脂联素过表达对小鼠炎性因子的影响*

郝 坡，孟凡萍

(1.重庆三峡医药高等专科学校医学技术系,重庆 404120;2.重庆三峡中心医院检验科，重庆 404000)



·论 著·

脂联素过表达对小鼠炎性因子的影响*

郝 坡1，孟凡萍2△

(1.重庆三峡医药高等专科学校医学技术系,重庆 404120;2.重庆三峡中心医院检验科，重庆 404000)

目的 用携带小鼠脂联素的基因过表达质粒转染小鼠，研究小鼠血浆脂联素及炎性因子分泌的影响。方法 用本课题组前期构建好的小鼠pcDNA3.1-Acrp30基因过表达质粒经股四头肌注入C57BL/6J小鼠体内，72 h后检测小鼠血浆脂联素表达情况，并测定其血浆白细胞介素-2、白细胞介素-3、白细胞介素-6、白细胞介素-8和肿瘤坏死因子-α的分泌水平。结果 pcDNA3.1-Acrp30过表达载体转染小鼠后，其血浆脂联素水平显著增高，血浆炎性因子分泌则显著下调。结论 构建的小鼠Acrp30基因过表达载体能有效地增强脂联素在小鼠体内的表达，并能拮抗炎性因子的分泌。

脂联素； 过表达； 炎性因子

脂肪组织作为一个新近发现的内分泌器官，可分泌多种细胞因子。这些因子在胰岛素抵抗及2型糖尿病(T2DM)发病机制中起着重要作用。脂联素(Acrp30)也由脂肪组织分泌，在抗动脉粥样硬化调节糖脂代谢、改善胰岛素抵抗等方面具有广泛的生理功能，与糖尿病有密切的关系。本研究着重探讨其抗炎作用，首先将构建的小鼠Acrp30基因过表达质粒导入C57BL/6J小鼠体内，观察后者血浆Acrp30的水平，并检测其对小鼠炎性因子分泌的影响，旨在进一步探讨Acrp30在脂代谢紊乱发生和发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 Acrp30基因过表达载体为本课题组前期构建并保存；C57BL/6J小鼠购自重庆医科大学实验动物中心；酶联免疫吸附法(ELISA)小鼠Acrp30检测试剂盒购自德国Phoenix公司；炎性因子检测试剂购自美国BD公司。

1.2 动物分组及处理 C57BL/6J小鼠20只，8周龄，随机分为pcDNA3.1(+)空质粒注射组(NC组,n=10)，pcDNA3.1-Acrp30重组真核表达质粒注射组(PA组,n=10)，空载及表达质粒(1 mg/kg)注射于小鼠股四头肌。于注射前及注射后72 h采集空腹尾静脉血，分离血浆。

1.3 小鼠血浆Acrp30测定 采用ELISA法测定小鼠血浆Acrp30水平，操作按照ELISA试剂盒说明书进行。以系列水平Acrp30标准品绘制A450标准曲线，根据标准曲线计算Acrp30水平。

1.4 小鼠血浆炎性因子水平测定 采用流式细胞法测定小鼠血浆白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，操作按照BD公司炎性因子测定试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1 小鼠血浆Acrp30分泌水平变化 小鼠血浆Acrp30 ELISA测定结果，见表1。质粒注射后PA组血浆Acrp30水平较注射前均升高(P<0.05),而NC组在注射前后差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 小鼠血浆Acrp30分泌水平变化情况

续表1 小鼠血浆Acrp30分泌水平变化情况

2.2 小鼠血浆炎性因子分泌水平变化 小鼠血浆IL-2、IL-3、IL-6、IL-8及TNF-α流式细胞仪测定结果，见表2。质粒注射后PA组血浆5项指标水平较注射前均降低(P<0.05),而NC组在注射前后差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 小鼠血浆炎性因子分泌水平变化情况±s，n=20)

3 讨 论

肥胖、糖尿病、代谢综合征等代谢性疾病患者都伴随炎性反应，作为内分泌器官，脂肪细胞可以分泌大量的细胞因子，其中包括Acrp30，这些细胞因子接受外界信号并对之产生反应，从而调节食欲、胰岛素敏感性、炎性反应等过程。

Acrp30是一种与胰岛素抵抗密切相关的细胞因子，主要由脂肪细胞分泌，与受体(AdipoR1、AdipoR2)结合后具有增强胰岛素敏感性、抗高血糖、抗动脉粥样硬化等生物作用[1-3]。另有研究表明，低Acrp30血症是动脉粥样硬化发生的独立危险因素，随着动脉粥样硬化的发展，血浆Acrp30水平呈进行性下降趋势[4]。对人体的研究发现，Acrp30水平能预示T2DM和冠心病的发展，并在临床试验中表现出抗糖尿病、抗动脉粥样硬化和炎性反应的潜力[4-5]。Acrp30通过激活蛋白激酶A(PKA)信号通路，使TNF-α介导的核因子-κB(NF-κB)的活化受到抑制，从而减轻内皮细胞的炎性反应[6]。对体质量指数(BMI)正常和异常人群中IL-6、IL-10、TNF-α与Acrp30关系的研究表明，BMI高的人群Acrp30表达显著降低，IL-6和TNF-α水平则升高，相反，IL-10水平则显著下降[7]。可以抑制人的白细胞产生IL-10，下调巨噬细胞中前炎性细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)的产生[8]。Matsubara等[9]研究发现，低Acrp30血症与超敏C反应蛋白血症存在负相关，提示Acrp30可能具有抗炎作用，以上研究提示Acrp30是炎性反应中重要的调节因子。

为了进一步评价Acrp30和炎性因子的相互作用，本研究利用构建的Acrp30真核表达载体pcDNA3.1-Acrp30转入C57BL/6J小鼠，成功上调了小鼠血浆Acrp30水平，并发现血浆炎性因子IL-2、IL-3、IL-6、IL-8和TNF-α水平却显著受抑。结果证明，Acrp30的过表达可拮抗小鼠分泌炎性因子，从而拮抗炎性反应过程。

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Influence of adiponectin overexpression on mice inflammation factors*

HAOPo1，MENGFan-ping2△

(1.DepartmentofMedicalTechnology,ChongqingThreeGorgesMedicalCollege,Chongqing404120,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingThreeGorgesHospital,Chongqing404000,China)

Objective To transfect into mice with plasmid carrying adiponectin gene overexpression for researching its influence on the plasma adiponectin expression and inflammation factors secretion.Methods The constructed mice pcDNA3.1-Acrp30 gene overexpression plasmid was transfected into the C57BL/6J mice body by quadriceps femoris and the plasma adiponectin expression after 72 h and the secretion levels of IL-2,IL-3,IL-6,IL-8 and TNF-α were detected.Results After transfecting the pcDNA3.1-Acrp30 oversxpression vector into mice,the plasma level of adiponectin was significantly increased and the levels of plasma inflammatory factor IL-2,IL-3,IL-6,IL-8 and TNF-α were significantly down-regulated.Conclusion The constructed Acrp30 gene overexpression vector can effectively increase the expression of adiponectin in mice and antagonize the secretion of inflammatory factors.

adiponectin; overexpression; inflammatory factor

重庆市卫生和计划生育委员会医学科技计划项目(2011-2-411),重庆市万州区科技计划项目(201203060)。

郝坡,男，硕士，讲师/主管检验师，主要从事医学检验方面的教学与研究工作。△

，E-mail:menyfei2132@aliyun.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.17.012

A

1672-9455(2015)17-2513-02

2015-03-25

2015-04-15)