莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型红细胞压积的影响①

艾厚喜，孙芳玲，王晓峰，李艳菲,3，张丽，陈乃宏，王文

·基础研究·

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型红细胞压积的影响①

艾厚喜1，孙芳玲1，王晓峰2，李艳菲1,3，张丽1，陈乃宏2，王文1

目的 研究莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注(MCAO)大鼠红细胞压积(Hct)的影响。方法改良Longa法制备大鼠MCAO模型，造模后分别给予莫诺苷小剂量(30 mg/kg,n=8)、中剂量(90 mg/kg,n=8)、大剂量(270 mg/kg,n=8)和阿司匹林(n=8)连续灌胃7 d，每天1次。腹主动脉采血，全自动血样测试仪检测Hct。结果模型组大鼠Hct较假手术组显著升高(P＜0.001)；莫诺苷小、中、大剂量组和阿司匹林组的Hct均比模型组降低(P＜0.05)。结论莫诺苷能显著性抑制局灶性脑缺血再灌注引起的Hct升高。

莫诺苷；局灶性脑缺血；红细胞压积；大鼠

[本文著录格式]艾厚喜，孙芳玲，王晓峰，等.莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型红细胞压积的影响[J].中国康复理论与实践,2014,20(3):230-232.

缺血性脑卒中是常见的脑血管疾病，具有高致病率、高致残率和高致死率。近年来，由于人们生活压力的增加和饮食习惯的改变等，脑卒中发病率呈现逐年上升的趋势，严重影响人们的生活质量。正常的血液流变性是维持脏器和组织血液灌注、代谢功能的重要条件，血流变异常而导致的微循环灌注不足是许多疾病发生的重要原因。血液流变异常与缺血性脑病的密切联系开始引起人们的注意，血液黏度与组织血流，特别是脑血流量呈负相关，而红细胞压积(hematocrit percentage,Hct)又在评判血液黏度及指导临床用药方面有重要作用[1]。Lowe等的研究显示，成人体内血黏度变化有47.6%归因于Hct[2]。

中药山茱萸是山茱萸科植物山茱萸(Cornus offcinalis)的干燥成熟果肉，具有补益肝肾、涩精固脱的作用。莫诺苷为本实验室从山茱萸中提取的环烯醚萜类化合物。前期研究发现，莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠有神经保护作用[3]，且能有效降低模型的血液黏度升高[4]，抑制血小板聚集[5-6]及抗凝血作用[7]。本研究观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠Hct的作用。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

莫诺苷：首都医科大学宣武医院药物研究室根据自行研制的工艺从山茱萸的干燥成熟果肉中提取的单体，为白色结晶粉末，HPLC检测纯度为98.5%，临用前用蒸馏水溶解成所需浓度。阿司匹林(ASA)：购自SIGMA公司，临用时用蒸馏水溶解，以0.1 mol/L NaHCO3调pH至7.0左右。

1.2 实验动物

健康雄性Sprague-Dawley大鼠，体重(260±10) g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号SCXK(军)2007-004。SPF级常规饲养，室温(24±1)℃，湿度(55±5)%，手术前12 h禁食不禁水。

1.3 实验仪器

尼龙线栓，直径0.26 mm(2634-100)：北京沙东生物技术有限公司。SF-8600全自动血样测试仪：北京赛科希德公司。Microfuge低温离心机：美国BECKMAN公司。肝素抗凝管：湖南浏阳市医用仪具厂。

1.4 模型制备

参照Longa法[8]制备局灶性脑缺血再灌注大鼠模型并略加改进。大鼠用10%水合氯醛4 ml/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定于手术台上，颈部皮肤用碘伏消毒，正中线剪2 cm左右，钝性分离右侧颈总动脉，微动脉夹暂时夹闭近心端；从颈总动脉分叉处向上分离颈外动脉和颈内动脉，结扎颈外动脉，微动脉夹暂时夹闭颈内动脉，近心端结扎颈总动脉。在距颈总动脉分叉处约2 mm处剪一斜行小动脉切口，插入经多聚左旋赖氨酸处理过的直径0.26 mm的栓线，深约18 mm时产生阻挡感，说明栓线经颈总动脉分叉处通过颈内动脉入颅进入大脑中动脉(middle cerebral artery, MCA)。记录栓塞开始时间。栓塞30 min后，将栓线退至颈总动脉切口处。

假手术组大鼠插入栓线深10 mm，其余操作与模型组相同。手术中及再灌注期间死亡大鼠不计入实验。

大鼠清醒后，进行行为学评分并给药，自由饮水、进食。

1.5 分组和给药

动物于术毕清醒后和术后第7天参照Zea Longa法[8]进行神经功能缺损评分：提鼠尾离开地面约30 cm，观察两前肢状况；将大鼠置于地面，观察行走情况。1分：提鼠尾不能充分伸展对侧前肢。2分：提鼠尾对侧前肢屈曲。3分：将大鼠置于地面，向对侧行走。4分：将大鼠置于地面，向对侧转圈，呈追尾状。5分：损伤严重，对侧瘫痪。无神经功能缺损和昏迷的动物剔除，有神经功能的大鼠随机分为模型组、ASA组(10 mg/kg)、莫诺苷小剂量组(30 mg/kg)、中剂量组(90 mg/kg)、大剂量组(270 mg/kg)，各组大鼠8只。采用灌胃给药，每天1次，连续给药7 d。假手术组和模型组相应给予等量蒸馏水。

1.6 Hct测定

取末次给药后完成神经行为学评分的大鼠，10%水合氯醛400 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主动脉采血3 ml，收集入肝素抗凝管内。用SF-8600全自动血样测试仪检测Hct值。

