酸枣仁加锌合剂对睡眠剥夺小鼠学习记忆能力的影响

崔 锴 张红石 张茂云 崔 淼 (吉林省公安边防总队白山支队卫生队，吉林 白山 34300)

中药酸枣仁有促进睡眠、养心安神的效果〔1〕。微量元素锌对睡眠剥夺造成的学习记忆能力下降有保护作用〔2〕。笔者自制酸枣仁加锌合剂，从中药饮食调护的角度，观察其对健康小鼠睡眠剥夺后学习记忆能力的影响，为改善因工作原因长期处于睡眠剥夺的亚健康状态人群职业能力和延长其职业寿命提供依据。

1 材料与方法

1.1 动物分组及给药 健康昆明种小鼠80只(长春生物制品研究所有限责任公司，CSXK-(吉)2011-0007)，经筛选后(通过各项学习测试获得学习能力者)，选出50只，雌性各半，体重18～22 g，随机分成空白组(清水灌胃正常喂养)、模型组(造睡眠剥夺模型清水灌胃)、阳性组造睡眠剥夺模型、葡萄糖酸灌胃、低剂量组组(造睡眠剥夺模型、酸枣仁加锌合剂灌胃，按人鼠比例换算0.1 ml/10 g给药)、高剂量组(造睡眠剥夺模型、酸枣仁加锌合剂灌胃，按人鼠比例换算0.2 ml/10 g给药)，每组10只。灌胃时间为分组结束后、睡眠剥夺前，共给药5 d，5 d后开始进入24 h睡眠剥夺。

1.2 主要仪器和药品 仪器:BA-200避暗仪，香港万科;DT-200小鼠跳台仪，杭州雷琪;Morris水迷宫(MWM)视频分析系统，成都泰盟。药品:二氧化钛(天津福辰，批号:20060220)、葡萄糖酸锌(哈药集团，批号:12030212)、酸枣仁(北京同仁堂，按人鼠比例生药量1∶8进行煎煮，文火煎煮至药液浓缩100 ml后待用)。酸枣仁加锌合剂(每100 ml酸枣仁汤剂加100 ml含锌35.3 mg的葡萄糖酸锌)。

1.3 动物造模 采用改良多平台睡眠剥夺法(MMPM)，在标准大鼠笼内倒入清水，水位平铺布满笼底，在笼底黏附10根直径2 cm的方形木框。每笼10只小鼠，当小鼠进入睡眠状态后会从木桩上掉落，因触水而达到觉醒，进而完成睡眠剥夺造模。水温控制在22℃ ～23℃，每天持续日光灯照射，持续24 h。

1.4 壁暗实验〔3〕利用鼠类的嗜暗习性而设计。记录反射建立过程中的主动回避反映指标来反映实验动物的学习、记忆能力的变化。5 min内观察指标潜伏期。

1.5 跳台实验〔4〕在一个底面可以通电的反射箱内放置一个绝缘的跳台，当动物在训练中受到电击时，可以跳上跳台逃避电击，通过测试动物在平台上的潜伏期测试记忆，从而反映实验动物学习、记忆能力的变化。5 min内观察潜伏期。

1.6 水迷宫实验〔5，6〕MWM主要用于测试实验动物对空间位置感和方向感(空间定位)的学习记忆能力。观察指标包括潜伏期、总距离、平均速度、朝向角。

1.7 统计学方法 采用SPSS13.0软件，各组数据以s表示，数据需经正态分布检验，方差齐性检验用Levene法，多组间差异的显著性分析用单因素方差分析，方差齐时用LSD法。

2 结果

空白组与模型组相比，除平均速度外，其余参考值均有显著差异(P＜0.05);药物高剂量与低剂量组比较，潜伏期、朝向角等指标有显著性差异(P＜0.05)，总距离、平均速度差异不明显(P ＞0.05)。见表1。

表1 不同剂量酸枣仁加锌合剂对24 h睡眠剥度小鼠水迷宫及避暗、跳台潜伏期的影响( s，n=10)

表1 不同剂量酸枣仁加锌合剂对24 h睡眠剥度小鼠水迷宫及避暗、跳台潜伏期的影响( s，n=10)

