培养基保存方法的改善

王开校

（新沂市疾病预防控制中心，江苏 新沂 221400）

培养基保存方法的改善

王开校

（新沂市疾病预防控制中心，江苏 新沂 221400）

目的 探索培养基（液）有效期更长的适宜保存方法。方法 通过细菌生长实验和培养基（液）称量实验对两种方法进行对比。结果 塑料袋扎口法保存的培养基（液）有效期更长。结论 塑料袋扎口法简单、经济、实用、有效，适合基层疾病预防控制中心。

培养基；保存；改善

近年来，随着经济的发展和国家的重视，尤其自2003年“非典”之后，各级政府加大投入，很多疾病预防控制中心软、硬件建设得到了很大提高。然而，在基层单位，微生物检验的软硬件提高幅度不大。微生物检验工作面广量大、专业性强、质量要求高，并且具有突发性和临时性，尤其在进行微生物检验最基本的步骤—培养基（液）的配制及保存时极为重要[1]。常规方法保存时效短，无法解决相对配制量大和实验利用率小的矛盾。为了解决这个矛盾，结合基层单位实际，我们在实际工作中用塑料袋扎口法保存平皿和试管类培养基（液），经实验观察发现效果良好。

1　实验结果

1.1培养基（液）水分浓缩对细菌生长的影响

只要在适宜的温度下保存，无论何种培养基在一定的时间内均可以保持稳定的作用。但是，水分的减少改变了培养基内各种成分的浓度，这是培养基失效的主要原因[2]。本次实验，我们选择最常用的营养琼脂培养基和SS培养基，通过细菌生长实验观察：培养基水分浓缩在5%～10%对实验细菌生长没有明显影响。因此，我们认为，一般情况下，水分浓缩率不超过10%的培养基均有效、可用，见表1。

1.2平皿类培养基塑料袋扎口法与纸包法的比较

首先选择平皿培养基做实验，根据平皿培养基称量实验，平皿类培养基常规保存，水分浓缩率不超过10%，一般为3～7 d[3]；塑料袋扎口法可达到21 d以上。结合细菌生长要求，我们认为培养基常规保存有效期为3～7 d；塑料袋扎口法保存平皿类培养基有效期至少为3周。见表2。

表2　SS琼脂平皿培养基保存效果观察结果

1.3试管类培养液塑料袋扎口法与纸包法的比较

对于试管类培养基，同理做水分减少率实验，试管类培养液，冰箱保存常规法水分浓缩率不超过10%，一般为7～14 d，而塑料袋扎口法冰箱保存可达50 d以上[4]。结合细菌生长要求，我们认为试管类培养液，常规保存有效期为7～14 d；塑料袋扎口法保存有效期至少为50 d，见表3。

表1　培养基水分浓缩对细菌生长的影响

表3　试管类培养液两种方法保存效果

2　讨 论

2.1影响微生物检验质量因素很多，有原材料、水质、灭菌效果、pH及其他。但是，有效的培养基是关键。培养基的配制、保存尤为重要。无论何种培养基（液），水分的改变既改变了各种成分的比例、pH，也改变了其外观性状（如固体培养基硬度），从而改变了所需培养的微生物的适宜生长、繁殖必需条件，这是培养基（液）失效的主要原因。因而，在日常工作中，我们只有使用有效期内的培养基（液），才能有效、准确地进行微生物的培养、分离、鉴定；才能保证微生物检验工作的质量。GB/T27405-2008《实验室质量控制规范 食品微生物检测》[2]中对培养基有很详细的规定，我们应该将培养基的质量控制纳入质量管理体系进行严格管理。

2.2保存培养基（液）的冰箱无法达到无菌和密闭，有一定空气流通。因而，常规法保存培养基（液），空气流通可加速培养基（液）中水分的流失，从而改变各种成分的比例、pH和其外观性状（如固体培养基硬度）；也增加空气中微生物对其污染[5]。塑料袋扎口法，减少了空气的流通，从而，既减少培养基（液）中水分的流失，也减少空气中微生物对其污染，保存有效期相对更长[6]。

2.3尽管“非典”以后，国家及各级政府都加大投入，疾病预防控制机构的软硬件建设得到一定提高。但是，由于疾病预防控制工作的性质及各种因素的影响，卫生检验工作受到很大的冲击。尤其是很多基层单位，在微生物检验方面投入甚微。近年来，工作量呈逐年增长趋势，检验人员却逐年减少，许多需要开展的工作受到了严重影响。塑料袋扎口法虽然简单，但是经济、实用、有效；尤其对基层疾病预防控制中心来说，既大大节省了大量重复劳动量，提高了工作效率，解决了工作量大和相对人员偏少的矛盾；又充分体现小投入大产出，解决了基层疾病预防控制中心培养基相对配制量多和实际利用少的大矛盾。

[1] 吴清平,孟凡亚,蔡芷荷,等.微生物培养基质量控制技术和标准[J].微生物学通报,2006,33(6):128-132.

[2] 孙燕萍,凌霞,彭浩,等.1份半固体培养基保存的模拟肛拭样品鉴定结果分析[J].现代预防医学,2009,36(23):4542-4543.

[3] Lopes CAP,dos Santos RR,Celestino JJH,et al.Short-term preservation of canine preantral follicles: Effects of temperature,medium and time[J].Anim Reprod Sci,2009,115(1):201-214.

[4] Onuma K,Urabe K,Naruse K,et al.Cold preservation of rat osteochondral tissues in two types of solid organ preservation solution, culture medium and saline[J].Cell Tissue Bank,2009,10(1):1-9.

[5] Isachenko E,Isachenko V,Nawroth F,et al.Human ovarian tissue preservation: is vitrification acceptable method for assisted reproduction?[J].Cryoletters,2008,29(4):301-314.

R446.5

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1671-8194（2014）19-0110-02