高效液相色谱法测定辛芩片中黄芩苷含量

李沉纹，程 猷，胡大强，向明凤，徐 靖，宋宏宇，刘 冰，卢来春

（中国人民解放军第三军医大学第三附属医院·野战外科研究所药剂科，重庆 400042）

高效液相色谱法测定辛芩片中黄芩苷含量

李沉纹，程 猷，胡大强，向明凤，徐 靖，宋宏宇，刘 冰，卢来春

（中国人民解放军第三军医大学第三附属医院·野战外科研究所药剂科，重庆 400042）

目的建立测定辛芩片中黄芩苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为Diamonsil C18柱（250 mm×4．6 nm，5 m），流动相为甲醇-0．1%磷酸水-三乙胺（57∶43∶0．1），检测波长为280 nm。结果 黄芩苷质量浓度在1．971～19．71 mg／L范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0．999 9，平均加样回收率为103．01%，RSD=1．84%（n=9）。结论该方法简便、专属、重复性好，可有效控制辛芩片的质量。

辛芩片；高效液相色谱法；黄芩苷；质量标准

过敏性鼻炎（AR）是由特应性个体接触变应原，激发IgE介导的介质释放而引起的鼻黏膜Ⅰ型变态反应性疾病，西医主要采用抗组胺药物、糖皮质激素、减轻充血药物、色甘酸钠等药物以及特异性免疫脱敏等疗法，但存在复发率高、根治困难、不良反应较大的问题。中医多在补益肺气、固表护卫、温肺散寒、益气健脾、温运中阳的原则指导下，以补中益气汤、玉屏风散、温肺止流丹等方药为主加减治疗[1]，具有一定的优势。目前，治疗过敏性鼻炎的中药复方制剂包括辛芩片、玉屏风散、芳香通窍丸等[2-3]。辛芩片是最常用、有效的药物[4]，由黄芩、细辛、辛夷、防风等数味中药研制而成。为控制该药的质量，现对其主药黄芩中黄芩苷的含量测定方法进行了研究，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200系列高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ-500E型医用超声波清洗器；BT25S型电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；ULUP-III-10T型触摸屏高端超纯水器（成都优普电子产品有限公司）。黄芩苷对照品（批号为110715-201318，中国食品药品检定研究院）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。辛芩片（四川志远广和制药有限公司，批号为140702）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4．6 nm，5 μm）；流动相：甲醇-0．1%磷酸水-三乙胺（57∶43∶0．1）；柱温：30℃；检测波长：280 nm；流速：1 mL／min；进样量：10 μL。

2．2 溶液配制

称取黄芩苷对照品10．23 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，静置，即得质量浓度为0．102 3 g／L的对照品溶液。取辛芩片10片，研细，称取0．5 g，精密称定，加50%甲醇40 mL，超声处理20 min，加50%甲醇定容于50 mL容量瓶中，摇匀，静置，即得供试品溶液。按辛芩片处方比例取缺黄芩的方中其他药材制成溶液，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：分别取2．2项下3种溶液及提取溶剂各10 μL，按2．1项下色谱条件进样，记录色谱图。结果显示，供试品溶液色谱中黄芩苷与其他杂质色谱分离度良好，阴性对照品溶液色谱在黄芩苷色谱峰相应位置处无干扰（见图1）。因此，黄芩苷含量作为指标，可很好地控制该制剂的质量。

线性关系考察：称取黄芩苷对照品19．71 mg，精密称定，用甲醇定容于100 mL容量瓶中，超声1 mim，使其完全溶解，再用甲醇补齐至刻度，摇匀，静置，即得质量浓度为0．197 1 g／L的溶液，精密吸取，置10 mL容量瓶中，配制成6个不同梯度的对照品溶液（质量浓度分别为0．019 71，0．015 768，0．009 855，0．007 884，0．005 913，0．003 942，0．001 971 g／L），按2．1项下色谱条件进样分析。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标（g／L）进行线性回归，得回归方程 Y=317 756．832 17 X-19．569 66，r=0．999 9（n=7）。结果表明，黄芩苷质量浓度在1．971～19．71 mg／L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

进样量精密度试验：取同一对照品溶液，在2．1项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果的 RSD=0．09%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同批样品，依法配制供试品溶液6份并测定黄芩苷的含量。结果的 RSD小于0．52%（n=6），表明方法重复性良好。

