GC法测定筋骨舒喷雾剂中樟脑和薄荷脑的含量

北京市药品认证管理中心（100053） 石慧

北京军区联勤部药品仪器检验所（100071）申睿 雷虹 杨莹 郭琪△

附图 HLPC色谱图 A.樟脑薄和荷脑混合对照品；B.筋骨舒喷雾剂供试品；C.缺樟脑和薄荷脑阴性对照溶液；a.樟脑 b.薄荷脑

筋骨舒喷雾剂是陕西仁康药业有限公司西宁分公司研制的产品，处方中含有薄荷脑、樟脑、白芷、鸡矢藤、鸡血藤、金钱草、桂枝、伸筋草等10味药，为治疗风寒湿邪侵袭人体的肌肉、经络、筋骨关节所致的经络阻滞、四肢拘挛、关节屈伸不利以及气血流行不畅引起的筋骨疼痛等症的中药制剂。主要用于风湿痛、类风湿性关节炎、肩周炎以及跌打损伤所致的淤血肿痛等症。本品不曾建立质量标准。为了有效的进行质量控制，我们对筋骨舒喷雾剂中的薄荷脑和樟脑含量测定进行了研究，建立了气相色谱仪同时测定薄荷脑和樟脑的方法[1][2]为提高筋骨舒喷雾剂的质量提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent6890气相色谱仪（美国安捷伦公司）；电子分析天平(METLILER TOLEDOO-AX205DR)；GN-RO-30型纯水机（北京市双峰纯水设备厂）；KQ-300VDB型双频数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ZF型紫外反射透射分析仪（上海康华生化仪器制造厂）；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司)。

1.2 试药 樟脑对照品（供含量测定用，由中国食品药品检定研究院提供，批号为110747-200507）、薄荷脑对照品（供含量测定用，由中国食品药品检定研究院提供，批号为110728-200508）；筋骨舒喷雾剂由陕西仁康药业有限公司生产制备；所用乙醇等化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性 DB-624毛细管色谱柱(30m×0.53mm,3μm)，氢离子火焰检测器。程序升温，初始温度130℃，保持10分钟，以5℃/min升至180℃，保持20分钟。进样口温度200℃，FID检测器温度250℃，分流比为18:1，进样量1μl，采用外标法计算；分别取样品溶液与阴性对照溶液，进样1μl，对比样品溶液与阴性对照溶液的色谱图，见附图。

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品储备液的制备 精密称取薄荷脑、樟脑对照品各25mg置于25ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2.2 供试品储备液的制备 精密量取本品10ml置于100ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方组成，取除薄荷脑、樟脑外的其余药味，按照筋骨舒喷雾剂制备工艺流程制成不含薄荷脑、樟脑的筋骨舒喷雾剂药品。

2.3 精密度实验 精密量取混合对照品储备液3ml置10ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀得混合对照品溶液。按2.2.1项所述色谱条件，重复进样6次，测定薄荷脑、樟脑对照品的峰面积，得樟脑、薄荷脑对照品峰面积的RSD值分别为1.2%、1.5%，表明仪器精密度良好。

附表1 加样回收率实验结果

附表2 样品含量测定结果

2.4 线性关系考察 分别精密吸取薄荷脑、樟脑混合对照品储备液0.5、1、2、3、4、5ml置于10ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀即得。分别精密吸取上述对照品溶液1μl注入气相色谱仪。记录对照品峰面积，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，进行线性回归，得樟脑对照品线性回归方程y=983.80x+2.6836，r=0.9995（n=6），薄荷脑对照品线性回归方程为y=979.66x+2.0510,r=0.9995（n=6）,显示樟脑浓度在0.0515～0.5154mg/ml，薄荷脑浓度在0.0565～0.5654mg/ml范围内，具有良好的线性关系。

2.5 稳定性实验 取溶液2.2.2项下制备的混合对照品溶液，在2.2.1项下色谱条件，分别在0、1、2、4、6、8、10、12h进样，测定峰面积，结果得樟脑、薄荷脑对照品面积的RSD均为0.7%，表明对照品溶液在12h内稳定。

2.6 重复性实验 精密量取2.2.2项下供试品储备液10ml，分别置于50ml容量瓶，加乙醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液，平行做6份供试品溶液，按2.2.1项所述色谱条件，测定峰面积，得樟脑平均含量为0.3213mg/ml，RSD=0.6%(n=6)；薄荷脑平均含量为0.2853mg/ml，RSD=0.7%(n=6)，显示重复性良好。

2.7 加样回收率实验 精密量取已知含量的供试品储备液6份，精密加入1ml对照品溶液于10ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，按2.1.1项所述色谱条件，测定樟脑、薄荷脑的峰面积并计算回收率，得樟脑平均回收率为102.6%，RSD=1.4%（n=6)；薄荷脑平均回收率为101.6%，RSD=1.5%(n=6），结果见附表1。

2.8 样品含量测定 精密量取4批样品各10ml,置100ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，得供试品储备液，再取10ml供试品储备液置50ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。吸取上述溶液各1μl注入气相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算，结果见附表2。

3 讨论

本实验曾选用环己酮[3]作为内标物，按内标法计算样品含量，结果与外标法计算得到的样品含量无差别，而外标法操作简便，快速，通过减少内标物质的使用，减小误差，且结果准确。所以本实验采用外标法进行计算。

柱温是色谱峰分离的一个重要参数，直接影响分离效果和分析速度。测定樟脑和薄荷脑的含量常采用程序升温的方法。据原有色谱条件：程序升温，初始温度130℃，保持10分钟，以5℃/min升至150℃，保持12分钟。进样口温度170℃，FID检测器温度200℃，由此所得樟脑与薄荷脑色谱峰分离度＜1.5，不符合要求。之后修改色谱条件为：程序升温，初始温度130℃，保持10分钟，以5℃/min升至180℃，保持20分钟[4]。进样口温度200℃，FID检测器温度250℃，由此所得色谱图可以达到各色谱峰基线分离，且分离度 ＞1.5，峰形对称，重复性好。

薄荷脑和樟脑均易溶解于乙醇、三氯甲烷、乙醚,而本品为含55%乙醇的液体制剂[5][6]，所以采用乙醇做稀释溶剂。