HPLC-ELSD法测定泽兰中齐墩果酸和熊果酸的含量

廖 壹

陇南市食品药品检验检测中心，甘肃 陇南 746000

泽兰为唇形科植物地笋(地瓜儿苗)Lycopus lucidus Turcz.var.hirtus Regel的干燥地上部分[1]。具有活血化瘀，行水消肿的功效，主要用于月经不调，经闭，痛经，产后瘀血腹痛，水肿等。齐墩果酸与熊果酸均属于五环三萜类化合物，是同分异构体[2]。经现代药理学研究证实，齐墩果酸具有护肝降酶、抗炎、强心利尿、抗肿瘤的功效[3]。熊果酸具有化学预防、抗肿瘤活性、保肝、抗菌抗病毒、增强免疫等功效[4]。文献报道用薄层扫描法测定泽兰中齐墩果酸的含量[5]，杨学猛[6]等用HPLC法证实泽兰中确有熊果酸的存在，黄宏伟用反相高效液相法测得了泽兰中乌索酸和齐墩果酸的含量[7]，赵宇新等用HPLC-ELSD法测得了木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量[8]，但文献中迄今没有采用高效液相色谱法（HPLC）-蒸发光射检测器（ELSD）同时测定泽兰中齐墩果酸和熊果酸含量的报道。本实验采用HPLC-ELSD同时测定了泽兰中齐墩果酸和熊果酸的含量，结果表明该方法灵敏、准确、重现性好，可为泽兰的质量控制提供可选择性的技术方法。

1 仪器与试药

图1 对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的HPLC图

1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪 [沃特世科技（上海）有限公司],2420型蒸发光射检测器[沃特世科技（上海）有限公司]；Empower色谱工作站[沃特世科技（上海）有限公司]；分析天平（Met t ler AE-163）[梅特勒-托利多(上海)有限公司]。

1.2 药品 齐墩果酸与熊果酸对照品（均购自中国生物制品检定所，批号分别为110709-200304，110742-200516），甲醇（色谱纯，山东禹王试剂公司，批号20140121173），冰醋酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号20140115)。泽兰均购自兰州黄河药材市场，经甘肃省药品检验研究院宋平顺主任药师鉴定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Hpersi l ODS柱(4.6 mm×250 mm，5μm)；流动相：甲醇 -0.5%冰醋酸(88∶12)，流速：1.0mL/min；柱温：40℃；蒸发光散射检测器漂移管温度：90℃；气体压力：30psi；喷雾器级别：85%。氮气(99.999%)。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取齐墩果酸5.7mg和熊果酸4.7mg对照品，加甲醇定容至10mL，再分别吸取齐墩果酸对照品1mL，熊果酸对照品2mL，定容至5mL，使每1mL含齐墩果酸0.114mg，熊果酸0.188mg。对照品色谱图见图1。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品适量，粉碎，精密称取1 g，置索氏提取器中，提取6小时，过滤，蒸干，残渣加甲醇定容至10mL。

2.3 标准曲线的绘制 取混合对照品溶液，精密吸 5、10、20、30、40、50、60μL进样，测定峰面积，以进样量的自然对数数值(X)为横坐标，峰面积积分值的自然对数值(Y)为纵坐标，进行线性回归。

熊果酸线性方程为：Y=0.850 4X-4.427 9，r=0.997 7。

齐墩果酸线性方程为：Y=1.318 0X-6.951 4，r=0.996 9。

结果熊果酸和齐墩果酸线分别在0.94～11.28μg、0.57～6.84μg的范围内线性关系良好。

2.4 精密度实验 精密吸取同一样品溶液10μL，重复进样6次，测得熊果酸峰面积的RSD为1.90%，齐墩果酸峰面积的RSD为1.78%。

2.5 重现性实验 精密吸取同一样品溶液6份，

分别进样10μL，测得熊果酸峰面积的RSD为2.01%，齐墩果酸的RSD为1.89%。

2.6 稳定性实验 精密吸取同一样品溶液10μL，分别在 0、2、4、6、8小时进样 10μL，测得样品在 8小时内稳定性良好，熊果酸峰面积RSD为2.33%，齐墩果酸峰面积RSD为2.62%。

2.7 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批泽兰样品 (齐墩果酸0.16%，熊果酸0.30%)0.5 g，共6份，分别精密加入齐墩果酸对照品溶液 (0.401 2 mg/mL)2 mL，熊果酸对照品溶液(0.418 1mg/mL)3.6mL，按“2.1”项色谱条件下测定供试品溶液含量，结果见表1。

表1 加样回收率实验

2.8 样品测定 取5批药材样品，按“2.2”项下操作制备供试液，准确吸取供试液10μL，进样，在“2.1”项色谱条件下测定，结果见表2。

表2 泽兰中齐墩果酸与熊果酸的含量

3 讨论

本实验采用甲醇-0.5%冰醋酸为流动相，88∶12时分离效果较好。以Diamonsi l C18柱，采用不同的流动相：甲醇∶水，甲醇∶水∶醋酸∶三乙胺，甲醇∶醋酸，分离效果都不是很好。改用hypersi l ODS柱，分离效果好，可是噪音较大，因此本实验将漂移管温度设为90℃，柱温调为40℃，气压设为30 psi，分离效果很好。对泽兰进行了超声和索氏提取的工艺比较，通过HPLC测定含量发现，索氏提取率较超声提取好，所以本实验采用索氏提取法。本实验建立了用HPLC-ELSD同时测定泽兰中齐墩果酸与熊果酸含量的方法，为泽兰的质量控制提供了一种新的方法，该方法简单、准确、重现性好，可用来全面评价泽兰的质量。

[1] 国家药典委员会.中国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010:212.

[2] 昌盛,李龙.齐墩果酸药理作用研究进展[J].广州化工,2011,39(14):30-32.

[3] 胡华杰.齐墩果酸药理作用与临床应用研究进展[J].海峡药学,2012,24(3):92-94.

[4] 王婷,宋怀燕.熊果酸药理作用研究进展[J].中华医学研究杂志,2005,9(5):1-8.

[5] 何锦钧,李子鸿.泽兰中齐墩果酸的含量测定[J].中药材,2000,23(8):466.

[6] 杨学猛,徐风梅.HPLC法测定泽兰中熊果酸、齐墩果酸的含量[J].中草药,2003,34(10):11.

[7] 黄宏伟,邹盛勤.反相高效液相色谱法测定泽兰中乌索酸和齐墩果酸的含量[J].安徽农业科学,2007,35(15):4409.

[8] 赵宇新,李曼玲.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中药及制剂中齐墩果酸和熊果酸的含量[J].药物分析杂志,2004,24(2):167-170.