武均宜肖 锋王恩军靳 祎*
1.中南大学湘雅医学院,湖南 长沙 410000;2.河北大学基础医学院,河北 保定 071000
刺五加注射液对人乳腺癌细胞体外抑制的实验研究
武均宜1肖 锋2王恩军2靳 祎2*
1.中南大学湘雅医学院,湖南 长沙 410000;2.河北大学基础医学院,河北 保定 071000
目的:探讨刺五加注射液对人乳腺癌细胞MCF-7的体外增殖的影响。方法:采用MTT法测定了不同剂量的刺五加注射液对MCF-7细胞的体外增殖的抑制作用,并通过倒置显微镜观察其细胞形态的变化。结果:刺五加注射液可以抑制MCF-7细胞的增殖,量效关系良好;形态学观察到细胞凋亡。结论:刺五加注射液对MCF-7细胞增殖具有较强的抑制作用。
刺五加注射液;人乳腺癌细胞;MCF-7;增殖作用;抑制作用
刺五加又名五加参,为五加科植物刺五加的根和茎。现代医学研究表明刺五加具有抗肿瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用[1-2]。据报道,刺五加及其提取物对肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多种肿瘤均有较强抑制作用,还可改善肿瘤化疗患者的免疫状况,提高机体的抗肿瘤功效[3-4]。本试验测定不同剂量的刺五加注射液对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,为刺五加抗肿瘤作用的研究及今后的临床应用提供参考依据。
1.1 材料 刺五加注射液(批号:2007111411,黑龙江省完达山制药厂);顺铂(批号:04080212,齐鲁制药有限公司);MCF-7细胞 (由河北大学生命科学学院提供);四甲基偶氮唑盐(MTT)、RPMI 1640培养液(美国Sigma公司);0.25%胰蛋白酶消化液(美国HyClone公司)。二甲亚砜(DMSO,上海紫一试剂厂);胎牛血清 (中国医学科学院生物工程研究所)。
1.2方法
1.2.1 细胞的培养 MCF-7细胞复苏后,贴壁生长于含10%胎牛血清,青霉素和链霉素各100U/ml的RPMI 1640完全培养液中,并置于37℃,5%CO2的培养箱中培养。
1.2.2 刺五加注射液对细胞增殖抑制率的影响 采用MTT法,将MCF-7细胞按照5×104个/ml的密度接种到96孔培养板中,试验分为以下几组:刺五加注射液组 (10、20、40μl),阴性对照组加相同剂量的生理盐水,阳性对照组加50μg/m l的顺铂,终体积为200μl/孔。培养24 h后加入5μg/μl的MTT液,继续培养4h,弃上清液,加入DMSO后磁力震荡15min,用酶标仪测定各孔吸光度A值,测定波长λ=570nm,参考波长λ=630nm,计算细胞增殖的抑制率:抑制率 (%)=(对照组A值-实验组A值)/对照组A值×100%
1.2.3 细胞形态学观察 取生长状态良好的MCF-7细胞接种于48孔细胞培养板内,培养24h,实验组加入40μl/孔的刺五加注射液,对照组加入生理盐水,培养24h后在倒置显微镜下观察细胞的形态。
1.2.4 统计学分析 数据采用The SAS system 6.12统计软件进行分析。计量数据以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有统计学意义。
2.1 对MCF-7细胞增殖的抑制作用 由表1可知,MCF-7细胞经不同剂量的刺五加注射液作用24h后,细胞增殖抑制率显著增加,显示较明显的细胞毒性反应,且随着药物剂量的增加,抑制率逐渐增强,显示良好的量效关系。与阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。
2.2细胞形态学变化刺五加注射液作用MCF-7细胞后,形态学发生了显著变化(见图1)。阴性对照组MCF-7细胞贴壁良好,呈不规则长梭形或多角形,排列无方向性,细胞边缘清晰。实验组细胞经刺五加注射液作用后,细胞多数呈圆形,胞膜起皱,培养基内悬浮着较多的细胞和碎片。
刺五加注射液为经水醇法提取制成的灭菌制剂,含黄酮、刺五加多糖和刺五加苷等多种有效成分,已广泛应于临床多种疾病的治疗[5]。有研究显示,刺五加注射液对体外培养HeLa细胞、A549细胞的增殖均有较强的抑制作用,并能促进细胞凋亡[6、7]。本试验研究表明,刺五加注射液对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖有较强的抑制作用,10μl/孔、20μl/孔、40μl/孔的刺五加注射液作用细胞24h后,细胞抑制率分别48.18%、60.23%和84.67%,呈现良好的剂量效应关系。说明刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用在此范围内与其剂量呈正相关,即随着药物剂量的增加,抑制作用明显增强。而刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用及详细机制还有待于今后深入研究。
[1]董梅,李廷利.刺五加化学成分及药理作用研究进展 [J].中医药学报,2011,39(3):98-100.
[2]许妍姬.刺五加对痴呆模型小鼠记忆障碍及MDA含量、SOD和乙酰胆碱脂酶活性的影响[J].中国老年学杂志,2010,9(30):1238-1240.
[3]丰俊东,林代华,刘希琴,等.刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用[J].中药新药与临床药理,2007,18(5):339-341.
[4]Yoon TJ,Yoo YC,Lee SW,et al.Anti-metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunologicalmechanism of action[J]. JEthnopharmacol,2004,93(2):247.
[5]杜秀芳,刘伟娜,詹文红.刺五加注射液的临床应用进展 [J].现代中西医结合杂志,2007,16(24):3603-3604.
[6]王倩,赵刚.刺五加注射液诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡机理的研究[J].公共卫生与预防医学,2013,24(2):13-17.
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R285.5
A
1007-8517(2015)11-0014-02
2015.03.26)
河北省中医药管理局科研计划项目(2009061)。
武均宜(1995-),女,大学本科,医学检验专业,E-mail:wujunyi1688@163.com。
靳祎(1977-),女,副教授,从事抗肿瘤中药及化学生物学研究。E-mail:jinyi2009@163.com。