1.7 统计学分析

采用SPSS 13.0统计学软件进行处理。结果用(±s)表示，组间样本均数比较用单因素方差分析(ANOVA)。显著性水平α=0.05。

2 结果

模型组大鼠Hct较假手术组显著升高(P＜0.001)。莫诺苷3个剂量组Hct均比模型组降低(P＜0.05)。ASA组Hct也较模型组显著降低(P＜0.001)。见表1。

表1 各组大鼠Hct比较(%)

3 讨论

缺血性脑血管病(ischemic cerebral vascular disease,ICVD)通常是因为一条或多条脑内动脉被阻塞，进而导致局部或全脑的血流不畅，最终引起脑缺血、甚至发生梗死等一系列病理变化[9]。目前临床治疗缺血性脑卒中确切有效的治疗方法就是尽早溶栓[10]，临床治疗药物中，仅组织纤维蛋白溶酶原激活剂一种药物被美国FDA批准用于急性脑卒中的治疗。开发有效的脑卒中预防、治疗药物具有重大价值。

Hct是指红细胞在血液中所占的容积比值，是影响血液黏度的重要因素。当红细胞浓度增加，其表面负电荷相对减少，聚集性增加。血液黏度随Hct的增加而迅速增高，导致血栓性疾病的发生[11]。Hct＞46%为缺血性脑卒中的危险因素，其水平与梗死灶体积正相关[12]。临床可通过监测血液Hct的变化，了解脑血栓形成的病理状态，预测缺血性脑卒中的进展，以及判断药物治疗的效果。阿司匹林临床预防和治疗ICVD已有确切疗效，但有选择性差、副作用明显等缺点。中药活血化瘀方剂在治疗脑血管病上有丰富的实践，红花、绞股蓝、灯盏花素等中药均有降低血液黏度，改善脑卒中预后的功效[13-14]，且安全性好，不良反应较少。但中药单体成分通过改善血流变化、降低Hct等治疗脑卒中的研究还较少。

本研究显示，从中药山茱萸中提取的有效单体化合物莫诺苷能明显降低局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠Hct，其中莫诺苷中剂量、大剂量组改善血液黏度的作用与阿司匹林的效果相似，为莫诺苷的进一步开发提供重要的实验依据。

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中国康复医学会康复治疗专业委员会第十一届年会征文通知

中国康复医学会第十一届康复治疗学术年会将定于2014年10月22～24日在江西南昌召开，届时将邀请国内外著名康复专家进行专题讲座，并同期举办第四届物理治疗论坛、第四届作业治疗论坛、第四届康复辅助用具论坛、第三届言语治疗论坛。会议期间将进行论文交流、讨论及优秀论文评选等学术活动，热烈欢迎全国康复科、理疗科、骨科、神经科等相关学科人员参加，本次会议将授予国家Ⅰ类继续医学教育项目学分。

征文范围：康复医学基础与临床研究；骨科康复；神经康复；儿童康复；传统医学与康复研究；康复工程；康复教育与学科建设；康复护理；社区康复等。

投稿要求：提交不超过1000字的摘要。摘要应按照期刊要求撰写。若参加优秀论文评选，须提交全文。论文应为未公开发表的文章，要求具有科学性、先进性、实用性、创新性，数据真实可靠，文字准确精练。如为基金项目，请在文后注明基金来源及编号。来稿请附个人简历(100字内)，注明联系方式(手机、电子邮箱)。

请通过电子邮件发送论文，不接受纸质稿件，邮件主题为：(征文)论文题目。投稿邮箱：kangfu201410@ 163.com。截稿日期为2014年7月31日。如有疑问，请联系南昌大学附属第一医院康复科：张军、邵秀芹，邮编：330006。联系电话：0791-88692591。传真：0791-88698601。

中国康复医学会康复治疗专业委员会

Effect of Morroniside on Hematocrit Percentage in Rat of Focal Cerebral Ischemia/Reperfusion

AI Hou-xi,SUN Fang-ling,WANG Xiao-feng,et al.Department of Pharmacology,Xuanwu Hospital of Capital Medical University,Beijing 100053,China

ObjectiveTo investigate the effect of morroniside on hematocrit percentage in a rat model of focal cerebral ischemia/reperfusion.MethodsAfter the modified model induced with occlusion of middle cerebral artery(MCAO)with suture embolus,morroniside was administered intragastrically at the dose of 30 mg/kg(n=8),90 mg/kg(n=8),and 270 mg/kg(n=8)once a day for 7 d.Acetyl salicylic acid (ASA)was used as positive drug(n=8).Hematocrit percentage was measured with automatic blood tester.ResultsCompared with the sham group,hematocrit percentage of the model group significantly increased(P＜0.001),but increased less in those treated with morroniside and ASA(P＜0.05).ConclusionMorroniside could inhibit the increase of hematocrit percentage in MCAO rats.

morroniside;focal cerebral ischemia;hematocrit percentage;rats

R743.3

A

1006-9771(2014)03-0230-03

2013-06-28

2013-07-18)

1.“重大新药创制”科技重大专项 (No.2009ZX09102201-106)； 2.国家自然科学基金项目 (No.30973893;No.81173575; No.30973513)；3.北京市自然科学基金项目(No.7102077)；4.北京市教委科技创新平台项目(No.111219)；5.2011年北京市卫生系统高层次卫生技术人才培养计划项目；6.第52批中国博士后基金项目；7.北京市博士后科研活动经费项目。

1.首都医科大学宣武医院药物研究室，教育部神经变性病学重点实验室，北京市老年病医疗研究中心，北京市100053；2.中国医学科学院药物研究所，北京市100050；3.河北北方学院，河北张家口市075000。作者简介：艾厚喜(1956-)，男，北京市人，主管技师，主要研究方向：中药药理。通讯作者：王文。

10.3969/j.issn.1006-9771.2014.03.008