前列地尔对老年糖尿病肾病患者氧化应激及免疫功能的影响

田 勇 王俊宏 (平顶山市第一人民医院内分泌代谢科，河南 平顶山 467000)

前列地尔对老年糖尿病肾病患者氧化应激及免疫功能的影响

田 勇 王俊宏 (平顶山市第一人民医院内分泌代谢科，河南 平顶山 467000)

目的 探讨前列地尔注射液对老年糖尿病肾病(DN)患者氧化应激及免疫功能的影响。方法 选择80例老年DN患者随机分为治疗组和对照组，两组均给予西医常规治疗，治疗组加用前列地尔注射液治疗2 w，对照组加用安慰剂。两组检测治疗前后空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率(UAER)、尿微量白蛋白(mALB)及血β2微球蛋白(β2-MG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、杀伤性T细胞、抑制性T细胞、辅助性T细胞、早期活化T细胞、总淋巴细胞、自然杀伤细胞、B细胞。结果 前列地尔注射液干预治疗2 w后，治疗组患者UAER、mALB、β2-MG、MDA、ROS、早期活化T细胞和总淋巴细胞水平较对照组降低(P＜0.05)，SOD、CD4+、CD4+/CD8+水平较对照组升高(P＜0.05)，余指标变化无统计学意义。结论 前列地尔注射液具有调节老年DN患者氧化应激及免疫功能的作用，能改善患者肾功能。

前列地尔;糖尿病肾病;氧化应激;免疫功能

糖尿病肾病(DN)是一种常见的糖尿病慢性并发症，甚至导致氮质血症、尿毒症，严重危害患者的生活质量。目前具体发病机制仍不清楚，但多数认为其发生与脂肪、内分泌、氧化应激、免疫系统等功能障碍有关〔1〕。其中氧化应激与DN的发展有着密切的联系，不仅使得氧化代谢终产物肾脏活性氧(ROS)增多，而且同时也影响着机体的抗氧化防御系统。2型糖尿病作为一种自然免疫和低度炎症性疾病，患者自身免疫功能低下也导致免疫应答异常，本研究旨在通过检测使用前列地尔注射液治疗的老年DN患者脂肪、内分泌、氧化应激、免疫系统等指标水平的变化，探讨前列地尔对DN患者的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年4月至2013年1月在我院内分泌科住院并诊断为DN患者80例，男44例，女36例，按入院顺序随机分为对照组和前列地尔组，对照组40例，男27例，女13例，年龄39～68〔平均(57.2±10.5)〕岁，平均病程为(8.9±5.7)年。前列地尔组40例，男26例，女14例，年龄42～69〔平均(60.4±8.5)岁〕，平均病程为(8.9±5.7)年。排除标准:经尿检、肾穿刺活检等排除其他因素引起的肾脏病患者;近期使用抗氧化剂等药物治疗者;反复尿路感染者;有严重心、肝、肺疾病者。该研究已经我院医学伦理委员会审查通过，两组患者的性别、年龄及DN病程和体质量指数方面比较，差异无统计学意义，均具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 对照组患者给予常规控制蛋白量饮食、稳定血糖等对症治疗，前列地尔组在对照组治疗基础上加用前列地尔20 μg溶解在100 ml生理盐水中静脉滴注，1次/d，疗程14 d。1.2.2 生化指标检测 所有入选者在治疗前、治疗1个疗程后禁食12 h后次晨采集肘静脉血，采用AU5400全自动生化分析仪，用免疫比浊法、酶学法等技术测定两组患者空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率(UAER)。采用放射免疫法测定尿微量白蛋白(mALB)及血β2微球蛋白(β2-MG)。

1.2.3 氧化指标检测 空腹取静脉血2 ml，4 000 r/min离心10 min，取上清液置于－20℃ 冰箱内统一保存待测。采用分光光度计法检测超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)活性。采用比色法测定血清ROS，试剂盒均由北京中生生物科技股份有限公司提供，按试剂说明书操作。

1.2.4 免疫状态指标检测 空腹取静脉血2 ml，采用FC500流式细胞仪及配套试剂，按试剂说明书操作，检测外周血T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、杀伤性 T 细胞、抑制性T细胞、辅助性T细胞、早期活化T细胞、总淋巴细胞、自然杀伤细胞、B细胞。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析、t检验;采用Spearman等级相关性检验。

