞在胃黏膜的募集，加重局部胃黏膜的炎症活动性；人体无法有效清除Hp在胃黏膜中的定植。同时，CagA对胃黏膜的肠上皮化生、萎缩影响不大。

［1］董丽丽，项锋钢，高建青.胃癌组织Survivin蛋白表达及其与Hp感染关系［J］.齐鲁医学杂志，2008，23（6）：489－491.

［2］朱淑珍，项锋钢，李宏.胃癌组织FHIT蛋白表达及其与幽门螺杆菌感染关系［J］.青岛大学医学院学报，2009，45（2）：119－121.

［3］中华医学会消化病学分会.全国慢性胃炎研讨会共识意见［J］.中华消化杂志，2000，6（20）：199－201.

［4］FIGURA N，MORETTI E，ROVIELLO F，et al.CagA structural types of Helicobacter pylori strains isolated from patients with gastric carcinoma and chronic gastritis only［J］.Intern Emerg Med，2002，7：103－105.

［5］MOLAEI M，FOROUQHI F，MASHAYEKHI R，et al.CagA status and VacA subtypes of Helicobacter pylori in relation to histopathologic findings in Iranian population［J］.Indian J Pathol Microbiol，2010，53（1）：24－27.

［6］NESE K K，KIVANC C K.Significance of cagA status and vacA subtypes of Helicobacter pylori in determining gastric histopathology：Virulence markers of H.pylori and histopathology［J］.Gastroenterology，2006，10：1440－1746.

［7］MIZUNO T，ANDO T，NOBATA K，et al.Interleukin－17 levels in Helicobacter pylori－infected gastric mucosa and pathologic sequelae of colonization ［J］.World J Gastroenterol，2005，11：6305－6311.

［8］HARRINGTON L E，MANGAN P R，WEAVER C T.Expanding the effector CD4T－cell repertoire：the Th17lineage［J］.Curr Opin Immunol，2006，18：349－356.

［9］YUAN Z，YUN S.Helicobacter pylori－infected macrophages induce Th17cell differentiation［J］.Immunobiology，2011，216：200－207.