日内、日间精密度试验：取同一对照品溶液适量，分别于同日内3个时间点以及3 d内测定。结果日内精密度的 RSD=0．5%（n=6），日间精密度的 RSD=1．2%（n=6）。

加样回收试验：取已知含量的样品，精密称定，置100 mL容量瓶中，平行3份，分别精密加入黄芩苷对照品（0．102 3 g／L）3 mL，用50%甲醇定容，按供试品溶液制备方法，制备待测溶液，按2．1项下色谱条件进样测定黄芩苷含量，计算回收率。结果见表1。

图1 辛芩片高效液相色谱图

表1 黄芩苷加样回收试验结果（n=9）

定量限确定：将黄芩苷对照品溶液进行稀释，以信噪比约为10∶1确定其定量限。结果黄芩苷的定量限为2．98 ng。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，8，12 h时依法进样分析，以黄芩苷峰面积计算。结果的 RSD为 0．75%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2．4 样品含量测定

分别取3批样品，依法制备供试品溶液，按2．1项下色谱条件进样分析。结果见表2。

表2 辛芩片中黄芩苷的含量测定结果（n=3，g／g）

3 讨论

现代药理学研究表明，辛芩片能明显缓解鼻部症状以及鼻黏膜病理改变，抑制组胺所致的鼻黏膜毛细血管通透性增加，显著降低鼻超敏感应模型中鼻黏膜组胺的含量并抑制一氧化氮合酶（NOS）的活性[4]。辛芩片样品成分复杂，其中黄芩为君药，对其疗效起重要作用。黄芩是唇形科植物黄芩的干燥根，药性苦寒，具有清热燥湿、安胎、泻火解毒、止血等功效[5]。黄芩所含黄酮类成分包括黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、野黄芩苷等，均是其主要药效成分[6]。黄芩苷等黄酮类成分具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗过敏、保护心血管系统及保肝等作用[7-8]。

目前，黄芩苷的质量控制方法主要为高效液相色谱-紫外检测法、近红外漫反射光谱法及液质联用法等[9-11]，而采用高效液相色谱法不经分离，直接测定其中黄芩苷的含量，方法简便快速，结果可靠。本试验中采用高效液相色谱-紫外检测法对辛芩片中黄芩苷进行了定量测定，该方法前处理条件简单、快速，测定结果准确可靠，重复性好，实用性强。因此，以黄芩苷为定量监控指标，可有效控制辛芩片的质量。

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[4]曾旭东，何源萍，严福波，等．Nd：YAG激光联合辛芩片治疗变应性鼻炎的疗效观察[J]．中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，2010，18（2）：82-83．

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[10]王德宽，皮德艳，潘鹏飞．高效液相色谱法同时测定消炎片中黄芩苷与黄芩素含量[J]．中国药业，2012，21（8）：48-49．

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Determination of Baicalin Content in Xinqin Tablet by HPLC

Li Chenwen，Cheng You，Hu Daqiang，Xiang Mingfeng，Xu Jing，Song Hongyu，Liu Bing，Lu Laichun
（Department of Pharmacy，Third Affiliated Hospital，Research Institute of Surgery，Third Military Medical University，Chongqing，China 400042）

Objective To establish a high performance liquid chromatography(HPLC)method for the determination of the baicalin content in Xinqin Tablet．M ethods The Diamonsil C18column（250 mm×4．6 nm，5 μm）was used．The mobile phase was methanol-0．1% phosphoric acid-triethylamine（57∶43∶0．1）．The detection wavelength was 280 nm．Results The linear range of baicalin was 1．971-19．71 mg／L（r=0．999 9）．Theaverage recovery rate was 103．01%，RSD=1．84%（n=9）．Conclusion Theestablished method is simple，specific and better repeatable，which can effectively control the quality of Xinqin Tablet．

Xinqin Tablet；HPLC；baicalin；quality standards

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2015)04－0041－02

李沉纹（1987-），女，重庆人，硕士研究生，药师，研究方向为药物新剂型，（电话）023-68898867（电子信箱）lichenwen87＠163．com；卢来春（1973-），男，山东人，博士研究生，副主任药师，研究方向为创新药物研究，本文通讯作者，（电话）023-68757092（电子信箱）lulaicq＠163．com。

2014－09－13；

2014－11－13)

重庆市卫生局中医药科技项目，项目编号：2012-2-22。