HPLC法测定咽炎含片中橙皮苷的含量

朱建明

甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050

咽炎含片由金银花、菊花、陈皮等12味中药组成，具有解毒、消炎、止痛等功效［1］。陈皮为其主要化痰药物，为了控制其化痰作用，笔者采用HPLC对陈皮中的主要成分橙皮苷进行含量测定。现将结果报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-9A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；641旋转蒸发仪(瑞士BüCHI公司)；HS-6150D超声波清洗仪(上海珂淮仪器有限公司)；SK-M2サンプルミル粉碎器（日本松下公司）；AE-260 AE-240电子天平（瑞士科恩公司）；HHS21-8电热恒温水浴锅（上海科升公司)；CS101-30型电热鼓风干燥箱（重庆四达试验设备有限公司），TGL-16G高速台式离心机（上海沪粤明科学仪器有限公司）。

1.2 试药 咽炎含片(四川华星药业有限公司)，橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：721-9102)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，并经0.45μm滤膜过滤，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 方法［2-4］

2.1.1 色谱条件 色谱柱：Shim-pack C18(150mm×6.0 mm，5μm)；流动相：甲醇 -0.1%磷酸水溶液(40∶60)；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL；检测波长：283 nm；柱温：30℃。

2.1.2 对照品溶液的制备 取橙皮苷化学对照品适量，精密称定。用甲醇定容于25mL容量瓶中，制成177μg/mL的对照品溶液备用。

2.1.3 供试品溶液的制备 取咽炎含片，研细，混匀，取粉末约1.0 g，精密称定，加甲醇15mL，回流40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并定容到25mL容量瓶中，作为供试品溶液。

2.1.4 阴性溶液的制备 在去除陈皮的条件下，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2 结果

2.2.1 线性关系考察 取橙皮苷对照品约4.44 mg，精密称定，用甲醇定容到25 mL容量瓶中，超声使其充分溶解，作为贮备液。精密吸取对照品储备液0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、2.0 mL，置 10 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，按“2.1”项色谱条件操作，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，处理得到直线回归方程：Y=6 999.6X+1 921.6，r=0.999 9，线性范围为 14.21～35.52μg/mL。

2.2.2 精密度实验 精密吸取橙皮苷对照品溶液，连续进样5次，5μL/次，以“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图，峰面积的RSD=0.44%。

2.2.3 专属性实验 分别取对照品溶液、样品溶液、阴性对照品溶液，按“2.1”项色谱条件操作，记录色谱图。结果供试品与对照品溶液均在相同保留时间出现吸收峰，空白溶液在此处无吸收峰。见图1。

图1 咽炎含片中橙皮苷专属性考察

2.2.4 重现性实验 取同批咽炎含片，研细、混匀，取粉末6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，测定，记录色谱图，其RSD为0.42%，表明方法重现性良好。

2.2.5 回收率实验 采用加样回收法，取已知含量的同批咽炎含片，研细，混匀，取粉末适量，精密称定，精密加入17.76μg/mL的橙皮苷对照品溶液 1、2、3mL，每个比例制备 3份样品。按“2.1”项下相应方法制备供试品溶液，测定，记录色谱图，计算回收率，平均方法回收率分别为99.75%、RSD为1.13%，符合相关规定。结果见表1。

2.2.6 样品测定 取10批咽炎含片，研细，混匀，取粉末适量，精密称定，按“2.1”项方法制备供试品溶液，测定，计算十批样品中橙皮苷的平均含量为5.99 mg/g，RSD=1.72%。结果见表2。

表1 咽炎含片中橙皮苷的回收率测定(n=3)

表2 咽炎含片中橙皮苷的含量测定(n=3)

3 讨论

HPLC是一种常用的分离分析色谱，较普通的液相色谱有以下优点：速度快、灵敏度高、分辨率高、柱子可反复使用［5-8］。本实验通过对HPLC色谱条件的考察，得到橙皮苷色谱条件及标准曲线，通过测定样品中橙皮苷的含量，可得到咽炎含片的质量控制标准。该方法简单、快速、重现性好，适应性广泛，具有良好的实用价值。

［1］ 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂［M］.北京：人民卫生出版社，1998：130.

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