HPLC 法测定烈香杜鹃不同药用部位中的4 种黄酮类成分

罗兴平， 杨玲霞， 魏亚军

(1. 西北民族大学化工学院，甘肃 兰州730030;2. 甘肃省食品药品检验研究院，甘肃 兰州730070)

烈香杜鹃藏药名达里，收载于《卫生部药品标准藏药(第一册)》，为杜鹃花科植物烈香杜鹃Rhododendron anthopogonoides Maxim 的干燥花和叶，也是藏族人民的常用药材，其味甘、涩，性平，具有清热消肿和补肾功效，藏医常用于治疗培根病、肺病、脾胃虚寒、消化不良、水土不服等［1］，主要分布于甘肃、青海、西藏等西部地区［2-5］。现代化学及药理研究表明，烈香杜鹃中存在多种黄酮类化合物，具有明显的抗炎和镇痛作用，对类风湿性关节炎的治疗效果良好［6-15］。该植物的药用部位在不同地区差别较大，如西藏以花、叶为主，而甘肃甘南藏区则多为带叶嫩枝［2］。本实验采用HPLC法，分别测定了西藏自治区和甘肃省甘南藏族自治州产烈香杜鹃花、叶、嫩枝中金丝桃苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素这4 种黄酮类成分的含有量，为该植物的合理临床用药提供理论依据。

1 仪器、试药和药材

LC-2010A HPLC 色谱仪(日本岛津公司)。金丝桃苷 (批号111521-200303)、槲皮素 (批号100081-200406，纯度以93.3% 计)、山柰酚(批号110861-2004050)、异鼠李素 (批号110860-200407)对照品(中国食品药品检定研究院)。甲醇为色谱纯(德国Merck 公司);水为超纯水(自制);其他试剂均为分析纯。

烈香杜鹃(甘肃省甘南州玛曲县医药公司、甘南州卡加曼寺藏医院、西藏自治区藏药厂、西藏自治区医药公司)，由甘肃省食品药品检验所中药室杨玲霞副主任药师鉴定为杜鹃花科植物烈香杜鹃R. anthopogonoides。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(4.0 mm ×250 mm，5.0 μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(50 ∶50);体积流量1.0 mL/min;检测波长360 nm。此条件下，金丝桃苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素与其他组分基线分离良好，理论塔板数按槲皮素峰计为8 580。

2.2 对照品溶液制备 分别精密称取金丝桃苷6.12 mg、槲皮素5.26 mg、山柰酚1.05 mg、异鼠李素2.06 mg，置于50 mL 量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液制备 精密称取药材细粉2 g，置于锥形瓶中，加入甲醇20 mL，超声处理40 min，放冷，甲醇补足减少质量，摇匀，过滤后取续滤液，即得。在“2.1”项色谱条件下，分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液5 μL 和“2.3”项下供试品溶液10 μL，注入HPLC 色谱仪进行测定。结果，金丝桃苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素与相邻组分基线完全分离，峰形良好，保留时间分别为6.5 和15.7 min，见图1。

2.4 线性关系 分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，置于10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。然后，取其中10 μL 注入HPLC 色谱仪中进行测定，以各成分峰面积为纵坐标(Y)，对照品量(μg)为横坐标(X)，建立标准曲线，结果见表1。

图1 对照品和样品的HPLC 图Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances andsamples

表1 线性关系测定结果Tab.1 Determination result of linear relationships

2.5 精密度试验 精密吸取“2.2”项下对照品溶液5 μL，连续进样6 次，测定峰面积RSD。结果，金丝桃苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素的RSD 分别为0.1%、0.1%、1.8%和1.4%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一批次6 号样品(产地为甘肃省甘南州)6 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，然后精密吸取其中10 μL 进样测定并计算。结果，样品中金丝桃苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素的含有量分别为0.56、0.46、0.06、0.21 mg/g，RSD 分别为1.4%、2.0%、2.6%、2.4%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 精密称取6 号样品(产地为甘肃省甘南州)2.0 g，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下，分别于0、2、4、6、8、10 h 进样测定。结果，金丝桃苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素的RSD 分别为0.8%、1.2%、2.0%、2.5%，表明供试品溶液稳定性良好。

2.8 回收率试验 精密称取6 号样品1.0 g (金丝桃苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素的含有量分别为0.56、0.46、0.06，0.21 mg/g)，共6 份，分别精密加入对照品溶液5 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下测定，计算平均回收率。结果，金丝桃苷、槲皮素、异鼠李素、山柰酚的平均回收率分别为98.5%、98.6%、95.7%、97.1%，RSD 分 别 为 2.3%、2.8%、1.3%、2.7%，表明该方法回收率良好。

2.9 样品的测定 对烈香杜鹃的花、叶、嫩枝进行成分测定，结果见表2。

表2 样品测定结果Tab.2 Determination result of samples

3 讨论

稳定合格的药材质量是保证制剂药效的物质基础［16］，它与药材的产地、药用部位等因素密切相关。其中，不同产地因其生态环境有别，会导致药材质量的差异，而且不同药用部位所含化学成分的种类、比例及含有量差异也会较大，进而直接影响药材的安全性及药效。因此，对药材的产地及不同药用部位进行研究具有很重要的临床意义。

《卫生部药品标准藏药(第一册)》规定，烈香杜鹃的药用部位为干燥花和叶［1］。但在收集药材时发现，藏区有的以花(90%花，混有少量叶，无嫩枝)入药，有的以叶(90%叶，混有少量花，无嫩枝)入药，还有的以嫩枝(85%嫩枝，混有少量叶和花)入药。因此，对该植物的嫩枝、叶、花分别进行黄酮类成分含有量的考察，对指导临床用药具有很重要的现实意义。

在烈香杜鹃不同药用部位中，金丝桃苷的含有量由高到低，依次为叶＞花＞嫩枝;槲皮素含有量依次为嫩枝＞叶＞花;山柰酚和异鼠李素含有量主要为嫩枝，而花和叶含微量或基本不含两者。而且，不同产地和药用部位的总黄酮含有量也有差异。

烈香杜鹃嫩枝中不仅槲皮素的含有量较高，而且存在山柰酚和异鼠李素，具有一定的药用价值。因此，如果能进一步比较研究该植物嫩枝、花、叶的药理作用，将为烈香杜鹃的临床应用提供更好的理论依据。

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