与模型组比较:1)P＜0.05;与低剂量比较:2)P＜0.05

组别 潜伏期(s)总距离(cm)平均速度(cm/s)朝向角(°)避暗实验(s)跳台实验(s)空白组 84.70 ±20.471) 1 368.77 ±318.301) 15.81 ±2.48 39.45 ±16.251) 281.0 ±46.51) 233.0 ±44.91)模型组 1 12.32 ±6.48 2 113.16 ±200.16 17.78 ±3.21 82.50 ±26.28 202.3 ±78.4 121.6 ±18.5阳性组 77.24 ±15.921) 1 665.73 ±518.601) 22.86 ±9.39 81.14 ±20.71 257.2 ±50.711) 158.3 ±50.7低剂量组 81.85 ±22.841) 1 502.53 ±318.211) 16.98 ±4.25 23.70 ±10.351) 268.0 ±15.491) 182.0 ±66.21)高剂量组 64.27 ±12.601)2) 1 450.48 ±403.101) 14.37 ±9.88 39.60 ±12.711)2) 282.0 ±12.01)2) 238.7 ±14.21)2)

3 讨论

睡眠剥夺是指由于各种原因导致机体在一段时间内不能获得效睡眠而出现的精神、心理、行为等多方面改变的病理状态。医护理人员在倒班过程中常出现睡眠剥夺状态，轮班导致护士睡眠剥夺后，人体免疫系统功能下降，且睡眠质量越差，对其免疫系统功能影响越大。目前国内外常用干预睡眠剥夺的研究方法包括生活护理〔7〕、饮食、药物护理、对症护理〔8～11〕等，但均存在不同程度的不良反应。常用的观察指标包括行为学观察、脑电观察、内分泌、免疫观察、脑细胞观察、细胞相关因子及蛋白观察等〔12，13〕。

本实验证明睡眠剥夺对小鼠记忆学习能力产生了负面影响;酸枣仁加锌合剂可有效地改善睡眠剥夺状态，提高或维持小鼠的学习记忆能力;剂量对干预效量产生影响，但高、低剂量药效影响差异不稳定，这可能与样本量不足有关。因此，本实验在设计上考虑以后应加大样本量。总之，本实验表明，睡眠剥夺对小鼠学习记忆能力起到了负面作用，酸枣仁加锌合剂可有效改善此状态，且其剂量的增加与干预效果呈正相关。

1 李成芹.热浸酸枣仁治疗冠心病失眠患者60例护理体会〔J〕.泰山医学院学报，2010;31(6):473-4.

2 陈 俊，李积胜，王华仁.锌对睡眠剥夺大鼠学习记忆及大脑皮层一氧化氮合酶的影响〔J〕.解放军预防医学杂志，2005;32(2):89-91.

3 张咏梅，江智霞，王连红.护理轮班导致睡眠剥夺对人体免疫功能的影响〔J〕.护理研究，2011;25(3):259-60.

4 袁力勇，戴体俊，苏 珍.跳台实验训练后小鼠自然遗忘时间的观察〔J〕.徐州医学院学报，2007;27(2):84-5.

5 王绪平，品登俊，陈 宇.Morris水迷宫实验评价血管性痴呆大鼠模型的学习记忆能力〔J〕.中华中医药学刊，2013;31(1):99-100.

6 赵施施，张科学，包素红.丙泊酚对幼小鼠自主活动和学习记忆行为的影响〔J〕.中国药理学通报，2013;29(2):198-201

7 Horne JA，Donlon J，Arendt J.Green light attenuates melatonin output and sleepiness during sleep deprivation〔J〕.Sleep，1991;14(3):233-40.

8 胡 庆，杨丽军，张山起.微量元素锌对睡眠剥夺大鼠学习记忆保护机制的研究〔J〕.山西医药杂志，2008;37(5):405-6.

9 陈利华，胡幼平，罗 荣，等.电针百会、三阴交对睡眠剥夺大鼠体重的影响〔J〕.江西中医学院学报，2008;1220(6):44-5.

10 陈利华，胡幼平，罗 荣，等.电针百会、三阴交对大鼠睡眠剥夺(SD)行为学的实验研究〔J〕.浙江中医药大学学报，2010;434(4):567-70.

11 陈利华，胡幼平，罗 荣，等.电针百会、三阴交对大鼠睡眠剥夺细胞因子的影响〔J〕.上海针灸杂志，2009;28(11):678-81.

12 裴保萍，任安萍.剥夺睡眠与药物诱导睡眠脑电图对儿科发作性疾病的诊断价值〔J〕.当代医学，2009;115(3):26-7.

13 曾 荣，邵淑丽，徐兴军，等.长期异相睡眠剥夺对大鼠能量代谢及血清甲状腺素水平的影响〔J〕.中国应用生理学杂志，2010;26(1):105-8.