2 结果

2.1 各组治疗前后常规指标比较 治疗前两组患者FPG、HbA1c、TC、TG、血肌酐、尿素氮、UAER、mALB 和 β2-MG 水平比较，差异均无统计学意义，治疗后前列地尔组患者 UAER、mALB和β2-MG水平与对照组比较差异显著(P＜0.05)，FPG、HbA1c、TC、TG、血肌酐和尿素氮水平差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

2.2 各组治疗前后免疫功能指标比较 治疗前两组患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、杀伤性、抑制性、辅助性 T 细胞、早期活化T细胞、总淋巴细胞和B细胞水平比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，治疗后前列地尔组患者 CD4+、CD4+/CD8+、早期活化T细胞和总淋巴细胞水平与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，CD8+、杀伤性、抑制性、辅助性T细胞和B细胞水平差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

2.3 各组治疗前后氧化应激指标比较 治疗前两组患者MDA、SOD和ROS水平比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，治疗后前列地尔组患者MDA、SOD和ROS水平与对照组比较， 差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表1 两组患者治疗前后一般指标比较(±s，n=40)

表1 两组患者治疗前后一般指标比较(±s，n=40)

与对照组治疗后比较:1)P＜0.05，下表同

组别FPG(mmol/L)HbA1c(%)TC(mmol/L)TG(mmol/L)血肌酐(μmol/L)尿素氮(mmol/L)UAER(mg/min)mALB(mg/L)β2-MG(mg/L)8 ±1.5 82.3±67.1 50.2±4.1 1.6±0.2治疗后 7.1±1.2 7.2±2.7 5.1 ±1.2 1.6 ±0.5 79.9 ±13.0 5.9 ±1.4 62.3±47.8 47.4±4.1 1.4±0.2前列地尔组 治疗前 7.1±1.10 7.1±2.4 5.4±1.3 1.7±0.5 84.5±14.3 6.0±1.5 83.4±71.9 49.3±5.1 1.6±0.2治疗后 7.1±1.0 7.2±2.6 5.2 ±1.4 1.6 ±0.4 78.4 ±14 6.0 ±1.9 42.5±37.11)38.4±3.21) 0.8±0.11)对照组 治疗前 7.2±1.1 7.1±2.5 5.3±1.3 1.8±0.4 83.8±13.2 5.

表2 两组患者治疗前后免疫功能指标比较(±s，n=40)

表2 两组患者治疗前后免疫功能指标比较(±s，n=40)

指标 CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+杀伤性T细胞抑制性T细胞辅助性T细胞早期活化T细胞总淋巴细胞B细胞(%)45.0±13.5 45.8±12.7 28.5±9.7 8.1±4.8治疗后 28.5±4.9 27.2±7.3 1.1±0.4 15.6 ±5.2 13.7 ±6.4 45.2±14.4 44.9±12.8 27.3±8.4 10.4±5.2前列地尔组 治疗前 25.3±4.8 24.4±7.6 1.0±0.4 15.3±5.2 13.6 ±6.3 45.1±13.7 45.2±12.4 28.7±9.2 8.2±4.2治疗后 38.2±5.41) 27.4±7.8 1.4±0.61) 16.0±7.2 14.3±6.4 45.2±13.9 43.2±13.11)24.6±7.31)对照组 治疗前 25.1±4.7 24.5±6.8 1.0±0.4 15.2±5.1 13.4±7.2 9.8±4.8

表3 两组患者治疗前后氧化应激指标比较(±s，n=40)

表3 两组患者治疗前后氧化应激指标比较(±s，n=40)

指标 MDA(mmol/ml)SOD(μg/ml) ROS(U/ml)14.9±0.4 94.9±1.6 492.5±59.2治疗后 34.2±0.7 62.7±2.4 458.7±57.9前列地尔组 治疗前 14.6±0.5 94.7±1.5 488.7±61.5治疗后 32.5±0.71) 74.3±2.51) 302.7±50.11)对照组 治疗前

2.4 相关性分析 在前列地尔组中CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、杀伤性、抑制性、辅助性T细胞、早期活化T细胞和B细胞表达水平经Spearman等级相关分析结果显示，CD4+表达与MDA和ROS表达水平呈负相关，与SOD表达水平呈正相关;早期活化T细胞表达与MDA和ROS表达水平呈正相关，与SOD表达水平呈负相关(见表4)。

