补肾颗粒质量控制研究*

★ 熊跃 胡小玲

(南昌市中西医结合医院 江西 南昌 330009)

补肾颗粒是由熟地、山茱萸、山药等十二味中药材组成。用于肝肾阴虚，虚阳上扰引起的头痛、头晕等症。但补肾协定处方为水煎剂，质量稳定的保存期短，更重要的是未建立质量控制的标准。考虑到中药材的来源复杂，即使同一种药材，产地及采收季节不同，其活性成分含量的波动也很大。为弥补补肾协定处方煎剂的不足，本课题的研究力求通过工艺筛选及研究，制备出剂型稳定的补肾颗粒，然后对处方中的主药建立有效成分的质量标准控制方法，以确保该制剂在实际运用中的疗效稳定，提高治愈率。

1 仪器与试药

Agilent1100高液相色谱仪； kromasil C18色谱柱 (4.6mm×250mm,5μm)；FA2004N电子天平;Sartorius BT25S电子天平；岛津UV-2101紫外分光光度计；SK250H超声波清洗仪；薄层层析板。

熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号：110742-200516); 马钱苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111640-200502)；补肾颗粒(自制，批号：20080926、20080928)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；乙腈为色谱纯；甲醇为分析纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

2.1.1 熊果酸为山茱萸的主要化学成分，故选择熊果酸作为对照，以环己烷-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂，对补肾颗粒进行薄层色谱鉴别。

供试品溶液的制备：取本品20g，研细，加入乙醚70mL，回流2h，过滤，滤液挥去乙醚，残渣加0.5mL丙酮作为供试品溶液。阴性对照品溶液的制备：除山茱萸外，其余各药按处方量投料制成阴性样品，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照品溶液。照薄层色谱法《中国药典2010版一部附录试验》[1]、《中华人民共和国药典中药薄层色谱彩图集》[2]。供试品色谱中与对照品色谱相应的位置上显相同的斑点,该项鉴别专属性强，分离效果好，阴性样品无干扰。见图1。

1.供试品溶液；2.熊果酸对照品溶液；3.阴性样品溶液

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件 采用kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈-水(14∶86)为流动相，流速为1mL/min；进样量20μL；检测波长为236nm，柱温为25℃。理论板数按马钱苷峰计算应不低于3000。

2.2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备：取马钱苷对照品适量，精密称定，加60%甲醇制成每1mL含马钱苷20μg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取装量差异下的本品，研细，取约1.2g，精密称定，加60%甲醇25mL，超声30min，放冷，补重，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照溶液的制备：取缺山茱萸药材的阴性样品1.2g，按供试品溶液方法制备，即得。

2.2.3 系统适用性及阴性干扰试验 精密吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各20μL，注入液相色谱仪，色谱见图2 。由图2可知，在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上，供试品有色谱峰出现，而阴性对照无色谱出现，故本品中其他组分对马钱苷的含量测定无干扰。在该色谱条件下，马钱苷分离效果较好，理论板数按马钱苷计算不低于3000。

A.阴性对照；B.对照品；C.供试品

2.2.4 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液21.28μL，重复测定5次，结果，峰面积的相对标准偏差RSD=0.8%，表明本方法精密度良好。

2.2.5 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液21.28μL，分别于0，2，4，6，8 h进样测定。结果RSD为0.7%，表明马钱苷供试品在8 h内稳定性良好。

2.2.6 线性关系考察 精密称定马钱苷对照品适量，加60%甲醇至刻度；精密量取0.3，0.5，1，2，3 mL分别置10mL容量瓶中，加60%甲醇到刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各20μL，照2.2.1色谱条件下测定，记录峰面积，以对照品的浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=34.982X+21.581，r=0.9998。马钱苷在6.384～ 63.84μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.7 重复性试验 取同一批样品(080926)精密称定5份，按照"2.2.2"项下方法制定供试品溶液，分别进样测定，计算马钱苷含量，得马钱苷平均含量为0.404mg/g粒，RSD=1.1%。表明本方法的重复性较好。

表1 马钱子苷加样回收率试验

2.2.8 加样回收率试验 取已知含量(0.404mg/g)的本品约0.2g，共五份，置容量瓶

中,分别精密加入五份12.768μg的对照品0.6mL溶液,照含量测定项下的方法试验，计算回收率。结果见表1。

表3 样品中马钱苷含量测定结果(/mg·袋-1，n=7)

2.2.9 样品含量测定 分别取各批样品,按2.1项下色谱条件进样测定,计算马钱苷的含量,结果见表3。7批样品的平均含量为6.05 mg/袋,考虑到实际生产中药材来源的不同及批量生产等因素的影响,取含量均值的75%为含量下限,规定本品每袋含山茱萸以马钱苷计,不得低于4.5mg。

3 讨论

在本实验中研究补肾颗粒中的山茱萸中熊果酸定性鉴定与采用HPLC法测定补肾颗粒中山茱萸药材马钱苷的含量在分离良好，该方法具有样品前处理简单，灵敏度高，结果准确可靠的优点，可用于补肾颗粒的质量控制研究。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社， 2010:602.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩图集 (第一册)[M].北京：人民卫生出版社，2009.

[3]谢瑞芳,周昕,顾希钧，等.RP-HPLC法测定复方自身清颗粒中马钱苷的含量[J].中国药房,2009, 20(9):679.