高效液相色谱法测定糖维胶囊中盐酸小檗碱含量

赵严丽，魏燕珍

（1．广东省河源市食品药品检验所，广东 河源 517000； 2．广东医学院，广东 东莞 523808）

高效液相色谱法测定糖维胶囊中盐酸小檗碱含量

赵严丽1，魏燕珍2

（1．广东省河源市食品药品检验所，广东 河源 517000； 2．广东医学院，广东 东莞 523808）

目的 建立测定糖维胶囊中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Inertsil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流动相为0．05%磷酸二氢钾溶液（每100 mL加十二烷基硫酸钠0．4 g，以磷酸调节pH至4．0）-乙腈（52∶48），检测波长为265 nm。结果 盐酸小檗碱进样量在0．069 73～0．129 5 g范围内与峰面积线性关系良好（r=0．999 9），平均加样回收率为101．14%，RSD=0．59%（n=6）。结论 该方法简便、准确、专属性强，可作为糖维胶囊控制原药材和成品质量的方法。

糖维胶囊；高效液相色谱法；盐酸小檗碱

糖维胶囊[1]由黄连、天花粉、黄精、黄芪、丹参、葛根、西洋参、格列本脲组方，具有益气养阴、化瘀清热的功效，用于气阴两虚夹瘀所致消渴。处方中黄连具有清热燥湿、泻火解毒作用，其有效成分为盐酸小檗碱，对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、伤寒杆菌及阿米巴原虫有抑制作用，临床主要用于肠道感染及菌痢等的治疗。本研究中建立了测定盐酸小檗碱含量的高效液相色谱（HPLC）法，现报道如下。

1 仪器与试药

LC-2010 A型高效液相色谱仪，UV-1601型紫外分光光度计(日本岛津)；Mettler AG-135型电子分析天平（准确度为0．01 mg）；KQ250DA型超声清洗器。盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号为 110713-201212，供含量测定用，含量为86．7%）；糖维胶囊（河北世济唐威药业有限公司，批号分别为C01118，C011256，C012112，规格为每粒 0．5 g)；乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为分析纯，水为超纯水，十二烷基硫酸钠（广州化学试剂厂）为化学试剂。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Inertsil C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：0．05%磷酸二氢钾溶液（每100 mL加十二烷基硫酸钠0．4 g，再以磷酸调节pH至4．0）-乙腈（52∶48）；测定波长：265 nm；柱温：30℃；流速：1．0 mL／min；进样量：10 μL。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。在此条件下，色谱图见图1。

2．2 溶液制备

称取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度为0．099 62 g／L的对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成质量浓度为9．962 μg／mL的对照品溶液。取装量差异项下的样品内容物约0．5 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入盐酸-甲醇（1∶100）适量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再用盐酸-甲醇（1∶100）加至刻度，摇匀，再用移液管精密移取3 mL，置100 mL容量瓶，用盐酸 -甲醇（1∶100）加至刻度，即得供试品溶液。取处方中除黄连外的其余药材，按处方量依法制成细粉，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取2．2项下3种溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。可见，供试品溶液色谱中，在与盐酸小檗碱对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液无干扰。

线性关系考察：分别精密吸取质量浓度为9．962 μg／mL的对照品溶液7，8，9，10，11，12，13 μL，注入高效液相色谱仪，测量峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=4．9E+6 X+4 635．5，r=0．999 9（n=7）。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0．069 73～0．129 5 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液（9．962 μg／mL）10 μL，重复进样6次。结果的 RSD为0．22%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温下放置，于0，4，8，12，18，24 h时分别进样测定。结果的 RSD为0．39%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验：取样品（批号为C01118）6份，每份约0．5 g，依法制备供试品溶液并进样测定。结果盐酸小檗碱含量为26．15 mg／g，RSD为0．56%（n=6），表明方法重复性较好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品（批号为 C01118，盐酸小檗碱含量为26．15 mg／g，平均粒重为每粒0．524 0 g）0．26 g，共6份，分别置50 mL容量瓶中，加入盐酸-甲醇（1∶100）适量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再用盐酸-甲醇（1∶100）加至刻度，摇匀，再用移液管精密移取3 mL，置100 mL容量瓶，再另取对照品贮备液（0．099 62 g／L），精密量取4，5，6 mL各2份，分别加入上述100 mL样品瓶中，用盐酸-甲醇（1∶100）加至刻度，摇匀，即得供试品溶液，依法进样测定，并计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果（n=6）

2．4 样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定3批样品的盐酸小檗碱峰面积，按外标法计算含量。结果批号为C01118，C011256，C012112的 3批样品，平均粒重分别为 0．522 9，0．529 4，0．525 0 g，平均含量分别为每粒13．673 8，13．622 7，13．757 5 mg。

3 讨论

制备供试品溶液时，曾选用超声、振摇、水浴等方法[2-3]，比较了水浴和超声时间，结果以盐酸-甲醇（1∶100）混合溶液超声处理30 min的方法，提取完全，含量较稳定。用紫外分光光度计对对照品溶液在200～400 nm波长范围进行扫描，结果在265 nm波长处具有最大吸收，故选择265 nm作为测定波长。试验中比较了2种不同比例的流动相[2-3]，即乙腈 -0．2%磷酸溶液（30∶70）和乙腈-0．2%磷酸溶液（48∶52），结果用乙腈-0．2%磷酸溶液（48∶52）作为流动相时，色谱图基线较稳，样品中盐酸小檗碱与其他杂质峰能够完全分离，盐酸小檗碱的理论板数大于4 000。因此，该方法准确、简便，稳定性、重复性及回收率均较好，可作为该制剂的质量控制方法。

[1]WS-624（Z-107）-2005（Z）-2007，国家药品标准[S]．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：1 042．

[3]叶建晨．高效液相色谱法同时测定芩连胶囊中黄芩苷及盐酸小檗碱的含量[J]．中国药业，2013，22（6）：61-63．

Content Determination of Berberine Hydrochloride in Tangwei Capsules by HPLC

Zhao Yanli1，Wei Yanzhen2
（1．Heyuan Municipal Institute for Food and Drug Control，Heyuan，Guangdong，China 517000； 2．Guangdong Medical College，Donguan，Guangdong，China 523808）

Objective To establish a high performance liquid chromatography(HPLC)method for the content determination of berberine hydrochloride in Tangwei Capsules．M ethods The Inertsil C18column（250 mm×4．6 mm，5 μm）was used．The mobile phase was 0．05% potassium dihydrogen phosphate（adding sodium dodecyl sulfate 0．4 g per 100 mL and then adjusting pH to 4．0 by phosphoric acid）-acetonitrile（52∶48）．The detection wavelength was 265 nm．Results Berberine hydrochloride showed good linearity within the range of 0．069 73-0．129 5 μg（r=0．999 9）．The average recovery rate was 101．14%，RSD=0．59%（n=6）．Conclusion The established method is simple and accurate with good specificity,which can be used as the quality control method of the raw materials and finished products of Tangwei Capsules．

Tangwei Capsules；HPLC；berberine hydrochloride

赵严丽（1978-），女，主管药师，主要从事中药分析检验工作，（电话）0762-3220319（电子信箱）zhao-yanli＠163．com。

2014－06－24)

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2015)04－0045－02