CD36基因多态性与冠心病患者临床特征之间的关系

汪自龙，洪 斌，张 政，罗 勇，孙晓臣，罗 溶，王齐兵

(1复旦大学附属中山医院青浦分院，上海201700;2复旦大学附属中山医院)

冠心病(CAD)是多种因素共同作用的结果，其中脂质代谢紊乱是其发生的最重要危险因素。CD36是体内ox-LDL的受体，也是位于多种免疫细胞表面的B型清除受体，它介导的单核—巨噬细胞系统参与脂质代谢进而影响CAD的发生、发展进程。有研究指出，血清TC和LDL-C水平增加可能与CD36基因突变有关。2009年9月～2012年9月，我们对CD36基因多态性与CAD发生的相关性进行了观察。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入标准:符合CAD诊断标准，临床状况稳定，无急性冠状动脉症状，1 a内未行血管再通手术或心脏介入治疗。排除标准:先天性心脏疾病、有症状心力衰竭、心肌病、肾衰竭、甲状腺功能不全、恶性肿瘤、严重感染及自身免疫性疾病患者。收集在复旦大学附属中山医院、中山医院青浦分院、上海松江区中心医院符合标准的CAD患者120例，男84例，年龄(61.4±13.2)岁;女 36例，年龄(63.8±11.6)岁。本研究获得医院伦理审查委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 资料收集及检测方法 收集研究对象的基本临床资料，包括身高、体质量，计算BMI;记录高血压、糖尿病、脑卒中等病史。空腹状态下取肘部抽静脉血6 mL，其中3 mL促凝离心后取上清液，-80℃保存。分离血细胞目标基因组DNA，具体步骤参考AxyPrep血液全基因组DNA小量提取试剂盒说明书［4］;PCR扩增后采用变性高效液相色谱(DHPLC)技术，研究包含内含子片段的外显子4和5的扩增产物［5］，检测PCR产物的变化;使用Applied Biosystems公司的染料终止子循环测序反应，对其进行双向测序;使用373A DNA片段分析仪进行半自动序列分析(Applied Biosystems，Foster City，美国)。另外3 mL静脉血进行血常规、血糖、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、血脂、脂蛋白 a［Lp(a)］、载脂蛋白 A1(Apo A1)、载脂蛋白B(Apo B)等检测。

1.2.2 统计学方法 评估Hardy-Weinberg平衡下基因型分布的一致性，然后根据CD36基因型的不同将病例分组研究;采用SPSS16.0统计软件，使用Mann-Whitney U检验对两组数据计量资料进行比较分析，使用Fisher精确检验对计数资料进行比较，分析基因型和定性变量间是否相关。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD36基因多态性分析结果 DHPLC检测到CD36基因变异主要包括内含子中2个单核苷酸替换(多态性)，分别为IVS3-6 T/C(rs3173798)和IVS4-10 G/A(rs3211892)，见图1、2。IVS3-6 T/C 基因型频率 TT 81.1%、TC 18.9%，次要等位基因频率9.4%;IVS4-10 G/A 基因型频率 GG 92.2%、GA 7.8%，次要等位基因频率3.9%。外显子中并未发现序列改变。两种序列变异在Hardy-Weinberg平衡下基因型分布一致(P=1)。证实选取的样本基因型可以稳定遗传，可以代表整个群体。

图1 CD36基因IVS3-6 T/C PCR产物AIwNI酶切图谱

图2 CD36基因IVS4-10 G/A PCR产物Hincll酶切图谱

2.2 CD36基因型多态性与CAD患者临床数据的相关性 TT型和GG型基因分别占75.8%、74.2%，CD36基因型多态性与CAD患者性别、体质量、BMI、腰臀比、血糖、红细胞、血小板、高血压病史、治疗方法等不相关，其他临床资料与CD36基因多态性的关系见表1。

