炙甘草汤加减对急性心肌缺血大鼠心电图和血清酶学指标的影响

王 智 徐瑞鑫

(黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001)

随着我国社会经济的迅速发展和人口的老龄化，心脑血管系统疾病的发病率和死亡率日益增高。急性心肌缺血是最为常见的心血管疾病之一，是中老年人群的多发病。心肌缺血最为明显的特征是心电图(ECG)的改变〔1〕以及血清中各种心肌酶浓度的变化〔2〕。炙甘草汤是中医临床上治疗心动悸、脉结代的经典方剂，具有益气养血、通阳复脉的功效。本院临床上常使用炙甘草汤加减治疗心肌缺血性疾病，在原方的基础上去地黄、阿胶、麦门冬、麻仁及大枣，加入开窍药冰片，益气通脉作用更强，在实际临床上取得了令人满意的疗效。但是该方属于经验用方，缺乏药效学的实验依据。本研究采用结扎冠状动脉的方法复制急性心肌缺血大鼠的模型，并考察炙甘草汤加减对该模型大鼠ECG以及血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)以及丙二醛(MDA)浓度的影响，以期为该炙甘草汤加减方在临床上的更广泛应用奠定前期基础并提供药效学实验依据。

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物 清洁级Wistar雄性6月龄大鼠30只，体重(240±20)g，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心(GLP)提供，实验动物许可证号：黑动字第P00700619号。

1.1.2实验试剂 氨基甲酸乙酯(乌拉坦，上海三浦化工有限公司，批号：20120418)；CK试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：120530)；LDH试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：120423)；MDA试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：120507)。

1.1.3实验仪器 分析天平(梅特勒-托力多仪器上海有限公司，型号：MS204S)；低速离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司，型号：KDC-40)；多道生理记录仪(美国BIOPAC公司，型号：MP-100)；小动物呼吸机(江西特力麻醉呼吸设备有限公司，型号：TKR-200C)；电子秤(亚太电子天平有限公司，型号：DJ-500A)；半自动生化仪(日立公司，型号：KY2000)；电磁屏蔽室 (常州第二无线电厂，型号：P-22)。

1.2实验环境 为了避免电磁波对大鼠ECG的干扰，本实验操作在电磁屏蔽室内进行，屏蔽室内温度控制在20℃～22℃，相对湿度控制在45%～75%，采用24 h明暗自动控制系统(设定早7：00时和晚19：00时为自动明暗切换时间点)。

1.3实验方法

1.3.1炙甘草汤加减方的制备 取炙甘草240 g，生姜180 g，桂枝180 g，人参120 g，冰片20 g加8倍量的水，浸泡1 h后，沸水煎煮90 min，过滤，药渣再加6倍量水，沸后煎煮30 min，再过滤后，合并两次滤液，浓缩至740 ml，使每毫升浓缩液中含生药量的浓度为1.0 g/ml，备用。

1.3.2大鼠急性心肌缺血模型的复制 实验前记录实验大鼠Ⅱ导ECG，心电不正常的大鼠剔除。将筛选后雄性Wistar大鼠30只，按照体重区域化随机分为假手术组，模型组和给药组，给药组大鼠每天灌胃炙甘草汤加减方16 ml/kg，假手术组和模型组灌胃给予等体积的生理盐水，连续14 d，于末次给药后，给大鼠腹腔注射10%的乌拉坦麻醉(1 g/kg)，仰位固定，剪开颈部毛皮，剥离肌肉，暴露气管，行气管插管〔3〕，连接小动物呼吸机，呼吸频率设定为90次/min，呼吸比为1∶1。将大鼠左侧胸部去毛，在左侧第3～4肋间开胸，轻压右侧胸部，暴露心脏，剥离心包膜，在肺动脉圆锥与左心耳之间，左心耳下缘约2～3 mm处进针结扎左冠状动脉前降支，假手术组只穿线不结扎，以排除手术对大鼠造成的影响。缝合肌肉层及毛皮层，采用带注射器的胶管，边缝合边抽出胸腔内空气，以免造成气胸〔4〕。

1.3.3实验指标的监测 采用生理记录仪监测大鼠的Ⅱ导ECG，并记录大鼠冠状动脉结扎30、60 min、2、4、6 h后ECG中J点的位移△J。并在末次记录△J后，经颈静脉取血0.5 ml，在离心机上离心，3 500 r/min，离心10 min后取上层血清，用半自动生化仪测定其中CK、LDH及MDA的浓度。

1.4统计学方法 应用SPSS17.0软件进行分析，运用单因素方差分析进行检验(One-way ANOVA)。

2 结 果

2.1炙甘草汤加减对急性心肌缺血大鼠心电图J点位移的影响 与假手术组相比，模型组大鼠结扎冠状动脉30、60 min、2、4、6 h后心电图△J明显升高(P<0.05)；与模型组相比，给药组大鼠各时间点心电图△J明显降低(P<0.05)。见表1。

