二甲双胍格列吡嗪片中盐酸二甲双胍含量测定方法改进

王长丹，臧恒昌，左艳红

(1.山东大学药学院，山东济南250012;2.合肥立方制药股份有限公司，安徽合肥230088)

二甲双胍格列吡嗪片中盐酸二甲双胍含量测定方法改进

王长丹1，2，臧恒昌1，左艳红2

(1.山东大学药学院，山东济南250012;2.合肥立方制药股份有限公司，安徽合肥230088)

摘要:目的建立高效液相法测定二甲双胍格列吡嗪片中盐酸二甲双胍含量测定方法。方法采用C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色谱柱;以0.05%庚烷磺酸钠溶液(用10%磷酸溶液调节pH值至4.0)－乙腈(84∶16)为流动相，流速:1.0 mL·min－1，检测波长:233 nm，柱温:30℃。结果盐酸二甲双胍在10.02～30.06 μg·mL－1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9)，回收率为101.0%，RSD=0.66% (n=9)。结论所建立的方法较原国家注册标准专属性更强、更准确。

关键词:高效液相色谱法;二甲双胍格列吡嗪片;盐酸二甲双胍

二甲双胍格列吡嗪片是由盐酸二甲双胍与格列吡嗪及适宜的辅料组成的复方制剂，盐酸二甲双胍具有降低肝糖原异生作用，可减少人体对葡萄糖吸收。格列吡嗪有促进人体分泌胰岛素作用，两者联合使用可以通过作用机制上的互补来提高疗效，纠正2型糖尿病患者的多种代谢紊乱状况，增强对血糖的控制［1，2］。原国家注册标准中盐酸二甲双胍含量测定方法的回收率比格列吡嗪含量测定方法的回收率低，对于生产中各工序的含量折算不能起到准确的指导作用，本文按照相关文献［3，4］重新建立了二甲双胍格列吡嗪片中盐酸二甲双胍的含量测定，结果表明，本方法较原国家注册标准的方法专属性更强、回收率更接近于理论投料量。

1　仪器和试剂

1.1仪器岛津LC－20AT高效液相色谱仪;岛津SPD－20A检测器; Shim－pack VP－ODS(4.6 mm ×150 mm，5 μm)色谱柱; LC solution工作站;梅特勒－托利多XS205电子天平。

1.2试剂乙腈为色谱纯(美国Sigma公司) ;水为高纯水(合肥立方制药股份有限公司自制) ;庚烷磺酸钠和磷酸均为分析纯;盐酸二甲双胍对照品(中国药品生物制品检定所，批号: 100664－2006020) ;二甲双胍格列吡嗪片(合肥立方制药股份有限公司，批号: 101101、101201、110201)。

2　方法与结果［5～7］

2.1检测方法色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.05%庚烷磺酸钠溶液(用10%磷酸溶液调节pH值至4.0)－乙腈(84∶16)为流动相;检测波长为233 nm，柱温为30℃。理论板数按盐酸二甲双胍峰计不低于2 000。

测定法:取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸二甲双胍25 mg)，置100 mL量瓶中，加缓冲液(0.1 mol·L－1盐酸溶液750 mL，加0.2 mol·L－1磷酸钠溶液250 mL，混匀，必要时用2 mol·L－1盐酸溶液或2 mol·L－1氢氧化钠溶液调节pH值至6.8) 50 mL，振摇10 min使盐酸二甲双胍溶解，用上述缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液20 mL，精密量取续滤液适量，用流动相定量稀释制成每1 mL中约含盐酸二甲双胍20 μg的溶液，精密量取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图;另精密称取盐酸二甲双胍对照品，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL中约含20 μg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

2.2专属性试验

2.2.1溶液的制备

2.2.1.1溶剂精密量取缓冲液2 mL置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.2.1.2对照品溶液精密称取盐酸二甲双胍对照品25.23 mg，置100 mL量瓶中，加缓冲液50 mL，振摇10 min，用缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液20 mL，精密量取续滤液2 mL置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.2.1.3阴性对照溶液精密称取样品(取按处方比例配制的空白辅料6.55 g，加格列吡嗪原料

0.125 g，混匀) 38.31 mg，置100 mL量瓶中，加缓冲液50 mL，振摇10 min，用上述缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液20 mL，精密量取续滤液2 mL 置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.2.1.4供试品溶液精密称取样品38.35 mg，置100 mL量瓶中，加缓冲液50 mL，振摇10 min使盐酸二甲双胍溶解，用上述缓冲液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液20 mL，精密量取续滤液2 mL 置25 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.2.2检验结果如图1所示，1.6 min左右有溶剂峰，在5.1 min左右为盐酸二甲双胍峰，在阴性对照中格列吡嗪未检出，表明本品中溶剂、空白辅料及格列吡嗪对盐酸二甲双胍的检测无干扰，专属性较强。

图1　专属性试验图谱

2.3线性关系考察精密称取盐酸二甲双胍对照品25 mg，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得盐酸二甲双胍对照品储备液。精密量取储备液适量，用流动相稀释得到如下系列浓度对照品溶液，10.02、15.03、20.04、25.05、30.06 μg·mL－1。精密量取上述各溶液20 μL注入液相色谱仪进行测定，以各组峰面积Y对相应浓度X进行线性回归，线性回归方程为: Y=94 392X－8 125.2，r=0.999 9，线性范围为10.02～30.06 μg·mL－1。

2.4重复性试验精密称取样品(约相当于盐酸二甲双胍25 mg)，按照“2.1”项下配制供试品溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪重复测定6次峰面积，测定结果RSD为0.074%，表明本品含量测定方法的重复性较好。