表4 前列地尔组氧化应激与免疫功能指标表达的相关性(r值)

3 讨论

DN患者红细胞免疫功能低下可能与患者红细胞免疫黏附调节系统失调等密切相关，不仅发生红细胞免疫黏附功能的下降，而且还发生血管壁上循环免疫复合物的堆积，参与了血管壁与周围组织结合的损伤过程〔2〕。因此传统针对糖脂代谢紊乱、血流动力学方面的治疗无法阻断氧化应激途径和提高自身免疫功能。Schrier〔3〕提出氧化应激反应增强对机体将造成巨大的损害，将大大加速DN病程进展。前列地尔由花生四烯酸转化而来，具有广泛的药理作用，对肺、心、肾及全身的动脉、静脉都有扩张作用，同时具有抑制血小板聚集有作用，认为其在保护肾功能、减少尿蛋白中具有重要的作用〔4〕。

本研究发现前列地尔组患者UAER、mALB和β2-MG表达水平均明显下降，FPG、HbA1c、TC、TG、Scr和 BUN 表达水平变化不大。这与文献报道相一致。本研究中的UAER、mALB和β2-MG作为前列地尔疗效的直观评价指标，UAER、mALB和β2-MG表达水平在治疗后明显下降表明前列地尔可改善微循环，进而减缓肾小球系膜细胞和系膜基质的增生，保肾脏和肾功能，与相关研究一致〔5〕。DN患者肾组织中活性氧浓度升高，过量的ROS增加肾脏负担，进而引起机体氧化应激反应〔6〕。SOD作为一种自由基清除剂，可作为一种间接反映机体氧自由基的指标〔7〕;MDA作为一种脂质过氧化物，可作为一种直接反映机体过氧化强度的指标〔8〕;ROS由线粒体产生，正常肾脏产生的少量ROS不会引起机体损伤，过量的ROS不仅调节了肾髓质血流的变化，还引起肾脏的进一步氧化损伤〔9〕。因此，本研究通过检测上述3项指标，以综合评估机体氧化应激情况。本研究显示与对照组比较，治疗后前列地尔组患者MDA和ROS水平明显下降，SOD水平明显上升。分析认为前列地尔通过激活细胞内腺苷酸环化酶致使局部血管扩张，改善了局部血流动力，降低了ROS的释放，阻断过氧化反应，进而起到保护肾脏组织细胞不进一步受到氧化应激引起的损伤〔10〕。

CD4+是具有增强免疫反应的作用，CD8+具有免疫抑制作用，CD4+/CD8+比值是反映免疫调节的指标〔11〕。本研究显示与对照组比较，治疗后前列地尔组患者CD4+和CD4+/CD8+水平明显上升，早期活化T细胞和总淋巴细胞水平明显下降，CD4+表达与MDA和ROS表达水平呈负相关，与SOD表达水平呈正相关;早期活化T细胞表达与MDA和ROS表达水平呈正相关，与SOD表达水平呈负相关。由上述结果推测，免疫细胞处于氧化和抗氧化平衡中而维持细胞正常功能，使得各种免疫细胞产生适度的免疫应答，而又不损伤机体组织。DN患者体内ROS增多，过多的ROS将削弱免疫细胞有丝分裂不应答，致使免疫细胞增殖降低，由此推断氧化应激可能影响机体的细胞免疫功能〔11〕。

综上所述，DN 患者血清 UAER、mALB、β2-MG、MDA、ROS、早期活化T细胞、总淋巴细胞、SOD、CD4+和CD4+/CD8+水平，可以作为观察DN病情变化和预后的重要指标，针对DN患者的治疗前列地尔可通过降低患者氧化应激状态和增强免疫功能等作用延缓慢性肾脏病的发生、发展，间接地起到改善肾功能的作用，为进一步研究及寻找能全面干预和调节2型糖尿病患者代谢通路的药物提供了新的方向。由此认为针对氧化应激和免疫功能可能是治疗DN的方向之一。

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R589

A

1005-9202(2015)09-2419-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.049

王俊宏(1967-)，男，主任医师，硕士生导师，主要从事糖尿病及其急性性并发症的防治研究。

田 勇(1980-)，男，主治医师，主要从事糖尿病及其并发症研究。

〔2013-09-17修回〕

(编辑 曹梦园)