表1 炙甘草汤加减对急性心肌缺血大鼠心电图J点位移的影响

2.2炙甘草汤加减对急性心肌缺血大鼠血清中CK、LDH、MDA浓度的影响 与假手术组相比，冠脉结扎6 h后模型组大鼠血清中CK、LDH及MDA浓度明显升高(P<0.05)；与模型组相比，给药组大鼠血清中CK和LDH浓度显著降低(P<0.05)，在MDA这个指标上虽有下降的趋势，但是无统计学上的差异(P>0.05)。见表2。

表2 炙甘草汤加减对急性心肌缺血大鼠血清中CK、LDH、MDA浓度的影响

3 讨 论

急性心肌缺血是对人类健康危害最大的疾病之一，发病快且致死率高，因此，寻找有效对抗急性心肌缺血的药物尤为重要。中药复方炙甘草汤是中医临床上较为常用的治疗缺血性心脏病的基础方剂，本研究中在该方的基础上去地黄、阿胶、麦门冬、麻仁及大枣，加入开窍药冰片，增强其益气通脉的作用。结扎冠状动脉复制急性心肌缺血大鼠模型的方法是目前国内、国外研究者最为常用的复制该模型的方法，通过使冠状动脉变狭窄，导致其供应区域的血流减少或缺失，进而造成心肌缺血〔5～7〕。心肌细胞因缺血、缺氧导致代谢的紊乱，进而造成局部凝固性的坏死，其发病过程和机制与临床十分相似。

对心肌缺血进行ECG的ST段标测不仅可以定性、定量地观察大鼠心肌缺血的严重程度，也可以用来考察抗心肌缺血药物的疗效。由于大鼠和人ECG的差异性，常选用J点位移(△J)作为评价其心肌缺血的首选指标。本实验结果表明，炙甘草汤加减能明显对抗结扎冠状动脉对大鼠心肌造成的影响，且该作用从冠脉结扎后的30 min开始，至少能维持6 h。

CK主要储存在心肌细胞的线粒体内，LDH则广泛分布在心肌组织中，当心肌缺血后，心肌细胞受到损伤，导致细胞膜破裂坏死，CK和LDH就会被释放而进入血液，因此，CK和LDH在血液中浓度的变化对诊断缺血性心脏疾病有着十分重要的意义。心肌缺血后会产生大量的氧自由基，MDA就是氧自由基攻击生物膜后发生脂质过氧化反应的产物，因此血液中MDA的浓度能间接反映心肌细胞受到氧自由基攻击而造成损伤的程度〔8〕。本研究结果表明，炙甘草汤加减能显著对抗心肌缺血对大鼠心肌细胞造成的损伤，能明显降低血清中CK和LDH的浓度，但在MDA这个指标上，虽有降低的趋势，但是无统计学上的差异。

本研究初步阐明了该炙甘草汤加减方对大鼠心肌缺血的对抗作用，从动物实验角度明确了炙甘草汤加减的疗效，为该方在临床上更广泛的应用奠定了理论基础和实验依据。

4 参考文献

1白 雪，宋志宙，杨思进，等.心安颗粒对急性心肌缺血大鼠心电图影响的研究〔J〕.时珍国医国药，2010；21(10)：2707-9.

2王晓明，李付彪，吕文伟，等.白芍总苷对犬急性心肌缺血的保护作用〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2006；32(3)：393-6.

3周文武，林 玲，陈 军，等.冠脉结扎法制作大鼠心肌缺血模型〔J〕.中国实验动物学报，2004；4(12)：226-30.

4徐瑞鑫，谭银丰，李廷利.刺丹混合液对急性心肌缺血大鼠血流动力学的影响〔J〕.世界科学技术-中医药现代化，2009；11(6)：852-5.

5He HB,Xu J,Xu YQ，etal.Cardioprotective effects of saponins from Panax japonicus on acute myocardial ischemia against oxidative stress-triggered damage and cardiac cell death in rats〔J〕.Ethnopharmacol，2012；140(1)：73-82.

6Guven-Bagla A，Ercan E，Asgun HF，etal.Experimental acute myocardial infarction in rats：HIF-1α，caspase-3，erythropoietin and erythropoietin receptor expression and the cardioprotective effects of two different erythropoietin doses〔J〕.Acta Histochemica，2013；115(7)：658-68.

7Di Paola R，Mazzon E，Paterniti I，etal.Olprinone，a PDE3 inhibitor，modulates the inflammation associated with myocardial ischemia-reperfusion injury in rats〔J〕.Eur J Pharmacol，2011；650(2-3)：612-20.

8谭银丰.刺丹混合液抗心肌缺血作用的实验研究〔D〕.黑龙江中医药大学硕士论文，2008.