刺五加注射液对人乳腺癌细胞体外抑制的实验研究

2015-01-24 15:28武均宜肖锋王恩军靳
中国民族民间医药 2015年11期
关键词:刺五加抑制率注射液

武均宜肖 锋王恩军靳 祎*

1.中南大学湘雅医学院,湖南 长沙 410000;2.河北大学基础医学院,河北 保定 071000

刺五加注射液对人乳腺癌细胞体外抑制的实验研究

武均宜1肖 锋2王恩军2靳 祎2*

1.中南大学湘雅医学院,湖南 长沙 410000;2.河北大学基础医学院,河北 保定 071000

目的:探讨刺五加注射液对人乳腺癌细胞MCF-7的体外增殖的影响。方法:采用MTT法测定了不同剂量的刺五加注射液对MCF-7细胞的体外增殖的抑制作用,并通过倒置显微镜观察其细胞形态的变化。结果:刺五加注射液可以抑制MCF-7细胞的增殖,量效关系良好;形态学观察到细胞凋亡。结论:刺五加注射液对MCF-7细胞增殖具有较强的抑制作用。

刺五加注射液;人乳腺癌细胞;MCF-7;增殖作用;抑制作用

刺五加又名五加参,为五加科植物刺五加的根和茎。现代医学研究表明刺五加具有抗肿瘤、抗氧化、抗血栓、提高免疫力等多方面的的作用[1-2]。据报道,刺五加及其提取物对肺癌、胃癌、艾氏腹水癌及白血病等多种肿瘤均有较强抑制作用,还可改善肿瘤化疗患者的免疫状况,提高机体的抗肿瘤功效[3-4]。本试验测定不同剂量的刺五加注射液对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,为刺五加抗肿瘤作用的研究及今后的临床应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料 刺五加注射液(批号:2007111411,黑龙江省完达山制药厂);顺铂(批号:04080212,齐鲁制药有限公司);MCF-7细胞 (由河北大学生命科学学院提供);四甲基偶氮唑盐(MTT)、RPMI 1640培养液(美国Sigma公司);0.25%胰蛋白酶消化液(美国HyClone公司)。二甲亚砜(DMSO,上海紫一试剂厂);胎牛血清 (中国医学科学院生物工程研究所)。

1.2方法

1.2.1 细胞的培养 MCF-7细胞复苏后,贴壁生长于含10%胎牛血清,青霉素和链霉素各100U/ml的RPMI 1640完全培养液中,并置于37℃,5%CO2的培养箱中培养。

1.2.2 刺五加注射液对细胞增殖抑制率的影响 采用MTT法,将MCF-7细胞按照5×104个/ml的密度接种到96孔培养板中,试验分为以下几组:刺五加注射液组 (10、20、40μl),阴性对照组加相同剂量的生理盐水,阳性对照组加50μg/m l的顺铂,终体积为200μl/孔。培养24 h后加入5μg/μl的MTT液,继续培养4h,弃上清液,加入DMSO后磁力震荡15min,用酶标仪测定各孔吸光度A值,测定波长λ=570nm,参考波长λ=630nm,计算细胞增殖的抑制率:抑制率 (%)=(对照组A值-实验组A值)/对照组A值×100%

1.2.3 细胞形态学观察 取生长状态良好的MCF-7细胞接种于48孔细胞培养板内,培养24h,实验组加入40μl/孔的刺五加注射液,对照组加入生理盐水,培养24h后在倒置显微镜下观察细胞的形态。

1.2.4 统计学分析 数据采用The SAS system 6.12统计软件进行分析。计量数据以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 对MCF-7细胞增殖的抑制作用 由表1可知,MCF-7细胞经不同剂量的刺五加注射液作用24h后,细胞增殖抑制率显著增加,显示较明显的细胞毒性反应,且随着药物剂量的增加,抑制率逐渐增强,显示良好的量效关系。与阴性对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。

2.2细胞形态学变化刺五加注射液作用MCF-7细胞后,形态学发生了显著变化(见图1)。阴性对照组MCF-7细胞贴壁良好,呈不规则长梭形或多角形,排列无方向性,细胞边缘清晰。实验组细胞经刺五加注射液作用后,细胞多数呈圆形,胞膜起皱,培养基内悬浮着较多的细胞和碎片。

3 讨论

刺五加注射液为经水醇法提取制成的灭菌制剂,含黄酮、刺五加多糖和刺五加苷等多种有效成分,已广泛应于临床多种疾病的治疗[5]。有研究显示,刺五加注射液对体外培养HeLa细胞、A549细胞的增殖均有较强的抑制作用,并能促进细胞凋亡[6、7]。本试验研究表明,刺五加注射液对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖有较强的抑制作用,10μl/孔、20μl/孔、40μl/孔的刺五加注射液作用细胞24h后,细胞抑制率分别48.18%、60.23%和84.67%,呈现良好的剂量效应关系。说明刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用在此范围内与其剂量呈正相关,即随着药物剂量的增加,抑制作用明显增强。而刺五加注射液对MCF-7细胞的抑制作用及详细机制还有待于今后深入研究。

[1]董梅,李廷利.刺五加化学成分及药理作用研究进展 [J].中医药学报,2011,39(3):98-100.

[2]许妍姬.刺五加对痴呆模型小鼠记忆障碍及MDA含量、SOD和乙酰胆碱脂酶活性的影响[J].中国老年学杂志,2010,9(30):1238-1240.

[3]丰俊东,林代华,刘希琴,等.刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用[J].中药新药与临床药理,2007,18(5):339-341.

[4]Yoon TJ,Yoo YC,Lee SW,et al.Anti-metastatic activity of acanthopanax senticosus extract and its possible immunologicalmechanism of action[J]. JEthnopharmacol,2004,93(2):247.

[5]杜秀芳,刘伟娜,詹文红.刺五加注射液的临床应用进展 [J].现代中西医结合杂志,2007,16(24):3603-3604.

[6]王倩,赵刚.刺五加注射液诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡机理的研究[J].公共卫生与预防医学,2013,24(2):13-17.

[7]靳祎,王恩军,朱宝成.刺五加注射液对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用[J].军医进修学院学报,2009,30(5):729-730.

R285.5

A

1007-8517(2015)11-0014-02

2015.03.26)

河北省中医药管理局科研计划项目(2009061)。

武均宜(1995-),女,大学本科,医学检验专业,E-mail:wujunyi1688@163.com。

靳祎(1977-),女,副教授,从事抗肿瘤中药及化学生物学研究。E-mail:jinyi2009@163.com。

猜你喜欢
刺五加抑制率注射液
山西省发现刺五加种群分布
双酶水解鱼鳞蛋白制备ACE抑制肽的工艺优化研究
血栓弹力图评估PCI后氯吡格雷不敏感患者抗血小板药物的疗效
蔬菜使用不同处理方式对农药残留影响的研究
Diagnosis and Treatment Protocol for Coronavirus Disease 2019(Trial Version 7)
Effects of Shenmai Injection (参麦注射液) Combined with Meglumine Adenosine Cyclophosphate Injection on Cardiac Function and Peripheral Serum Levels of TNF-α,TGF-β1 and IFN-γ in Patients with Viral Myocarditis
刺五加无性繁殖优于有性繁殖
刺五加无性繁殖优于有性繁殖
UPLC-MS/MS法同时测定血必净注射液中8 种成分
炎琥宁注射液不良反应的Meta分析