尿肌酐测定方法的改良

□ 蒯 霞

肌酐是肌酸和磷酸肌酸代谢的终产物，它主要由肌肉中磷酸肌酸的非酶促反应生成。对正常成人来说，每日产生肌酸酐的量是恒定的，而且肌酸酐的产生量与肌肉量成正比，因此一般男性的数值比女性高一点。经常锻炼肌肉者和非素食者的数值也较高。肌酸酐的产生量一定，而且不会在过滤后被肾小管重吸收。它的排泄量反映血液中的肌酸酐含量和肾小球的过滤速率，也就是肾脏的机能。当肾发生严重病变时，肌酸酐排泄受阻，血液中肌酸酐含量升高。血液中肌酸酐的测定，可以知道肾功能是否有严重障碍，肌酸酐的值越高，肾脏的障碍越大;但是血液肌酸酐只有在肾脏有严重障碍时才会大幅提高，不能作为早期肾脏病的指标。同时肌酐值也是作为其他检测项目的校正值。

一、实验原理

肌酐与过量苦味酸在碱性条件下反应生成橙红色苦味酸肌酐。在波长492nm处比色定量。

二、实验器材及耗材

10ml的采尿管;10ml的具塞比色管;96孔板、酶标仪MULTISKAN MK3;加样枪 5ml、1ml、100ul，枪头;振荡器。

三、试剂

(一)饱和苦味酸。称取苦味酸(A.R)15克，置于大烧杯中，加蒸馏水1，000ml，冷却后有结晶析出，表示已达饱和，倾出上清夜备用。此液标准饱和度的测定—准确取清夜10ml，用0.1%酚酞作指示剂，以0.1N的氢氧化钠(NaOH)滴定需5.2～5.4ml应能中和为准。

(二)2.5N的氢氧化钠溶液。称取氢氧化钠(NaOH)100克，加蒸馏水使溶解，冷却后用蒸馏水稀释至1升。

(三)碱性苦味酸。准确量称取饱和苦味酸5份，加2.5N的氢氧化钠1份，应用时即配即用为宜。

(四)肌酐标准储备液(1mg/ml)。准确量称取纯肌酐500mg，用0.1mol/L盐酸溶解，然后移至500ml的容量瓶中，加0.1mol/L盐酸至刻度。加甲苯数滴防腐，存于冰箱，此溶液稳定，可长期保存。

(五)肌酐标准应用液(0.01mg/ml)。准确量取3ml标准储备液，置于500ml的容量瓶中，加水稀释至刻度(此溶液可保存一周以上)。

四、操作步骤

(一)样品处理。取0.1ml尿样置于10ml比色管中，加水至3ml。

(二)试剂空白。取3ml水置于10ml比色管中。

(三)绘制标准曲线。取8支比色管，按表1配制。

表1

向各管加入2.0ml碱性苦味酸，混匀，于室温下反应20～30min，加 5ml水，混匀，备用。

将96孔板每孔先加入0.1ml水，再从比色管中取0.1ml溶液加入。放入酶标仪度数。根据吸光度计算。

相比WS/T97-1996尿中肌酐分光光度测定方法，线性范围扩大为0～3g/L，可以同时检测大量样品。

五、检测数据

图1 改良后的标准曲线

图2 改良前的标准曲线

六、检测结果

改良过后的方法与之前的方法所测的肌酐值在0～1g/L，区间内差不多一样。高于1的用722分光光度计做不出来，已经不成线性。

七、结果分析

改良后的方法可以对大量的样品进行同时度数，且检测范围也扩大了，有助于高值的检测。正常人尿液当中的肌酐范围在0.35～2.25g/L。但是有时候检测的尿样中肌酐含量超过3g/L，所以该良好的方法有助于更好地检测尿液中的肌酐。此外，改良过后的方法可以同时检测大批样品，节约时间，解放劳动力。总之改良好的方法既节约了时间和人力也提高了准确度和检测范围。

八、干预措施

尿液中肌酐升高或降低都说明机体可能发生病变，例如升高以后会出现夜尿增多、乏力、口渴、身上出现浮肿、血压升高、心力衰竭、肺水肿等症状，这是水代谢失衡的表现。降低可能是因为患者肾脏内发生了纤维化，而纤维化导致肾脏固有细胞损坏，破坏了肾脏固有细胞的组织结构，损伤了肾功能。