苦豆子不同提取部位抗HepG2活性的研究

文 / 蒲秀瑛，刘 璐，马小龙，任菁， 李晓玥， 李海兵

(兰州理工大学 生命科学与工程学院 甘肃省中藏药筛选评价及深加工重点实验室，甘肃 兰州 730050）

苦豆子不同提取部位抗HepG2活性的研究

文 / 蒲秀瑛*，刘 璐2，马小龙3，任菁4， 李晓玥5， 李海兵6

(兰州理工大学 生命科学与工程学院 甘肃省中藏药筛选评价及深加工重点实验室，甘肃 兰州 730050）

研究苦豆子不同提取部位对肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法：根据溶剂极性的大小对苦豆子进行提取，以细胞存活率和IC50为指标，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测苦豆子不同提取部位体外对肝癌细胞HepG2的抑制作用。结果：苦豆子的乙醇部位和正丁醇部位在实验浓度范围（0.125-1mg/mL）内对HepG2细胞的抑制作用较强，其IC50分别是：0.21mg/ mL和0.92mg/mL，石油醚部位在实验浓度范围内对HepG2细胞未显示出抑制作用。结论：苦豆子乙醇部位和正丁醇部位对HepG2细胞有明显的抑制作用。

苦豆子；不同提取部位；丝裂霉素；HepG2

长久以来癌症是严重危害人类健康的疾病，虽然化疗暂时控制肿瘤的生长，但是现有的化学药物毒副作用较大，给患者造成了极大的痛苦。因此，急需找到抗肿瘤活性强、毒副作用又小的植物来源的药物。

苦豆子是豆科槐属植物，主要分布于我国西北省区及中亚细亚一带[1，2]。国内外对苦豆子的早期研究表明, 可药用其根、茎、全草及种子, 味苦性寒, 有清热解毒、祛风燥湿、杀虫止痛等作用[3，4]。本通过对苦豆子不同提取部位的研究，筛选出对HepG2较为敏感的提取物，为后续研究苦豆子体内外抗肿瘤作用提供科学依据。

1、材料与方法

1.1 材料和试剂

苦豆子购于宁夏、人肝癌细胞HepG2（有兰州理工大学实验中心、芦丁标准品购于甘肃省药检所。无水乙醇、丙酮、正丁醇、氯仿、石油醚均为分析纯。盐酸、氢氧化钠、碘-碘化铋钾试剂；1640培养基（GIBCO）；新生小牛血清（FCS，杭州四季清生物工程材料有限公司）、胰蛋白酶（Sigma公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT，Sigma公司）；二甲基亚砜（DMSO，Merk）；丝裂霉素（浙江海正药业）。

1.2 方法

1.2.1 苦豆子不同部位提取物的制备和黄酮类化合物含量的测定

称取预处理后的苦豆子，按料液比1:10加入90%乙醇，在水浴中加热回流2h，回流三次，过滤，合并滤液，减压浓缩，干燥，得乙醇提取部位。再将干燥的浸膏称重平均分成三份，分别用石油醚、氯仿、正丁醇进行萃取，直至萃取层无色为止，合并各自萃取液，减压浓缩，干燥，称重。得到石油醚、氯仿、正丁醇三个部位的浸膏。分别计算其得率，并以芦丁为标准品，采用紫外分光光度法测定其黄酮类化合物的含量[5]。

1.2.2 苦豆子不同提取部位体外抗肿瘤作用的研究

用无血清的1640培养基将以上提取物（总提取物、石油醚部位、氯仿部位、正丁醇部位）配制成2mg/mL溶液，用0.22μm滤膜滤过，除菌，用细胞维持液倍比稀释成1mg/mL，0.5mg/mL，0.25mg/mL，0.125mg/mL共4个稀释度，同时设阴性对照组（相同密度的细胞培养液），阳性药物对照组采用丝裂霉素，剂量的设置相同，每浓度设3个重复孔。

