抗核抗体滴度检测方案的优化和价值

夏志鸿 周洁

贵阳中医学院第二附属医院检验科 贵州贵阳 550001

抗核抗体滴度检测方案的优化和价值

夏志鸿 周洁

贵阳中医学院第二附属医院检验科 贵州贵阳 550001

目的:探讨采用间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体滴度的方案优化和价值。方法:间接免疫荧光法(IIF)。结果:一种优化方案是我们将标本先做1:100的稀释度，然后再把阳性标本取出加做1:320，1:1000，1:3200，＞1:3200的滴度的方案，ANA滴度结果与标准方案的结果一致。另一种优化方案则是只需做1:100，1:1000，1:3200甚至只需做1:100，1:1000的方案，ANA滴度结果与标准方案的结果也一致。结论:我们采用的两种优化方案操作都取得了很好的结果，不但减少了很多繁琐的稀释操作，也减少了观察荧光的时间，大大提高了工作效率。另外，ANA试剂和仪器成本高，这两个方案也可以节省试剂，提高经济效益。

抗核抗体(ANA)滴度是指与相同稀释度的阴性血清相比，刚刚能检测到特异性荧光反应时的样品最高稀释倍数。ANA滴度检测是一个专业性很强的工作，必须由有经验、经过培训的技术人员或研究人员实施［1］。间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体的滴度是经典的筛选方法。欧蒙推荐的标准稀释方案为1:100、1:320、1:1000、1:3200、1:10000。但是间接免疫荧光法全是手工的方法，操作繁琐，特别是判读荧光的结果非常辛苦。如果采用标准的滴度稀释方法，由于标本量大，每个标本我们都需要做5个稀释度，而且需要看5个荧光结果，实验人员的工作量非常大。因此，在保证实验结果准确性的基础上。对标准方案进行优化，找到一种省时省力的方案很有必要。一种优化方案我们采用先做1:100的稀释度，再把阳性标本取出加做1:320，1:1000，1:3200，1:10000的稀释度;另一种优化方案则是只需做1:100，1:1000，1:3200的稀释度甚至只需做1:100，1:1000的稀释度。

1 资料与方法

1.1 检测对象104标本均来自贵阳中二附院的病人以及体检人群，其中男性41例，女性63例，平均年龄45岁。

1.2 试剂及检测方法ANA检测以鼠肝和Hep－2细胞为底物，用IIF测定，试剂盒均来自德国欧蒙医学试验检测股份有限公司生产。

1.3 检测方法我们先用标准方案分别进行1:100，1:320，1:1000，1: 3200，1:10000稀释;一种方案我们采用先做1:100的稀释度，再把阳性标本取出加做1:320，1:1000，1:3200，1:10000的稀释方案;另一种方案则是只需做1:100，1:1000，1:3200甚至只需做1:100，1:1000的方案。步骤操作严格按照说明书进行。

2.结果见表1－表4

本研究中104例血清检查结果:表1是标准方案的ANA滴度结果。ANA滴度最终结果为1:100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，1: 3200有12份，＞1:3200有9份。

表2中是第二种方案的ANA滴度最终结果为1:100有12份，1:320 有24份，1:1000有15份，1:3200有12份，＞1:3200有9份。跟据荧光强度可以推断出1:320有24份，＞1:3200有9份。

表3中是第三种方案的ANA滴度最终结果为ANA滴度最终结果1: 100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，1:3200有12份，＞1:3200 有9份。跟据荧光强度可以推断出1:320有24份，1:3200有12份，＞1: 3200有9份。

表4中，ANA滴度最终结果1:100有12份，1:320有24份，1:1000有15份，但是1:3200与＞1:3200的份数与表1有明显差异。

对表中结果做统计学处理:表1的结果与表2结果、表3结果无明显差异。表1的结果与表4的结果有明显差异。

表1 104例血清标本ANA 5个稀释度的荧光结果

表2 104例血清标本ANA 3个稀释度的荧光结果

表3 104例血清标本ANA 2个稀释度的荧光结果

表4 104例血清标本ANA 1个稀释度的荧光结果

3.讨论

自身免疫病发病率高、临床表现复杂。几乎所有的自身免疫病在发生发展过程中都会产生自身抗体。自身抗体在自身免疫病的早期诊断、治疗及预后评估中起到了重要作用［2］。自身抗体检测是系统性自身免疫病诊治中必不可少的工具。随着早期诊断、规范化治疗的广泛开展，自身抗体检测发挥的作用也越来越受到重视。

ANA系细胞核内各种蛋白质分子及其复合物(DNA、RNA、碱性组蛋白、非组蛋白、磷脂及各种酶等)为靶抗原的自身抗体的总称。在众多的自身免疫性疾病中，细胞核的核仁、核内染色质、非组蛋白以及由RNA和相关蛋白构成的各种核糖核蛋白粒子都可以成为自身免疫反应攻击的靶子，继而产生ANA［3］。ANA筛查试验是针对细胞中的所有抗原成分的总抗体，对自身免疫性疾病有很高的诊断敏感性，所以被认为是此类疾病的首选筛查项目［3］。

IIF法检测ANA滴度是经典的筛选方法，欧蒙推荐的标准稀释方案为1:100、1:320、1:1000、1:3200、1:10000。但是间接免疫荧光法全是手工的方法，操作繁琐，特别是判读荧光非常辛苦。如果采用标准的滴度稀释方法，在临床工作中，由于标本量大，每个标本的ANA滴度检测我们都需要做5个稀释度而且需要看5个荧光结果，实验人员的工作量非常大。因此，在保证实验结果准确性的基础上。我们对标准方案进行了优化。

本研究中104例血清检查结果:表1是标准方案的ANA滴度结果。表1结果与表2、表3结果无明显差异。表1结果与表4结果有明显差异。

因此在有一定临床经验的前提下，除了标准方案外，我们采用先做1: 100的稀释度，再把阳性标本取出加做1:320，1:1000，1:3200，＞1:3200的滴度的方案，也可以有很好的效果。另一种方案则是只需做1:100，1: 1000，1:3200或者只需做1:100，1:1000的方案，根据临床经验再判断结果也完全可行。

我们采用的两种优化方案都取得了很好的结果，不但减少了很多繁琐的稀释操作，也减少了很多观察荧光的时间，大大提高了工作效率。另外，ANA试剂及仪器成本高，这两个优化方案也可以节省试剂，提高经济效益。在临床实际工作中，我们根据实验室的具体情况，灵活运用。

总之，IIF法检测ANA滴度是一项复杂和辛苦的工作。我们采用的两种优化方案都能大大减少操作的强度和时间，也能提高经济效益。

［1］孙尔维.应加强自身抗体检测的临床应用与研究.中华风湿病学杂志，2014，4(18):217－219

［2］李雪，贾园.2013年抗核抗体检测的最新欧美建议.中华风湿病学杂志，2014，5(18):35－358

［3］曹海涛.抗核抗体的实验室检测及临床意义.华北国防医药，2006，4(18):148－149

R446.6

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1009－6019(2014)09－0167－02