SD大鼠血液生化指标正常区间初步建立

贺学英，王 辉，汤菊莉，管 博，曾亚力，史建峰

(北京市医疗器械检验所，医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室，北京101111)

SD大鼠血液生化指标正常区间初步建立

贺学英，王 辉，汤菊莉，管 博，曾亚力，史建峰

(北京市医疗器械检验所，医疗器械检验与安全性评价北京市重点实验室，北京101111)

实验动物血液生化检测是评价长期应用于人体的医疗器械毒性的必不可少的指标。本实验拟建立亚慢毒性试验中最常用的SD大鼠多项生化指标的正常参考区间，用以指导对试验结果的正确分析。通过近3年数据的积累，目前已初步建立15项生化指标的本实验室正常参考区间。在研究过程中也发现采用人血检测的试剂时，要慎重确立检测条件，种系差异会造成生化反应条件的变化，建立稳定的研究系统的参考区间可能是解决这一问题的可行方式。

SD大鼠;生化检测;参考区间

0 前言

亚慢毒性试验是评价植入人体或反复长期应用于人体的医疗器械的安全性的重要手段，根据GB/ T16886.11－2011《医疗器械生物学评价—全身毒性试验(ISO 10993.11:2006，IDT)》中的要求进行医疗器械亚慢毒性试验时，血液生化检测是反应毒性变化的必不可少的指标。但目前尚无实验动物血液学、血液生化等的权威参考值，也鲜有专用的检测试剂(基本使用人血检测试剂)，再加之动物品系的差异，因此各实验室之间的数据可比性差，建立实验室自己系统的正常参考区间对于动物生化检验结果的分析具有重大意义，这关系到能否对待检物做出客观科学的评价。本研究拟建立我室常用的亚慢实验动物—SD大鼠血液生化指标的正常参考区间以指导相关试验的结果分析。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SD大鼠，雌雄各半。

1.2 检测生化项目

总蛋白(Total protein)、白蛋白(Albumin)、总胆红素(Total bilirubin)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶/谷氨酸－草酰乙酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐(Creatinine)、尿素(U-rea)、肌酸激酶(CK)、葡萄糖(Glucose)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、钾离子(K)，钠离子(Na)和氯离子(CL)。

2 检测系统

(1)仪器:日立7180生化分析仪。

(2)试剂:除氯离子检测试剂为九强生物，其它项目均采用中生北控生化试剂。

3 试验方法

(1)为了更好地应用于亚慢试验中生化检测项目的分析，参考区间测定在亚慢试验过程中进行。由于所检医疗器械产品多数为预期低毒样品(很多已在临床应用多年)，因此本着“3R”的动物福利原则，为减少实验动物使用量，我们同时检测对照组及试验组试验动物的相关指标，对各检测项目所得结果进行统计分析，如各组间结果无统计学差异，则将相关实验数据均纳入参考区间的测定中，在数据处理中均删去离群值(超出均值 ± 3SD)。

(2)由于在亚慢试验中采用不同给药途径，各途径给药时间有较大差异，如连续14d经静脉给药，连续28d静脉给药，90d经口给药，分别对应8～10周龄，10～12周龄，19～21周龄大鼠;为了排除生化指标随年龄变化，本研究分别统计3个年龄组别大鼠各项指标的参考区间，以更好指导实际工作，做出客观科学的分析。

4 结果与讨论

4.1 8～10周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间

历时3年，共获得雌雄各140个有效数据，经统计分析，剔除离群值，15项生化指标参考区间见表1(雄)，表2(雌)。

4.2 10～12周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间

表1 8～10周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间(雄，n=140)

表2 8～10周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间(雌，n=140)

表3 10～12周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间(雄，n=50)

表4 10～12周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间(雌，n=50)

表5 19～21周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间(雄，n=120)

表6 19～21周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间(雌，n=120)

历时3年，共获得雌雄各50个有效数据，经统计分析，剔除离群值，15项生化指标参考区间见表3(雄)，表4(雌)。

4.3 19～21周龄SD大鼠15项生化指标检测的参考区间

历时3年，共获得雌雄各120个有效数据，经统计分析，剔除离群值，15项生化指标参考区间见表5(雄)，表6(雌)。

检测数据显示不同周龄，不同性别大鼠在有些生化指标上有较大的差异，如ALP随着动物周龄的增加，该值不断下降，而且雌雄鼠之间也有较大差异，如图1所示。另外总蛋白、白蛋白、尿素氮等指标性别间差异也较大，而且随大鼠周龄增加呈逐渐升高趋势，如不进行分层统计，则有可能误用参考区间。

在参考区间建立期间，还发现大鼠白蛋白与总蛋白比值基本都小于1，这与人类的参考区间有较大不同，经与蛋白电泳进行比对后，发现应用临床生化试剂检测大鼠血清白蛋白数值较低，校正系数为1.1(本研究中白蛋白数值均未进行校正)。这点也提示我们直接应用人类临床试剂进行动物指标检测可能会存在种属之间的差异从而造成测定结果偏差，但如果每个检测机构的系统稳定，建立特定的参考区间用以该系统数据的分析时则不会造成结论上的错误，但同时也说明需慎重采用不同系统所得的参考区间。

5 结论

亚慢试验中观测的生化指标，有些项目的检测值与大鼠周龄、性别有很大的关联性，因此建立与标准中要求相应的不同周龄、性别大鼠的生化指标参考区间对正确分析试验结果有重要意义。

图1 不同性别不同周龄大鼠ALP变化

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［2］刘成玉.临床检验基础［M］.北京:科学技术文献出版社，2005.

［3］林健，郑丽宏.大鼠血常规正常参考值范围及评价方法的探讨［J］.海峡预防医学杂志，2007，13(4): 57－58.

［4］陈华李春海贺苏兰性别因素对大鼠部分血液学，血液生化指标和脏器系数的影响［J］实验动物科学与管理，1996:13(1);21.

［5］GB/T 16886.11－2011医疗器械生物学评价.第11部分:全身毒性试验(ISO 10993.11:2006，IDT)［S］.

［6］YY/T 0127.15－2009口腔医疗器械生物学评价.第2单元:试验方法亚急性和亚慢性全身毒性试验:经口途径［S］.

R446.11

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