原子吸收光谱法测定哈蟆油发酵乳中钙、铁、锌含量

郝 洁，邱智东，朱 凯，翁丽丽

(长春中医药大学，长春 130117)

哈蟆油发酵乳系实验室自主研发，采用益生菌发酵而成的液体口服制剂。具有较易口服吸收，无刺激气味的优点。解决了哈蟆油固有的口感问题，并通过益生菌的作用将哈蟆油中诸多大分子物质分解成小分子物质，更易被人体快速和多途径吸收。本实验采用原子吸收光谱法对哈蟆油发酵乳中钙、铁、锌进行测定，旨在拓展哈蟆油的应用领域。

1 实验材料

1.1 仪器 岛津AA-6800F型原子吸收分光光度计(日本东京岛津制造所)、WX-4000微波消解仪(南京贝帝实验仪器有限公司)、Water Purifier 实验室专用超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)、EL204电子天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司)。

1.2 试剂与标准液 盐酸、硝酸、过氧化氢等，所用试剂均为优级纯。20 g/L氧化镧溶液：称取23.45 g氧化镧(纯度大于99.99%)，现用少量水湿润再加75 mL盐酸于1 000 mL容量瓶中，加去离子水稀释至刻度。钙标准储备液[1]:准确称取1.248 6 g碳酸钙(纯度大于99.99%)，加50 mL去离子水,加盐酸溶解，移入1 000 mL容量瓶中,加20 g/L氧化镧溶液稀释至刻度，得到钙的标准储备液。浓度为500.0 μg/mL。铁标准储备液[2]：称取高纯金属铁粉1.000 0 g，用40 mL 50%硝酸溶液溶解，用去离子水定容于1 000 mL容量瓶中。准确吸取10.0 mL,用2%盐酸溶液定容到100 mL容量瓶中，得到铁的标准储备液，浓度为100.0 μg/mL。得到锌标准储备液(亦参照文献[5])，浓度为100.0 μg/mL。

1.3 实验样品 哈蟆油发酵乳口服液，由长春中医药大学研发中心提供。

2 实验方法

2.1 样品处理 取3 mL哈蟆油发酵乳口服液，加硝酸5 mL，放置过夜，再加入过氧化氢1 mL，盖好消解罐盖，按表1进行微波消解[3]，待消解完成后从微波消解仪中取出消解罐，置于通风橱中140 ℃电热套上加热挥发，蒸至近干，转移至25 mL容量瓶中，用氧化镧溶液定容至刻度线，再取10 mL定容至25 mL，摇匀，以测钙用。另取样品2 mL做同样处理，转移至10 mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度线，摇匀，以测铁、锌用。

表1 微波消解程序

2.2 测定条件 采用原子吸收光谱法测定样品中钙、铁、锌。具体条件见表2[4]。

表2 原子吸收分光光度计工作条件

3 实验结果

3.1 标准曲线 用氧化镧溶液逐级稀释钙标准储备液，用去离子水逐级稀释铁、锌标准储备液，分别配置不同浓度的钙、铁、锌标准工作溶液，采用原子吸收光谱法按照各元素测定工作条件，分别对各元素标准系列溶液进行测定。结果见表3。

表3 各元素线性关系考察结果

3.2 精密度试验 分别取一定浓度的钙、铁、锌标准工作溶液连续测定6次，计算RSD值，结果见表4。试验结果表明仪器精密度良好。

表4 各元素精密度试验结果

3.3 稳定性试验 按照各元素测定工作条件进行测定，分别记录时间为0，10，20，30，40，50 min时标准工作溶液及样品溶液的吸光度值，并计算RSD值。钙、铁、锌标准工作溶液的测定RSD值分别为2.08%、2.79%、1.13%；样品溶液钙、铁、锌测定的RSD值分别为1.15%、1.70%、1.28%。表明测定结果在50 min稳定，实验方法稳定可行。

3.4 重复性试验 按样品处理方法平行处理同一批次的样品6分,按照各元素测定工作条件进行测定，测得含量平均值分别为288.692 3、1.736、2.361 1 μg/mL,RSD值分别为0.42%、2.99%、2.50%，结果表明，方法重复性良好。

3.5 加样回收率试验 取样品适量，按各元素含量1∶1的比例加入标准溶液，以样品处理方法处理，按照各元素测定工作条件进行测定,结果见表5。表明用该法测定哈蟆油发酵乳中钙、铁、锌含量，准确度良好，测定结果可靠。

3.6 样品测定 取3批哈蟆油发酵乳口服液，以样品处理方法处理，每批平行处理2分。按照各元素测定工作条件进行测定，结果见表6。

表5 各元素回收试验结果

表6 哈蟆油发酵乳含量测定结果

4 讨论

由实验结果可知，所建立的哈蟆油发酵乳中钙、铁、锌含量的测定方法稳定可行，准确度高，测得其钙、铁、锌含量分别为286.611 1、2.342 6、1.787 0 μg/mL。微量元素是人体维护正常生理功能必不可少的重要物质[5]。钙除作为骨质主要构成外，还能增加大脑皮层的抑制过程,调节兴奋的平衡失调，增加毛细血管壁致密度，降低其通透性，减少渗出，具有抗炎消肿、抗过敏作用。铁是生物体内含量最丰富的微量元素之一，是血红蛋白的重要组成部分和血液中输送氧气和交换氧气的重要元素。锌参与许多酶的构成，这些酶与糖、脂类、核酸、蛋白质代谢有关，能影响激素的合成、分泌及与靶器官结合功能等[6]。哈蟆油发酵乳中含有大量的钙及微量的锌和铁，营养价值高，市场前景广阔。

[1]国家质量监督检验检疫总局.GB-T5009.92-2003食品中钙的测定[S].北京:中国标准出版社,2003.

[2]国家质量监督检验检疫总局.GB541321-2010婴幼儿食品和乳品中钙、铁、锌、钠、钾、镁、铜和锰的测定[S].北京:中国标准出版社,2010.

[3]张修景.微波消解样品-火焰原子吸收光谱法测定人发中10种微量元素[J].理化检验(化学分册),2012,48(6):653.

[4]焦立响,夏艳,黄梅,等.马蹄香中8种微量元素的初级形态分析[J].食品科技,2012,37(2):48-51.

[5]陈福北,陈少东,张利敏,等.原子吸收光谱法测定山柰中金属元素[J].食品科技,2010,35(5):316-318.

[6]梁启超,沈广志,魏韬,等.原子吸收光谱法测定哈蟆油中微量元素[J].微量元素与健康研究,2011,28(3):31-32.