宽筋藤总生物碱含量测定方法研究

迟森森，韩 丹，刘 斌（北京中医药大学中药学院，北京 100102）

宽筋藤总生物碱含量测定方法研究

迟森森，韩 丹，刘 斌＊（北京中医药大学中药学院，北京 100102）

目的 建立宽筋藤药材中总生物碱的含量测定方法。方法 以盐酸药根碱为对照品，采用紫外－可见分光光度法测定宽筋藤总生物碱的含量，测定波长为430nm。结果 盐酸药根碱在0.001 1～0.006 5mg·mL－1范围内与吸光度呈良好线性关系，回归方程：Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5）。盐酸药根碱平均回收率为100.4%，RSD＝2.0%（n＝6）。结论 16批宽筋藤药材总生物碱含量测定结果表明，所建立的方法简便、准确，可用于宽筋藤药材总生物碱的含量测定。

宽筋藤；总生物碱；紫外－可见分光光度法；含量测定

宽筋藤是防己科青牛胆属植物中华青牛胆Tinospora sinensis（Lour.）Merr.的干燥藤茎，又名伸筋藤、舒筋藤、松根藤［1］，其味苦性寒，有舒经活络、清热利湿的作用，中医用其治疗风湿痹痛、腰肌劳损、跌打损伤，也用于调补气血、镇静安神等［2］。宽筋藤亦为常用藏药，历代藏医文献对宽筋藤的功效早有详述，《晶珠本草》记载：“治疗隆，赤巴合并症；培根病、风湿病、隆热病”［3］，是云南藏族和纳西族地区习用的高原植物药，主要分布于广东、海南、广西和云南等地。

宽筋藤主要含有生物碱类、萜类、黄酮类等化学成分［4－6］，其提取物具有抗氧化、抗炎和免疫调节等作用［68］。而目前有关宽筋藤药材总生物碱含量的测定方法未见报道。本文采用紫外－可见分光光度法［9－11］对宽筋藤药材总生物碱的含量测定方法进行研究，并对其提取方法进行单因素考察，优选出最佳提取工艺，为宽筋藤药材质量分析、评价与控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Hitachi U－2000型紫外－可见分光光度计（日本日立公司）；Sartorious BT 25S型1／100 000电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；KQ－500DE型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。

1.2 试药 宽筋藤药材分别购自全国14个不同地区，共16批，经鉴定为防己科青牛胆属植物中华青牛胆Tinospora sinensis（Lour.）Merr.的干燥藤茎；对照品盐酸药根碱（批号：0774－20026）购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 供试品溶液的制备 取宽筋藤药材（80目）约0.2g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入8mL盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液，密塞，称定质量，回流提取60min，静置，冷却，用盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液补足减失的质量，过滤，将残留物挥干，加适量甲醇溶解并转移至碱性氧化铝柱（100～200目，1g，干法装柱）上，用甲醇10mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残留物加适量甲醇溶解并转移至25mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液的制备 取盐酸药根碱对照品约5mg，精密称定，置于25mL量瓶中，加适量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得质量浓度为0.217mg·mL－1的对照品溶液。

2.2 测定波长的选择 在200～900nm范围内分别对盐酸药根碱对照品溶液和供试品溶液进行全波长扫描，发现两者均在430nm处有最大吸收，故确定430nm为测定波长。

2.3 提取条件的优化

2.3.1 提取方式考察 取宽筋藤药材（80目）2份，每份约0.20g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入40倍量盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液，密塞，称定质量，分别采用超声30min（功率250W，频率20KHz）和加热回流60min进行提取，按2.1.1项下方法制备供试液，于430nm处测定吸光度，计算总生物碱的含量，结果超声提取法总生物碱含量为3.719mg·g－1，回流提取法总生物碱含量为5.818mg·g－1，说明加热回流提取法的提取效果优于超声提取法。

2.3.2 药材粉碎度考察 分别取40，60，80和120目宽筋藤药材，每份约0.20g，精密称定，置于圆底烧瓶中，按2.1.1项下方法制备供试液，于430nm处测定吸光度，计算总生物碱的含量，结果见表1。由表1可知，宽筋藤药材粉碎度为80目时，提取效果最佳。

表1 粉碎度考察结果Tab.1 Results of grinding degree investigation

2.3.3 溶剂量考察 取宽筋藤药材（80目）4份，每份约0.20g，精密称定，置于圆底烧瓶中，分别精密加入20，40，80和160倍量盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液，按2.1.1项下方法制备供试液，于430nm处测定吸光度，计算总生物碱含量，结果见表2。由表2可知，用40倍量盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液提取时总生物碱含量已相对较高，因此选择40倍量盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液对药材进行提取。

表2 溶剂量考察结果Tab.2 Results of the solvent amounts investigation

2.3.4 提取时间考察 取宽筋藤药材（80目）4份，每份约0.20g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入40倍量盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液，密塞，称定质量，分别回流提取30，60，90和120min，按2.1.1项下方法制备供试液，于430nm处测定吸光度，计算总生物碱含量，结果见表3。由表3可知，60min时总生物碱已经提取完全，因此将提取时间确定为60min。

