西双版纳州“321”免疫新技术与传统免疫抗体水平的比较

黄崇元，白春兰，朱畅荣，李德荣

(西双版纳州动物疫病预防控制中心，云南 景洪 666100)

按照国家规定生猪必须进行猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病的强制免疫。传统免疫采取先进行猪口蹄疫、猪瘟两种疫苗的免疫，15～30d后再进行高致病性猪蓝耳病的免疫。这种免疫方法工作量大，免疫间隔时间短，养殖户难以接受，免疫次数多，免疫反应及反应死亡增加，高致病性猪蓝耳病推迟免疫，会出现免疫空白，发生高致病性猪蓝耳病的风险增加。“321”免疫(三种疫苗、两点注射、一次完成)是将猪瘟活疫苗用稀释液稀释后再与等量的高致病性猪蓝耳病活疫苗混合(或高致病性猪蓝耳病活疫苗用稀释液稀释后再与等量的猪瘟活疫苗混合)，注射到猪耳后颈部一侧，另一侧注射口蹄疫疫苗的一种免疫方法。这种免疫新技术能否推广，关键看3种病的免疫抗体水平能否达到国家规定的群体保护标准，免疫保护力能否全程保护。本研究采用不同免疫方法后的猪，进行连续3次抗体监测，通过比较分析，得出“321”免疫新技术在西双版纳州高温、高湿条件下是可行的，现将情况报道如下。

1 实验设计

1.1 实验地点

景洪市勐养镇曼景坎村曼满小组、勐海县勐海镇茶场副业队、西双版纳州种猪场。

1.2 监测时限

2013年9—12月。

1.3 实验材料

(1)猪用活疫苗专用稀释液，云南生物制药有限公司生产，生产批号:20130206;生产日期:20130206;有效期至:20150205。

(2)猪口蹄疫O型合成肽疫苗，申联生物医药(上海)有限公司生产，批准文号:兽药生字(2009)090297056;批号:20130106;生产日期:20130115;有效期至:20140114。

(3)猪瘟活疫苗(脾淋源)，云南生物制药有限公司生产，批准文号:兽药生字(2011)250061001;生产批号:2013011;生产日期:130129;有效期至:140128。

(4)高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(HuN4-F12株)，上海海利生物技术股份有限公司生产，批准文号:兽药生字(2011)09001C74;生产批号:20130110;有效期至:20140721。

(5)口蹄疫抗体检测试剂盒，韩国金诺生产，批号10745456;有效期至:20140527。

(6)猪瘟病毒抗体竞争EL ISA检测试剂盒，北京金诺百特科技有限公司生产，生产批号:107HS469。

(7)高致病性猪蓝耳病检测试剂盒，北京天元泰生物科技有限公司生产，批号:2-VETPRA-035;有效期至:201407。

(8)试验需要准备注射器、针头、冷藏包、真空采血管、采血针、酒精棉球、干棉球、保定绳、试验记录本等。

(9)试验动物为45～60日龄末免疫过口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病的健康仔猪。

1.4 实验方法

(1)选择景洪市勐养镇曼景坎村曼满小组8户农户饲养的符合要求并经“321”免疫的仔猪25头;选择勐海县勐海镇茶场副业队4户村民饲养的符合要求并经“321”免疫的仔猪15头;选择州种猪场饲养的未免疫过3种疫苗且符合要求的仔猪20头，随机进行分组，传统免疫10头，“321”免疫10头。

(2)“321”免疫用稀释液稀释猪瘟疫苗(或高致病性猪蓝耳病疫苗)，再稀释等量高致病性猪蓝耳病疫苗(或猪瘟疫苗)。一侧注射混合疫苗，另一侧注射口蹄疫疫苗，传统免疫先进行猪瘟和口蹄疫的免疫，20d后再进行高致病性猪蓝耳病的免疫。

(3)先将疫苗恢复至常温后稀释，大猪使用12×25号针头、小猪使用12×20号针头，保证深部肌肉注射;注射部位在仔猪耳后3～5cm的颈部两侧肌肉进行。

(4)免疫后20d、40d、60d采血，分离血清进行免疫抗体水平测定。

(5)大猪采用耳静脉采血法，小猪采用前腔静脉采血法。无菌采血5～10mL，可自然析出血清或离心分离血清，血清冷冻保存。

(6)按照检测试剂盒的说明进行监测，只做定性结果分析。

2 监测结果

2.1 猪口蹄疫免疫抗体监测结果

采用“321”免疫新技术共监测50头，连续3次的监测结果(免疫后20d、40d、60d)，免疫合格数和免疫抗体群体合格率为44头、88%;47头、94%;47头、94%。采用传统免疫法共监测10头，免疫合格数和群体免疫合格率为8头、80%;9头、90%;9头、90%。