取对数生长期HepG2细胞，用1640培养基配成细胞浓度1×105/mL的悬液，在96孔培养板中加入细胞液100μL/孔（最外一圈加PBS），于孵箱中培养24h，使其贴壁生长。再加入不同剂量的以上各受试物100μL/孔，于孵箱中培养24h-48h后，每孔加入25μL MTT溶液（5mg/mL），再于孵箱中继续培养4h，终止培养，弃去孔内上清培养液，每孔加入150μL DMSO后于水平摇床上振荡10min，使结晶物充分溶解，于酶标仪测每孔吸光度，计算抑制率及IC50[6]。

抑制率=（A阴性对照孔-A加药孔）/ A阴性对照孔*100%

2、结果与分析

以上各提取物（总提取物、石油醚部位、氯仿部位、正丁醇部位）中黄酮类化合物的含量分别为：4.81%、0.17%、0.59%和2.17%。从表1可以看出，乙醇和正丁醇部位对HepG2的生长显示出较强的抑制作用，1mg/mL乙醇和正丁醇部位的抑制率可达50%以上，其IC50分别仅为0.21和0.92 mg/mL，而石油醚部位对HepG2的生长无任何影响。

表1 不同剂量的苦豆子不同提取部位对HepG2细胞的抑制率

3、讨论与结论

本试验对苦豆子的不同提取部位抗肿瘤作用进行了初步探究，结果表明：苦豆子抑制肝癌HepG2生长的最佳部位是乙醇和正丁醇部位，也正是黄酮类化合物主要集中的部位，其抑制率达到了56.47%和50.10%。

综上所述，苦豆子不同提取部位对HepG2细胞有一定抑制作用，虽然抑制作用不如阳性药物丝裂霉素，但本实验只是对苦豆子抗肿瘤作用部位的初步筛选，具体的有效成分及药理活性还有待进一步研究。

[1]杨家新, 喻志芳. 苦豆子的研究进展[J].天津药学,1998,10(1):46.

[2]仲仁山.苦豆子的研究及其应用[M].银川: 宁夏人民出版社,19831.

[3]周福生, 穆青. 野生植物苦豆子的化学成分和主要药理作用[J].中国野生植物资源,2006, 25(4):1.

[4]李艳艳, 冯俊涛. 苦豆子化学成分及其生物活性研究进展[J].西北农业学报, 2005,14(2): 133- 136.

[5] 曹亚军, 陈虹, 马建慧, 等. 复方苦豆子颗粒中总黄酮成分的含量测定[J].时珍国医国药, 2007,18(4):787-788. i

[6] 杨志伟, 曹秀琴等.苦豆子生物碱体外抗柯萨奇B3病毒的作用[J].四川中医, 2003.21(3) : 14-16..

Study on the antitumor activity of different extracted parts of Sophora Alopecuroides

Pu Xiuying*, Liu Lu2,Ma Xiaolong3, Ren Jing4, Li Xiaoyue5,Li Haibing6
(College of Life Science and Engineering, Lanzhou University of Technology The Key Lab of Screening, Evaluation and Advanced Processing of TCM and Tibetan Medicine, Gansu Educational Department, Lanzhou 730050, China)

Objective: To investigate different extracted parts of sophora alopecuroides anti-HepG2 activity in vitro. Methods: The sophora alopecuroides were extracted by different polarity solvents. MTT assay was used to observe the inhibitory effect of different extracted parts of sophora alopecuroides on liver cancer cell HepG2 in vitro. Ethanol extraction and N-butyl alcohol extraction of sophora alopecuroides had the cell inhibition activity against HepG2 (0.125-1 mg/mL) ,the IC50 were 0.21 mg/mL and 0.92 mg/mL, petroleum ether extraction of sophora alopecuroides showed no inhibition on HepG2. Results: the sophora alopecuroides ethanol part and n-butanol part has the obvious inhibitory effect on HepG2 .

sophora alopecuroides; the different extracted parts; mitomycin; HepG2

国家自然科学基金项目（81260070）