柴胡注射液中挥发性化学成分GC-MS分析

袁其堂，仲 英，麦 曦*，程奇珍，易路遥，冯丽华

(1.南昌大学药学院，江西南昌 330006;2.江西省药品审评中心，江西南昌 330046;3.江西省食品药品检验所，江西南昌 330000)

伞形科柴胡属植物柴胡Bupleurum chinense DC.，其根作为中医药方中的常用中药在中国已沿用了近千年。始载于《神农本草经》。具有疏散退热、疏肝、升阳的功能，中医主要用其治疗胸肋胀痛、子宫脱垂、脱肛、流感及感冒所引起的发热等病症［1］。《中国药典》2010年版收载的正品柴胡药材来源为柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡Bupleurum scorzonerifolium chinense Willd.的干燥根，按性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”［2］。现代药理学研究［3-5］表明柴胡挥发油具有解热、镇静、镇痛、抗炎、抗肝损伤、抗肿瘤［6］、降低血压、减缓心律和免疫增强［7］等作用，在临床广泛应用于外感发热。

柴胡注射液是柴胡干燥根经水蒸气蒸馏制成的含有挥发油的灭菌水溶液，有较好的退热、解表效果，用于治疗感冒、流行性感冒及疟疾等的发热，疗效确切。但随着柴胡注射液的广泛使用它的不良反应也逐渐被人们所重视。目前国内已报道过的不良反应有过敏性皮肤反应、过敏性休克、晕厥、眩晕、肾衰竭、疱性表皮松解型药疹、急性肺水肿、过敏性哮喘［8］。刘群［9］曾尝试采用GC-MS联用技术对临床所用的柴胡注射液进行挥发油成分的分析，结果只检出呋喃甲醛和5-甲基呋喃甲醛两个成分，张丽等［10］通过GC-MS将药典法、硫酸氯化钠提取法、石油醚萃取法提取的柴胡原药材挥发油成分与柴胡注射液的有效成分检测对比研究，在柴胡注射液检测中也得到了与刘群一致的结果。近年来对柴胡注射液等中药注射剂引发的不良反应的报道，不仅对中药注射液行业造成了巨大的冲击，同时也波及到了整个中医药领域，使人们对中药注射剂的使用产生了疑虑［9］。

本实验通过对来自3家医药企业的3个不同批次的柴胡注射液采用顶空气相色谱-质谱-数据库 (GC-MS-DS)联用技术分析其挥发性化学成分，结合质谱数据库NIST11及对照品比较法对分离的化合物进行鉴定，选择匹配度较高的的检索物质，并通过总离子流色谱图的面积归一化法计算出各挥发性化学成分在每批柴胡注射液中的相对含有量，为建立柴胡注射液中挥发性成分特征指纹图谱，控制注射液质量及减少不良反应的发生提供重要的科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent7697A型Headspace sampler，Agilent 7890A5975C-GCMSD，HP-5MS(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm)弹性石英毛细管柱，1701E02系列工作站。

1.2 材料 样品1(开开援生制药股份有限公司，批号1211061);样品2(河南润弘制药股份有限公司，批号1209221);样品3(河南省康华药业股份有限公司，批号12091901)。3批柴胡注射液均为市售药品。对照品正戊醛(分析纯，纯度98%)、正己醛 (色谱纯，纯度≥99.0%)、正庚醛 (色谱纯，纯度≥98.0%)、正辛醛 (分析纯，纯度99%)、壬醛 (分析纯，纯度96%)均购于上海阿拉丁试剂公司。0.9%氯化钠注射液 (回音必基团 (江西)东亚制药有限公司)，吐温－80(分析纯，上海大众药业有限公司)。

2 方法

2.1 对照品的制备 分别取正戊醛、正己醛、正庚醛、正辛醛、壬醛对照品适量，精密称定，制成每1 mL含25 mg的溶液，再用含0.3%吐温－80与0.9%氯化钠的溶液稀释至每1 mL含25 μg的溶液。将上述制备的5种溶液分别精密量取2 mL，置20 mL顶空瓶中，轧盖密封瓶口，制备成混合对照品溶液。

2.2 样品的制备 分别从3批样品中精密量取10 mL柴胡注射液依次置入3个20 mL顶空进样瓶中，按序标记，轧盖密封瓶口，即得。

2.3 GC-MS分析 柱温:起始温度40℃，保持5 min，以5℃/min速率升至50℃，保持0 min，以20℃/min速率升至250℃，保持6 min。载气氦气，进样口温度250℃。进样方式:分流进样，分流比5∶1。柱体积流量1 mL/min。顶空进样，顶空瓶平衡温度90℃，平衡时间20 min，进样阀温度100℃，传输线温度110℃，顶空瓶充压时间0.2 min，定量环填充时间 0.2 min，定量环平衡时间0.5 min，进样时间1 min。溶剂延迟3 min。扫描范围30～500 amu。

3 结果

采用顶空气相色谱－质谱联用仪结合质谱数据库NIST11分析出对照品溶液在tR=3.341，tR=6.101，tR=8.964，tR=10.510，tR=11.618处出现5个对照峰;3个厂家及批次的柴胡注射液分析出匹配度较高 (大于85%)的挥发性化学成分共计28种 (其色谱-质谱总离子流图见图1)，28种挥发性化学成分的鉴定及在每个批次中的相对量结果见表1。在这3个不同厂家的柴胡注射液中挥发性化学成分含量较高的有戊醛、己醛、呋喃甲醛、庚醛、正己醇、正辛醛、反-2-辛烯醛、壬醛、反-2-壬烯醛、桉叶油醇、十一烷、芳樟醇、4-萜烯醇、左旋乙酸冰片酯等。其中戊醛、己醛、庚醛、正辛醛、壬醛、反式-2-辛烯醛、反式-2-壬烯醛、2-异丙基-5-甲基茴香醚是共有成分。

图1 对照品及样品的GC-MS总离子流色谱图

表1 3个不同厂家的柴胡注射液样品挥发性化学成分结果鉴定

续表1

4 讨论

结果表明，3家企业的3批柴胡注射液其挥发性成分中共检出28种化合物。其中戊醛、己醛、庚醛、正辛醛、壬醛、反式-2-辛烯醛、反式-2-壬烯醛、2-异丙基-5-甲基茴香醚，这8种化合物是3批柴胡注射液样品中挥发性物质的共有化学成分。已有文献报道，正己醛、正庚醛、α-蒎烯、桉叶油醇等成分为柴胡挥发油解热、抗炎、抗菌的药效物质基础［11-15］。亦有文献报道，呋喃甲醛是柴胡在酸盐条件下柴胡纤维的水解产物，5-甲基呋喃醛初步认定是柴胡皂苷中糖部分的水解产物，含有这些已降解的成分的挥发油制成的注射液是有害物质［16］，这些都是引起柴胡注射液不良反应的首要化学成分。另外，引起不良反应的首要化学成分呋喃甲醛的产生也可能与市售药品目前的有效期长短有很大关系，亦可能与不同厂家所用不同地区的柴胡原料及提取工艺有关，其来源还有待进一步研究。

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