不同种类的促渗剂对芍药苷透皮吸收的影响

江苏省泰州市中医院（225300) 吴红旗

赤芍具疏肝理气、柔肝养血、缓中止痛、抗炎抗溃疡之功效[1]，在多种中药复方巴布剂中作为君药或臣药使用[2][3][4]，芍药苷为此类巴布剂中散瘀镇痛、抗炎的主要活性成分[5]，但其为亲水性药物，且分子量较大（480.45），如不加入促渗剂，透皮效果并不理想。因此研究不同促渗剂对赤芍中主成分芍药苷透皮的影响，可为赤芍复方透皮制剂的研究提供基础。选择了氮酮、卡波姆、薄荷醇、丙二醇、β-环糊精及泊洛沙姆，这6种促渗剂来研究他们对芍药苷透皮吸收的影响。选用增渗比(enhancement ratio, ER)、透皮速率常数(Js)及滞后时间(Tlag)作为考察指标，利用高效液相色谱法测定芍药苷含量，对促渗剂品种及用量进行筛选。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪：包括DAD检测器，四元泵；BP-211D分析电子天平(德国Sartorius公司)；TP-3透皮扩散仪(南京新联电子设备有限公司)。

1.2 动物与试剂、药品 实验动物：雄性昆明种小鼠，体重(22±2) g(上海斯莱克实验动物有限责任公司)。试剂、药品：芍药苷标准品（纯度98%，南京泽朗医药科技有限公司）；乙腈(TEDIA)；氮酮、卡波姆、薄荷醇、丙二醇、β-环糊精、泊洛沙姆（均购于国药集团化学试剂有限公司）。

2 实验方法与结果

2.1 透皮扩散实验方法

2.1.1 离体鼠皮的制备 将雄性小鼠断颈处死，剃干净腹部毛，剪取腹部皮肤，随后平铺于干净的玻璃板上，仔细剥离皮下脂肪层和结缔组织，用生理盐水反复冲洗干净，置于生理盐水内，于低温冰箱保存备用。

附图 芍药苷色谱图 注：A.标准品；B.透皮样品；1.芍药苷

2.1.2 供给液的配置 配置浓度分别为0.1%、0.2%及0.3%的卡波姆溶液，及4%的氮酮、薄荷醇、环糊精、泊洛沙姆及丙二醇溶液，分别往上述溶液中加入芍药苷，最终配置成浓度为1mg/mL的芍药苷溶液。

2.1.3 透皮实验 采用渗透扩散装置为垂直式Franz扩散池。从冰箱中取出备用皮肤，自然解冻，将皮肤固定于Franz扩散池上(扩散池面积为2.0034cm2，体积为20.0mL)，用弹簧夹固定，在供给池中加入2mL的供给液，接受池中加满生理盐水作为接收液，以37℃水浴保温，磁力搅拌子以100 r·min-1的速度搅拌。分别于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h取出接收室中1 mL接收液，随即补加等量的新鲜接收介质。

2.2 分析方法

2.2.1 高效液相色谱条件 色谱柱：Agilent SB-C18(5μm,4.6 mm×150 mm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸(14∶86)，检测波长:230 nm，流速:1.0 mL/min，进样量：20μL。见附图。

2.2.2 标准品溶液的配制和标准曲线的建立 精密称取芍药苷对照品1.00mg，置10mL量瓶中，加甲醇使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，得标准储备液。精密量取标准储备液置2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别配置得芍药苷浓度分别为0.5、10、20、30、50、100μg/mL的系列标准液。以芍药苷的质量浓度(x，μg/mL)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程A= 33.572x-3.374，R = 0.9995。线性范围为：0.5μg/mL～100μg/mL。

附表1 不同种类促渗剂对芍药苷促渗作用的渗透动力学方程及渗透参数 (n=3, mean±s)

附表2 不同浓度卡波姆对芍药苷促渗作用的渗透动力学方程及渗透参数(n=3, mean±s)

2.2.3 精密度试验和稳定性试验 取浓度为0.1mg/mL的标准品溶液，自动进样20μL，重复6次，芍药苷峰面积RSD值为1.49%。同样取浓度为0.1mg/mL的标准品溶液，自动进样20μL，每隔2h进样1次，8h内4次测定结果的峰面积基本保持不变，芍药苷峰面积RSD值为1.34%。

2.2.4 接受液的预处理 将分别在l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12h时抽取的1.0mL接受液，置于1.5mL的离心管中，在恒温水浴锅上60℃挥干，加入1.0mL甲醇，超声波振荡溶解残渣，14000 r/min离心15min，吸取上澄清液0.5mL移至高效液相样品瓶中[6]。

2.3 结果

2.3.1 芍药苷的累计渗透量(Q) 实验中扩散池容积为20.0mL，有效扩散面积为2.0034cm2，取样量为1 mL，按照下列公式计算累积透过量Q(μg/cm2)。其中，Cn为t时间浓度的测量值，Ci为t时间以前浓度的测量值，Vo为接收液的总体积，Vi为每次取样的体积，A为有效扩散面积。实验结果见附表1。

2.3.2 芍药苷的透皮速率常数（Js） 以芍药苷的累计渗透量(Q)对渗透时间t进行线性回归，所得方程即为渗透动力学方程[7]，其斜率为芍药苷的透皮速率常数Js（ μg·h-1·cm-2），结果见附表1、附表2 。直线与X轴的交点为滞后时间（Tlag）。增渗比（ER）为加入渗透促进剂后与未加入渗透促进剂时药物在12h内的透皮速率常数之比。所有数据都用t检验进行统计学处理。

3 讨论

本实验考察了薄荷醇、丙二醇、卡波姆、泊洛沙姆、β-环糊精、及氮酮对芍药苷的促渗作用。实验的结果表明，卡波姆及氮酮对芍药苷均具有显著的促渗作用，与空白组相比，ER分别为5.598及5.300。泊洛沙姆、β-环糊精、薄荷醇、丙二醇的ER较小，均在1.5左右。

氮酮对芍药苷的促渗效果较好，但与卡波姆相比氮酮存在皮肤刺激性[8]。卡波姆遇水后可形成溶胀的三维网状结构，皮肤粘附效果好，形成的亲水凝胶可以吸收组织渗透液，有利于分泌物的排除，增加皮肤角质层的含水量，使基底角质层的细胞膨胀，药物在该层形成储库，从而维持一定的药物释放和作用时间，促进水溶性物质经水性通道渗透吸收，这也可能是卡波姆对芍药苷促渗效果好的原因。

进一步选择卡波姆作为芍药苷的透皮吸收促渗剂，并考察了不同浓度卡波姆溶液对芍药苷的促渗作用，实验结果见附表2。结果表明，0.2%卡波姆凝胶促渗效果最好，促渗效果并没有随着卡波姆浓度的提高而增加，可能是因为随着浓度的增加，卡波姆的粘度增大，阻滞作用增强，对药物的促渗作用降低。因此，最终选择0.2%卡波姆凝胶作为芍药苷的透皮吸收促渗剂，这为芍药苷透皮吸收制剂处方的优化提供了实验依据。