盐酸左旋咪唑中对甲苯磺酰氯杂质测定方法的建立

邢亚非* 钱小燕

（南京白敬宇制药有限责任公司，江苏 南京 210038）

盐酸左旋咪唑中对甲苯磺酰氯杂质测定方法的建立

邢亚非* 钱小燕

（南京白敬宇制药有限责任公司，江苏 南京 210038）

目的 建立盐酸左旋咪唑中对甲苯磺酰氯杂质测定方法并对方法进行验证。方法 色谱柱：C18（5 μm×4.6 mm×250 mm），流动相：水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺调节pH=4.5）：甲醇=80∶20；检测波长：200 nm；柱温：30；进样量：10 μL；定量限不得低于400 ppm。结果 盐酸左旋咪唑与对甲苯磺酰氯峰分离度＞1.5，并与相邻杂质峰分离度＞1.5；在定量限与测定浓度的150%之间呈良好线性关系，相关系数R2≥0.99。结论 该方法专属性强，重复性好，可用于盐酸左旋咪唑中对甲苯磺酰氯的定量测定。

盐酸左旋咪唑；对甲苯磺酰氯；高效液相色谱法

分拆剂是盐酸左旋咪唑生产原料之一，对甲苯磺酰氯是分拆剂的起始原料这一，生产中对甲苯磺酰氯可能会随着分拆剂进入到原料药中，根据EMEA基因毒性杂质指南[1]和EMA关于“基因毒性杂质限度指南”的问答[2]，该物质具有基因毒性警示结构，故在原料药中需考察是否含有该杂质且应控制在允许限度范围内。参照HPLC法测定盐酸左旋咪唑片的含量及溶出度[2]、复方甲苯咪唑粉中盐酸左旋咪唑含量的测定[3]、HPLC法测定盐酸左旋咪唑中有关物质[4]，我们拟订了盐酸左旋咪唑中对甲苯磺酰氯的测定方法，通过对该方法进行的预试验，我们确定建立了本文中的测定方法，参照中国药典附录ⅩⅨA[5]、美国药典附录1226[6]的要求，我们对该方法进行了验证，确认拟定的方法能有效的检出盐酸左旋咪唑中对甲苯磺酰氯。

1 试验材料

1.1 检验仪器：岛津LC-20AT高效液相色谱仪（双检测器）、XP205电子分析天平。

1.2 对照品：试剂见表1。

表1 试剂表

1.3 药品：盐酸左旋咪唑 LV12504。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱仪：岛津LC-20AT或相当的液相色谱系统。色谱柱：C18（5 μm×4.6 mm×250 mm）。柱温：30 ℃。流速：1.0 mL/min。进样量：10 μL。检测波长：200 nm。检测器：紫外检测器、DAD检测器。流动相：水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺调节pH=4.5）：甲醇=80∶20。

2.2 专属性/系统适用性试验

①溶液配制：系统适用性试验溶液：精密称取约10 mg对甲苯磺酰氯对照品和盐酸左旋咪唑对照品置100 mL量瓶中，用2 mL甲醇充分溶解后用流动相稀释至刻度。②专属性/系统适用性试验：盐酸左旋咪唑与对甲苯磺酰氯峰的分离度为7.82（应≥1.5，各相邻组分峰的分离度应＞1.5；对甲苯磺酰氯的重复进样的RSD≤2.0%）。见图1。

2.3 检测限与定量限

图1

2.3.1 试液制备：①预试液配制：精密称取约20 mg对甲苯磺酰氯对照品置200 mL量瓶中，用2 mL甲醇充分溶解后用流动相稀释至刻度，再取5 mL置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度。②稀释液：精密称取约100 mg盐酸左旋咪唑置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度（即供试液浓度1 mg/mL）。

2.3.2 检测限与定量限：取对照品溶液逐级稀释，定量限浓度为对甲苯磺酰氯峰信噪比为（10±1）∶1；且定量限浓度时3针所得的对甲茉磺酰氯的重复进样的RSD≤2.0%。检测限浓度为对甲苯磺酰氯峰信噪比为（3±1）∶1；检测限浓度应不＞100 ppm。定时限浓度为：289.7 ppm，检测限浓度为：97.7 ppm。