2.5中间精密度由6名检测人员分别按照“2.1”项下的检测方法测定同一样品的含量，测定结果RSD为0.12%，表明本品含量测定方法的中间精密度较好。

2.6准确度

2.6.1加样回收率试验分别精密称取样品(约相当于盐酸二甲双胍25 mg) 9份，分别置100 mL量瓶中，称取盐酸二甲双胍20、25、30 mg各3份，精密称定，分别置以上9个容量瓶中，按照“2.1”项下供试品溶液的配制方法，分别配制为低、中、高浓度的供试品溶液。按照“2.1”项下的检测方法测定该9份样品的含量，按外标法计算回收率，平均回收率为100.7%，RSD为0.63%，表明本品含量测定方法的加样回收率理想，结果见表1。结果表明，本品含量测定方法的加样回收率较好。

2.6.2回收率试验分别精密称取样品(取按处方比例配制的空白辅料6.55 g，加格列吡嗪原料0.125 g，混匀)约13.1 mg 9份，分别置100 mL量瓶中，称取盐酸二甲双胍20、25、30 mg各3份，精密称定，分别置以上9个容量瓶中，按照“2.1”项下供试品溶液的配制方法，分别配制为低、中、高浓度的供试品溶液。按照“2.1”项下的检测方法测定该9份样品的含量，按外标法计算回收率，平均回收率为101.0%，RSD为0.66%，表明本品含量测定方法的回收率理想，结果见表2。

表1　含量测定加样回收率试验结果

表2　含量测定回收率试验结果

2.7耐用性

2.7.1稳定性试验

2.7.1.1对照溶液稳定性试验精密称取盐酸二甲双胍对照品12.5 mg，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液2 mL置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，作为对照品溶液，即得。分别于0、2、4、6、8、10、12 h时，进样检测，峰面积RSD为0.045%，表明该含量测定方法中对照品溶液在12 h稳定性好。

2.7.1.2供试品溶液稳定性试验按照“2.1项”下方法配制供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h时，进样检测，峰面积RSD为0.022%，表明该含量测定方法中供试品溶液在12 h内稳定性好。

2.7.2液相色谱条件按照“2.1”项下检测方法，变动单个色谱条件测定，结果见表3。柱温为(30± 3)℃时含量测定结果的RSD为0.063%;流速为(1.0±0.2) mL·min－1时含量测定结果的RSD为 0.36%;流动相中乙腈的比例为16%±5%时含量测定结果的RSD为0.57%;流动相中庚烷磺酸钠的比例为0.05%±0.002 5%时含量测定结果的RSD为0.11%; pH值为4.0±0.2时含量测定结果的RSD 为0.72%，以上结果表明该检测方法液相色谱条件的耐用性较好。

表3　变动单个色谱条件后含量测定结果

2.8范围根据线性、准确度、精密度等的结果，确定范围为测试浓度的80%～120%。

2.9药品含量测定结果按照“2.1”项下的检测方法检查3批成品中盐酸二甲双胍的含量，结果见表4。

表4　成品中盐酸二甲双胍含量测定结果

3　讨论

3.1关于波长的选择通过紫外扫描，盐酸二甲双胍的最大吸收是233 nm。原方法的检测波长是222 nm，本方法选择的检测波长是233 nm，格列吡嗪在该波长处几乎无吸收，排除了原有方法中格列吡嗪对盐酸二甲双胍的影响，专属性更强。

3.2关于流动相的选择原方法盐酸二甲双胍的保留时间在1.7 min左右，出峰较早，易受溶剂干扰。本次参考相关文献对流动相进行比对［3，8～10］，最终参照《中国药典》2010年版中盐酸二甲双胍肠溶胶囊检测的色谱条件选择该流动相，按照本方法检测盐酸二甲双胍的保留时间在5.5 min左右，排除了溶剂等的干扰。

依照本方法进行产品检验时，盐酸二甲双胍的回收率接近于100%，在中间产品控制与成品检验中的理论投料量的数据有高度的吻合性，更准确地指导各工序间的含量折算，为该品种的生产有更高度的指导意义。

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E－mail: zanghcw@126.com

Improvement of assay method of metformin hydrochloride in Metformin and Glipizide Tablets

WANG Chang-dan1，2，ZANG Heng-chang1，ZUO Yan-hong2
(1.School of Pharmaceutical Sciences，Shandong University，Jinan 250012，China; 2.Hefei Lifeon Pharmaceutical Co.，Ltd.，Hefei 230088，China)

Abstract:Objective To establish an HPLC method for the determination of metformin hydrochloride in Metformin and Glipizide Tablets.Methods The separation was performed on C18column (4.6 mm×150 mm，5 μm)，and the mobile phase was composed of 0.05% sodium heptane－1－sulphonate solution (with 10% phosphoric acid solution to adjust pH value to 4.0)－acetonitrile(84∶16) with the flow rate of 1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 233 nm.The column temperature was 30℃.Results The linear range of metformin hydrochloride was 10.02～30.06 μg·mL－1(r=0.999 9) .The average recovery rate was 101.0% with RSD of 0.66%(n=9).ConclusionThe established method was better and more accurate than the original national registered standard specificity.

Key words:HPLC; Metformin and Glipizide Tablets; Metformin hydrochloride

通讯作者:臧恒昌，男，教授，硕士生导师，研究方向:多糖类药物研究、药品生产工艺优化及在线过程分析与过程控制，Tel: 0531－88380268，

作者简介:王长丹，女，研究方向:药品检验、质量分析，E－mail: 408601682@ qq.com

中图分类号:R927.2

文献标识码:A

文章编号:2095－5375(2015) 10－0574－004