克拉霉素片含量不确定度的HPLC测量方法分析

麦焕章 旋桂香 李炜凤 杨育辉

（番禺区中心医院,广东 广州 511400）

克拉霉素片含量不确定度的HPLC测量方法分析

麦焕章 旋桂香 李炜凤 杨育辉

（番禺区中心医院,广东 广州 511400）

目的分析HPLC测量方法测定克拉霉素片含量不确定度的方法。方法评估和分析测定克拉霉素片各个环节的不确定度，指出影响不确定度的主要因素。结果得出影响测定环节各个变量不确定度，同时给出测定结果扩展不确定度以及置信水平。结论HPLC法测定克拉霉素片含量不确定度大概为1.6%。

克拉霉素片；含量；不确定度；HPLC法

克拉霉素片多用于临床鼻咽、呼吸道、宫颈炎、肺炎支原体和皮肤软组织感染的治疗中,临床多采用HPLC外标一点法测定克拉霉素片含量,本文分析评估了采用HPLC法测定克拉霉素片含量的不确定度,分析影响克拉霉素不确定度的相关因素,为临床正确评价克拉霉素片不确定度提供参考意见。

1 测定方法

1.1 克拉霉素片含量不确定HPLC测量准备条件

实验多采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂,流动相:磷酸盐缓冲液-乙腈,柱温为45 ℃,检测波长210 nm,将克拉霉素峰值作为计算标准,理论板数要＞3000,拖尾因子＜2.0,确保克拉霉素峰值、相邻杂峰分离度与要求相符。

1.2 配置对照品溶液

克拉霉素作为对照品,适量,将其置于50 mL的量瓶中,流动相溶解,定量稀释,将其稀释为0.35 mg/mL的溶液。

1.3 配置供试品溶液

取克拉霉素10片,0.25克/片,称定,研磨,称取适量研磨的细粉,将其置于100 mL的量瓶中,向量瓶中加入流动相,摇晃溶解,加水稀释,用力摇匀并滤过,该溶液即为供试品溶液。

1.4 克拉霉素片含量不确定度的测定方法及数据分析

分别取对照品溶液和供试品溶液各20 μL,将两种溶液分别注入相色谱仪,密切观察并记录两种溶液的峰面积,结果见表1。

表1 实验结果

计算公式如下:X=[（As×Vs×Wr×M×P） /（Ar×Ws×Vr×K ×10） ]×100%,其中,X为克拉霉素标示量,As是供试品溶液峰面积,Vs是样品稀释倍数,Wr是对照品称样量,M是10片克拉霉素重量,P是对照品纯度,Ar是对照品溶液峰面积,Ws是供试品称样量, Vr是对照品稀释倍数,K标示克拉霉素片剂标示量（0.25 g）。

2 克拉霉素片含量不确定度的量化分析

2.1 对照品引起的不确定度

由对照品溶液纯度造成的克拉霉素片相对不确定度属于B类,中国药品生物制品检定所提供纯度为97.9%的克拉霉素对照品,在使用该对照品之前无需干燥处理。

测量过程中,因对照品称量造成的克拉霉素片相对不确定度也是B类不确定度,使用双量程电子分析称,最大允许误差为正负0.03 mg,所以,对照品称量引起的相对不确定度为0.03/31/2=0.0173 mg。

由电子分析电平称重复性引起的不确定度也是B类不确定度,电子分析天平允许误差为正负0.05 mg,按照矩形分布,其不准确度为0.05/31/2=0.0289 mg,单次称量的不确定度为（0.01732+0.02892）1/2=0.0337 mg。整个称量的过程根据减重的方法进行称量,最终得出不确定度为0.0477mg。

对照品稀释造成的不确定度属于B类不确定度,按照规定,A级50 mL容量瓶的体积允差加减0.05 mL,接下来可以依据三角分布相关性质得到不确定度[1]。

由容量瓶体积重复性引起的克拉霉素片含量不确定度属A类,将50 mL量瓶加水稀释至刻度,重复10次称量,得到不确定度。

温度引起的不确定是B类不确定度,20 ℃温度下校准50 mL容量瓶,按照矩形分布,95%置信概率下,不确定度是6×2.1×10-4×50/（31/2×50）=7.27×10-4。

对照品溶液稀释造成的不确定度由对照品稀释、容量瓶体积重复性以及温度引起的不确定共同绝对,计算所得的不确定为8.50×10-4。

2.2 供试品引起的不确定度

供试品引起的不确定主要包括供试品称量引起的不确定度、供试品稀释引起的不确定度、对照品溶液进样重现性的不确定度、供试品溶液进样重现性的不确定、平均片重称量引起的不确定度引起的。其中,供试品称量引起的不确定度包括电子分析天平校准不确定度、电子分析电平称量重复性不确定度以及供试品双样称量的相对不确定度。供试品稀释引起的相对不确定度包括容量瓶体积重复性不确定度、温差引起的不确定度以及供试品溶液稀释引起的相对不确定度共同决定。计算方法如上。引起克拉霉素片含量不确定的因素及分析结果见表2。

表2 不确定度各分量分析结果

3 讨 论

任何完整的药品检验报告书中均应包含不确定度评定,因为在检验过程中,任何检验防范都会引起不确定度,而不确定度很大程度影响着监测结果[2]。通过本文不确定度的分析可知,利用HPLC法测定克拉霉素含片不确定度多来自称量对照品、配置供试品溶液以及液相色谱仪等多个环节,在上述影响因素中,对照品及供试品溶液的色谱分析进样环节不确定度在很大程度上影响着检验不确定的结果。本文研究表明,利用HPLC方法测定克拉霉素片含量的时候,要保证被测药品相关参数和液相色谱仪技术性能指标项适合,并确保定期进行相色谱仪计量检定和核查工作,保证液相色谱仪处于稳定状态；另外,要选用精度较高的天平进行称量,从各方面确保降低操作及人为因素造成的不利结果[3-4]。

总之,利用HPLC测量方法测量克拉霉素含量不确定的时候,要保证液相色谱仪各项性能指标正常,在测定过程中要核查各个环节,确保液相色谱仪工作于最佳状态,以便确保克拉霉素片含量检验结果的客观正确性。不能为了节约成本或方便操作等目的降低对照品及供试品取样量,应从根本上杜绝人为因素或随意操作等对克拉霉素片含量不确定度测量的影响,从而实现准确无误的测量。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:153.

[2] 邢以文.硫酸庆大霉素片含量测定的不确定度评估[J].中国现代药物应用,2011,2(12):67-68.

[3] 吴美芳.高效液相色谱法测定克拉霉素片的溶出度[J].中国药师,2008,3(12):57-58.

[4] 饶毅,夏川川,周海滨,等.高效液相色谱法测定白芍总苷的不确定度分析[J].中国实验方剂学杂志,2011,4(3):57-58.

R917

B

1671-8194（2014）25-0090-02