表1 CD36基因型多态性与CAD患者临床资料的关系

3 讨论

基因层面的研究不仅可以帮助我们了解CAD的发病机制，为其治疗提供可行的依据［6］;而且，也可为CAD诊断提供方便可行的分子标记，对易发生CAD人群进行早期识别和一级预防。目前，研究人员已经发现大量与CAD相关的单核苷酸多态性(SNP)位点［7］。本研究发现，CD36待测外显子相邻的内含子片段中有IVS3-6T/C和IVS4-10 G/A两种多态性。在中国人群中，IVS3-6C等位基因频率(24.2%)与NCBI dbSNP数据库先前报道相似 (16.2%～31.2%);但IVS4-10A等位基因频率(25.8%)比dbSNP数据库记录稍高(11.6%～22.6%)。迄今为止，已明确的与CAD发生相关的危险因素有高血压、吸烟、高LDL-C血症、年龄、性别、冠心病家族史、低HDL-C血症等［8］。本研究结果发现，与 IVS3-6 TT型相比，IVS3-6 TC杂合子CAD患者的血压较低，存在统计学差异，BMI稍高，肥胖病例更多，但无统计学差异。IVS3-6 TC和IVS4-10 GA基因型与心肌梗死发病年龄之间存在相关趋势，但趋势相反:TC杂合子首次心肌梗死年龄更小，GA杂合子年龄更大。目前，很少有研究对亚州人中CD36多态性与体格参数或hs-CRP 水平之间关系进行详细的分析［9］。Leprêtre等［10］指出，在欧美等人种中IVS4-10 G/A变异与脂联素水平之间有相关性。Love-Gregory等［11］在对有高血压病史的非裔美国人的研究中发现，CD36序列变异与体型各参数(BMI≥30 kg/m2，腰围 ＞100 cm)相关。此外，已经证实白种人rs1527479 CD36启动子多态性与胰岛素抗性和2型糖尿病有关。但本研究发现CD36变异体与2型糖尿病的发病无关，而IVS3-6 TC杂合子比野生型纯合子患者更常出现2型糖尿病，各组间空腹血糖并无差异;分析原因，可能是多数TC杂合子的糖尿病患者口服降糖药或皮下使用胰岛素。IVS4-10 GA杂合子患者中2型糖尿病的发病率与野生型没有差别，与Rac'等［12］结果相似。最新的研究还提出，非裔美国人的一些存在于启动子(rs10499859、rs109654)和内含子(rs1358337)的CD36多态性可能会导致血浆HDL浓度增加［13］。还有人认为，在 St.Thomas UK成人双生子登记队列中，CD36启动子多态性rs2151916与LDL水平有关，次要等位基因纯合子患者LDL-C水平更低［14］。但这些试验并未分析 IVS3-6 T/C和IVS4-10 G/A 的多态性。Teupser等［14］报道，白种人中两种多态性(rs1984112、rs1761667)与转录起始位点(外显子1A和1B)的选择有关，内含子11中的一种多态性(rs1527483)和3'-UTR区(外显子14和15)的两种多态性(rs3840546、rs1049673)与血浆游离脂肪酸代谢有关。研究人员将2型糖尿病病例分为CAD阳性和CAD阴性对照，结果提示所有CD36变异均能导致CAD风险增加。本研究中两种基因型间血清脂质浓度没有显著差异;这主要是因为本试验中多数CAD病例进行定期的心源性监测并服用替他汀类药物(影响血脂)。另一方面，我们发现IVS3-6 TC基因型与Lp(a)降低有关，这可能也是动脉粥样硬化疾病(如CAD和中风)的危险因素之一，但这种相关性可能对C等位基因变异体患者有益。非洲人的外显子10纯和无义突变(rs3211938)与Hb提高有关。本研究并未发现不同组间Hb水平存在差异，但观察到IVS3-6 TC杂合子患者嗜碱性粒细胞比例更少，而IVS4-10 GA杂合子患者的白细胞数量更多，目前尚没有这种相关性报道，其临床意义还有待进一步研究。

总之，CD36基因多态性与CAD患者临床特征存在一定的相关，不同CD36基因型CAD患者的起病机制、临床特征可能不尽相同。因此，针对不同基因型的CAD患者可以根据其起病的主要危险因素不同，进行有目的治疗。

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