不同产地枳实药材柚皮苷含量分析

★ 李兵 谭梅英 朱俊锋 詹利之

(1.佛山市中医院三水医院药剂科 广东 佛山 528100；2.广东省第二中医院药学部 广东 广州 510095；3.佛山市三水区西南街道社区卫生中心 广东 佛山 528133；4.广州中医药大学青蒿研究中心 广东 广州 510445)

枳实[1]为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果。5～6月收集自落的果实，除去杂质，自中部横切为两半，晒干或低温干燥，较小者直接晒干或低温干燥。枳实具有破气消积，化痰散痞的功效，用于治疗积滞内停，痞满胀痛，泻痢后重，大便不通，痰滞气阻，胸痹，结胸，脏器下垂等症。柚皮苷是枳实的主要有效成分之一[2]。而《中国药典》2010年版枳实项下只规定了辛弗林的含量。本文在现行版《中国药典》的基础上，对不同产地枳实中柚皮苷的含量进行测定，完善了现行版《中国药典》枳实的质量标准，为其质量评价提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 安捷伦1200型高效液相色谱仪(美国)，四元梯度泵，配有DAD检测器；双杰JJ-BC系列电子分析天平(美国)；HH-4型数显恒温水浴锅(上海)。

1.2 试药 枳实药材来自江西清江、新干，重庆江津，四川泸州，湖南沅江，贵州晴隆，福建闽清、漳州，浙江磐安，广东新会共10个产地，经鉴定为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果；柚皮苷对照品(中国食品药品检定研究，批号：110722-201111)；乙腈为色谱纯，水为高纯水。

2 方法与结果[3,4]

2.1 柚皮苷含量测定色谱条件 所使用的色谱柱为安捷伦公司出品的Agilent Zobax Eclipse XDB C18柱(4.6 mm×250 mm，5μm) ；柱温25℃；流动相：乙腈-0.3%磷酸(20:80) (V/V)；流速1.0 mL/min；检测波长：283nm。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取于中国食品药品检定研究院购买的柚皮苷对照品(批号：110722-201111)12.03mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.4812mg的柚皮苷对照品溶液，在10℃以下保存，备用。

2.3 供试品溶液的制备 称取不同产地枳实药材粗粉约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定其重量，加热回流1.5 h，取出，放冷，再称定其重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察 精密吸取上述柚皮苷对照品溶液(0.4812 mg/mL) 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取上述一系列柚皮苷对照品溶液各10μL，注入安捷伦高效液相液相色谱仪中，依法测定。得到线性回归方程Y=1.5817X+6.7613(r=0.99993)，其中自变量(X)为进样量(μg)，因变量(Y)为峰面积。结果表明，柚皮苷进样量在481.20～2887.20 ng 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取同一供试品溶液(S1，江西清江)，连续进样 6 次，同法测定，计算柚皮苷峰面积的RSD=0.13%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一批样品(S1，江西清江)，按照上述方法制备供试品溶液，分别于0、1、3、6、10、18、24 小时各进样10μL。计算柚皮苷峰面积RSD=1.32%，表明供试品溶液在 24小时内稳定。

2.7 重现性试验 取同一批次枳实样品(S1，江西清江)6份，按照上述方法制备供试品溶液，同法测定。计算其平均含量为10.79%，RSD=1.37%，表明方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验 取已知含量样品(S1，江西清江)共9份，每份约0.05g，精密加入一定量的柚皮苷对照品，依上法制成供试品溶液，同法测定含量，计算平均回收率为98.16%，RSD为1.82%，表明该含量测定方法可行。

2.9 样品含量测定 取不同产地的枳实样品，按照上述方法制备供试品溶液，同法测定，计算样品中柚皮苷的含量，结果见表1，图1。

表1 不同产地枳实样品中柚皮苷含量测定结果

图1 枳实供试品、柚皮苷对照品高效液相色谱图

3 讨论

本文分别对提取方法(超声提取、回流提取)和提取时间(30、60、90、120min)进行了考察。结果表明，加热回流提取选择1.5 h，枳实中柚皮苷基本能够提取完全。此外，分别考察了不同的色谱柱和流动相，最终以Agilent Zobax Eclipse XDB C18为色谱柱，选择乙腈-0.3%磷酸(20∶80) (V/V) 为流动相，此时柚皮苷峰形良好且达到较好的分离效果。

从柚皮苷含量测定结果可见，不同产地枳实样品中柚皮苷含量存在较大的差异。

其中，四川泸州所产的枳实柚皮苷含量最高，达到13.25%；其次为重庆江津、江西新干和清江产地的枳实，柚皮苷含量分别为12.03%、11.51%和10.79%。柚皮苷含量最低为福建漳州所产枳实(3.82%)，与福建闽清产地枳实柚皮苷含量(9.63%)形成鲜明对比；两者从性状上看，本次实验所采集的福建闽清枳实个头较大。上述结果表明，枳实中柚皮苷的含量与药材产地有关。现行版《中国药典》只规定了枳实中辛弗林的含量，本文所建立的含量测定方法，可以提高了枳实的质量控制水平。

[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典2010年版(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2010：230-231.

[2]卫生部药政管理局，中国药品生物检定所. 现代实用本草(中册)[M].北京：人民卫生出版社，2000：182-185.

[3]梁远园，冯彪，祝晨蔯，等. HPLC法测定枳实药材中橙皮苷与柚皮苷的含量[J].中药新药与临床药理，2006，17(9)：359-361.

[4]谢贞建，焦士蓉，李恺，等. RP-HPLC法测定不同产地枳实中的柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷[J].西华大学学报(自然科学版)，2009，28(2)：65-67.