2.2 猪瘟免疫抗体监测结果

采用“321”免疫新技术共监测50头，连续3次的监测结果(免疫后20d、40d、60d)，免疫合格数和免疫抗体群体合格率为42头、84%;43头、86%;45头、90%。采用传统免疫法共监测10头，免疫合格数和群体免疫合格率为8头、80%;9头、90%;9头、90%。

2.3 高致病性猪蓝耳病免疫抗体监测结果

采用“321”免疫新技术共监测50头，连续3次的监测结果(免疫后20d、40d、60d)，免疫合格数和免疫抗体群体合格率为42头、84%;42头、84%;43头、86%。采用传统免疫法共监测10头，免疫合格数和群体免疫合格率为0头、0;8头、80%;8头、80%。

(1)对景洪市、勐海县共12户农户饲养的40头猪，采取先由基层兽医站人员按照“321”免疫新技术规范进行免疫，项目人员到达现场后，根据猪的大小随机选择监测对象，使得实验数据更加真实、客观。在州种猪场对在同等饲养条件下20头仔猪进行分组，“321”免疫新技术进行免疫和传统免疫方法各10头。实验猪群在免疫后20d、40d、60d进行连续3次的免疫抗体水平监测。结果表明:采用“321”免疫新技术猪口蹄疫、猪瘟、高致病性猪蓝耳病的免疫抗体水平，在免疫后20～60d内达到国家规定的群体免疫合格标准，说明方法是可行的。

(2)进行“321”免疫新技术与传统免疫方法的比较，在同等条件下两种方法无明显的差异，但传统免疫法有1个月左右的高致病性猪蓝耳病免疫空白，有较大的发病风险。

(3)本次实验主要考虑“321”免疫新技术与传统免疫技术在群体免疫保护率与免疫保护力持续时间上，采取对同一群体的猪群进行连续3次的免疫抗体监测方法，劳动强度大，资金投入多，因单位财力有限，监测的群体数量可能不够。为此，引入开展实施“321”免疫前2011年，与开展“321”免疫新技术后的2012年、2013年数据进行比较分析，结果为2011年猪口蹄疫免疫抗体监测 1426头，合格 848头，合格率59.5%;猪瘟免疫抗体监测1426头，合格1030头，合格率72.2%;高致病性猪蓝耳病免疫抗体监测184头，合格105头，合格率57.1%。2012年口蹄疫免疫抗体监测1614头，合格1177头，合格率72.9%;猪瘟免疫抗体监测1664头，合格1194头，合格率71.8%;高致病性猪蓝耳病免疫抗体监测438头，合格351头，合格率80.1%。2013年猪口蹄疫免疫抗体监测2344头，合格1828头，合格率78%;猪瘟免疫抗体监测2400头，合格1776头，合格率74%;高致病性猪蓝耳病免疫抗体监测2400头，合格1940头，合格率80.8%。虽然2011年用高致病性猪蓝耳病灭活疫苗，无法进行对比，但监测数据依然表明，“321”免疫新技术是可行的。

(4)免疫次数减少，防疫工作量和劳动强度降低是显而易见的，同时向基层防疫人员和广大养殖户进行了解，反映“321”免疫新技术是一项可行的免疫新技术。

3 结论与建议

(1)从免疫抗体监测数据来看，采用“321”免疫新技术与传统免疫方法，3种强制免疫病种的免疫抗体水平均达到国家规定的群体免疫合格标准，同时连续3次的免疫抗体监测说明，采用“321”新技术在免疫后20～60d具有坚强保护力，能保证一次免疫就可出栏。因此，“321”免疫新技术在西双版纳州高温、高湿条件下是可行的，可大力推广。

(2)调查了解时发现基层防疫人员在进行猪瘟、高致病性猪蓝耳病疫苗的等量稀释时，会存在一定的差异，可能会对免疫效果造成一定的影响。建议高等院校、科研机构、疫苗生产企业增加投入，进行更加深入的研究，生产猪瘟、高致病性猪蓝耳病二联疫苗，使整个操作更加科学规范。