2.4 线性范围

定量限至限度的150%。①线性浓度（表2）。②线性结果：上述各浓度溶液各进样3针，计算各浓度对甲苯酰氯的峰面呈积平均值，以浓度为横坐标，对甲苯磺酰氯平均峰面积为纵坐标，计算对甲苯磺酰氯浓度与平均峰面积的线性系数R2为：0.9977。线性范围：300～600 ppm。

表2 线性浓度表

2.5 精密度

①稀释剂：精密称取约30 mg对甲苯磺酰氯置100 mL量瓶中，先加2 mL甲醇溶解用流动相稀释至刻度，取该溶液1 mL于100 mL量瓶中用流动相稀释至刻度（即供试液浓度0.003 mg/mL）。②供试液：精密称取供试品100 mg置100 mL量瓶中用上述稀释剂稀释至刻度。③精密度结果：由化验员A平行配制6份用仪器A每份供试液各进样1针，6次所得的对甲苯酰氯的含量的RSD为0.81%（应≤2.0%）。

峰表 检测器 A Ch1 200nm

2.6 中间精密度：由化验员B平行按2.4项下精密度配制6份用仪器B每份供试液各进样1针，6次所得的对甲苯酰氯的含量的RSD为0.33%（应≤2.0%）且12份样的RSD为0.93%（应≤2.0%）

2.7 准确度：分别取定量限浓度、测定浓度的80%、100%、120%4个浓度溶液，测定各浓度样品中对甲苯磺酰氯的量的平均值，计算回收度，每个浓度的回收率应为80%～120%，测得结果见表3。

表3 准确度表

2.8 耐用性

2.8.1 试液制备

①供试液：按检验方法配制供试液，加入对甲苯磺酰氯对照品使其浓度为300 ppm。② 稀释液：精密称取约100 mg盐酸左旋咪唑置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度（即供试液浓度1 mg/mL）。

2.8.2 耐用性条件变更信结果

①耐用性条件变更：柱温分别由30变更为25、35；流动相比例由80：20变更为85∶15、75∶25；色谱柱更换为另一根同厂家的型号的色谱柱。②耐用性结果：两条件下对甲苯磺酰氯含量所得结果计算RSD≤30.0%，两根色谱柱对甲苯磺酰氯、盐酸左旋咪唑保留时间相对偏差分别为0.08、0.04。

3 讨 论

3.1 流动相的选择：试验通过对几种流动相的试验比较，结果以水相（1000 mL水中加1 mL磷酸。用二乙胺调节pH=4.5）：甲醇=80∶20，对甲苯磺酰氯的峰形较好且与盐酸左旋咪唑峰的分离度也好，故采用其作为试验的流动相。

3.2 检测波长的选择：利用DAD检测器对对甲苯磺酰氯和盐酸左旋咪唑波长进行全波长分析，对甲苯磺酰氯在200 nm有最大吸收，盐酸左旋咪唑在200 nm也有较强吸收，故选200 nm为测定波长。

3.3 溶液稳定性考察：经对照品溶液稳定性考察和供试品溶稳定性考察试验，对照品溶液在2～8 ℃下可贮存4 d；供试品溶液在室温下可贮存8 h。

[1] 人用药品委员会.EMEA基因毒性基因杂质指南[S].2006-07-28.

[2] 人用药品委员会.EMA基因毒性基因杂质指南问答[S].2010-09-23.

[3] 曾建亭,钟小燕.HPLC法测定盐酸左旋咪唑片的含量及溶出度[J].中国热带医学,2010,10(5):21-22.

[4] 左文霞,李洽,任伟,等.复方甲苯咪唑粉中盐酸左旋咪唑含量的测定饲料研究[J].饲料研究,2011,(8):41-42.

[5] 郭江红,赵亚萍,吴蔚.HPLC法测定盐酸左旋咪唑中有关物质[J].中国药师,2012,(4):512-514.

[6] 中国药典附录ⅩⅨ A.药品质量标准分析方法指导原则[S].

R927.2

B

1671-8194（2014）19-0107-02

*通讯作者