表3 提取时间考察结果Tab.3 Results of extraction time investigation

2.4 线性关系 精密量取质量浓度为0.217mg·mL－1的盐酸药根碱对照品溶液0.05，0.10，0.15，0.20，0.25和0.30mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，于430nm处测定吸光度。以盐酸药根碱对照品质量浓度为横坐标、吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5）。结果表明盐酸药根碱质量浓度在0.001 1～0.006 5mg·mL－1范围内与吸光度呈良好线性关系。

2.5 精密度 取同一批宽筋藤药材（80目）6份，每份约0.15g，精密称定，置于圆底烧瓶中，按2.1.1项下方法制备供试液，在430nm波长处测定吸光度，连续测定6次，计算RSD值为0.17%（n＝6），表明该方法精密度良好。结果见表4。

表4 精密度考察结果Tab.4 Results of accuracy investigation

2.6 稳定性 取宽筋藤药材（80目）6份，每份约0.15g，精密称定，置于圆底烧瓶中，按2.1.1项下方法制备供试液，于溶液配制后0，2，4，8，12和24h，在430nm波长处测定吸光度，计算RSD值为0.51%（n＝6），表明该样品溶液在24h内稳定。结果见表5。

表5 稳定性考察结果Tab.5 Results of stability investigation

2.7 重复性 取同一批宽筋藤药材（80目）5份，每份约0.15g，精密称定，置于圆底烧瓶中，按2.1.1项下方法制备供试液，在430nm波长下，测定吸光度，计算得总生物碱平均含量为5.8mg·g－1，RSD值为1.88%（n＝5），表明该方法重复性良好。结果见表6。

表6 重复性考察结果Tab.6 Results of repeatability investigation

2.8 回收率 取宽筋藤药材（80目）6份，每份约0.1g，精密称定，置于圆底烧瓶中，分别精密加入质量浓度为0.217mg·mL－1的盐酸药根碱对照品溶液2.5mL，按2.1.1项下方法制备供试液，在430nm波长处测定吸光度，计算平均回收率为100.38%，RSD值为1.95%（n＝6）。结果见表7。

表7 回收率测定结果Tab.7 Results of recovery test

2.9 样品含量测定 分别取购自不同地区的宽筋藤商品药材（80目）约0.3g，精密称定，置于圆底烧瓶中，按2.1.1项下方法制备供试液，在430nm波长处测定吸光度，计算总生物碱含量，结果见表8。

表8 不同商品药材含量测定结果Tab.8 Results of the content determination of medicinal materials from different regions

3 讨论

本文采用紫外－可见分光光度法对宽筋藤药材总生物碱进行定量分析，并采用单因素实验法对宽筋藤药材提取条件进行了优化，确定宽筋藤药材最佳提取工艺为：药材粉碎至80目，加入40倍量盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液，加热回流提取60min。以盐酸药根碱为对照品对总生物碱进行定量分析，盐酸药根碱回归方程为Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5），表明盐酸药根碱在0.001 1～0.006 5mg·mL－1范围内与吸光度呈良好线性关系。

14个不同地区宽筋藤商品药材总生物碱含量在2.5～7.6mg·g－1之间，各批次商品药材总生物碱含量的最高值和最低值相差3倍以上，表明不同地区宽筋藤药材质量存在较大差别。其中购自玉林、湛江的宽筋藤商品药材总生物碱含量较高，而购自南京的商品药材总生物碱含量较低。这可能与宽筋藤药材生长的地理环境、采收时间以及贮藏条件等因素有关。本文在筛选确定了宽筋藤药材总生物碱提取工艺的基础上，建立了总生物碱的含量测定方法，并比较了不同地区宽筋藤商品药材总生物碱的含量差异，为宽筋藤药材的质量控制和评价及其开发利用奠定了基础。

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Study on the determination method of total alkaloids in Tinospora sinensis caulis

CHI Sensen，HAN Dan，LIU Bin＊（School of Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

Objective To establish a method for the determination of total alkaloids in Tinospora sinensis caulis.Method The content of total alkaloids was determined，and hydrochloric jatrorrhizine was selected as a reference substance.Results Hydrochloric jatrorrhizine had a good linear relationship with the absorbance in the range of 0.001 1－0.006 5mg·mL－1and the regression equation was Y＝14.747 X－0.010 7（r＝0.999 5）.The average recovery for hydrochloric jatrorrhizine was 100.4%，RSD＝2.0%（n＝6）.Conclusion The contents determination of the total alkaloids for sixteen batches of medicinal materials showed that the method was easy to operate and accurate，which could be used for the determination of the total alkaloids in Tinospora sinensis caulis.

Tinospora sinensis caulis；total alkaloids；UV－VIS spectrophotometry；content determination

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.006

R284

A

1004－2407（2015）04－0349－04

2015－02－04）

北京中医药大学自主选题项目（2013－JYBZZ－XS－116）

迟森森，女，在读硕士研究生

＊通信作者：刘斌，男，博士，教授，博士生导师