细胞核增殖抗原和p53与乳腺浸润性导管癌Her-2基因表达的关系

丁丽，蒲纯，乔昱，李金明，张永强

(1.北京医院,a 肿瘤内科，b呼吸内科,北京 100730;2.卫生部临床检验中心)

·论著·

细胞核增殖抗原和p53与乳腺浸润性导管癌Her-2基因表达的关系

丁丽1a，蒲纯1b，乔昱1a，李金明2，张永强1a

(1.北京医院,a 肿瘤内科，b呼吸内科,北京 100730;2.卫生部临床检验中心)

[摘要]目的分析细胞核增殖抗原(Ki-67)、p53在乳腺浸润性导管癌(IDC)中的表达情况及其临床病理表现特点，并探讨Ki-67、p53与Her-2表达之间的关系。方法回顾性分析228例乳腺IDC患者的临床资料，其中Her-2阳性88例，Her-2阴性140例，免疫组织化学法检测所有乳腺IDC标本中Ki-67 及p53的表达情况，分析Ki-67和p53的表达与乳腺癌的临床病理特点及Her-2表达之间的相关性。结果Ki-67高表达与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期及脉管癌栓均差异无统计学意义(P>0.05)，而在激素受体阴性、绝经前、肿瘤分级髙及Her-2阳性患者中Ki-67高表达率明显增高(P<0.05)；p53阳性与月经状态、肿块大小、淋巴结转移、肿瘤分期及脉管癌栓均差异无统计学意义(P>0.05)，而在激素受体阴性及 Her-2阳性患者中p53阴性率明显增高(P<0.05)； Her-2阳性乳腺IDC中，p53阳性表达率为58.0%，Ki-67高表达率为88.6%，Her-2阴性组中p53及Ki-67高表达率分别为40.7%和51.4%，两者相比差异均有统计学意义(P<0.05)，但Ki-67髙表达在p53阳性与阴性患者中差异无统计学意义(P<0.05)。结论Ki-67和p53在Her-2阳性乳腺IDC中均表达升高，提示可以作为乳腺癌预后不良因素。

[关键词]癌,导管,乳腺；基因,erbB-2;KI-67抗原;基因,p53

近年来,乳腺癌在我国发病率不断上升，在一些大城市发病率和死亡率均已跃居女性恶性肿瘤的首位[1]。大量研究已证实乳腺癌的预后与ER、PR及Her-2表达相关，而其中Her-2阳性表达是乳腺癌独立预后不良因素[2]。细胞核增殖抗原(Ki-67)是在增殖细胞中表达的一种与细胞凋亡、增殖相关的核抗原，目前Ki-67已成为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标之一[3]；p53是研究比较广泛的抑癌基因，其突变与乳腺癌的发生、发展密切相关[4]，p53过度表达多提示原癌基因在不断扩增，导致肿瘤的深部浸润和转移，预示恶性程度高，预后差。本研究回顾性分析Ki-67和p53在Her-2阳性和阴性的乳腺浸润性导管癌中的表达情况，并探讨其与Her-2表达之间的关系及临床意义。

1对象与方法

1.1研究对象选取北京医院2010年9月至2014年9月共228例原发性乳腺浸润性导管癌(IDC)患者临床资料，所选均为女性,年龄28~82岁，平均年龄(55.0±11.9)岁。所有患者均经手术病理明确诊断，手术方式:改良根治术192例，保乳术17例，局部扩大切除术19例。HER-2阳性88例(占38%)，年龄30~76岁，平均年龄(52.7±13.6)岁；HER-2阴性乳腺癌患者140例(占62%)，年龄28～82岁，平均年龄(55.0±11.7)岁。根据国际抗癌联盟(UICC)的TNM分期标准：Ⅰ期83例、Ⅱ期110例、Ⅲ期35例；无淋巴结转移者137例，有淋巴结转移者91例。

1.2研究方法 参照美国临床肿瘤学会/美国病理学家协会(ASCO/CAP)病理诊断指南，对雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)结果评判采用免疫组织化学方法进行。ER和PR阳性细胞数>1%为阳性；Her-2的结果评判采用免疫组织化学方法及FISH检测相结合办法，Her-2(+++)视为阳性，Her-2(+)或(-)视为阴性，对Her-2(++)者行FISH检测，若存在基因扩增为阳性，否则视为阴性。

Ki-67 阳性细胞为细胞核棕黄色着色，光镜下观察，5个高倍镜视野计数200个细胞，计算阳性细胞所占的细胞总数百分比。Ki-67阳性细胞数<14%为低表达，≥14%为高表达。p53蛋白：细胞核内棕色颗粒为阳性，每张切片检测10个视野(×400)，阳性细胞≤5%为阴性，阳性细胞>5%为阳性。

2结果

2.1Ki-67与乳腺IDC临床病理特征的关系 Ki-67的表达水平与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分期及脉管癌栓均差异无统计学意义(P>0.05)，在激素受体(ER和PR)阴性、绝经前患者、肿瘤分级高以及Her-2阳性的患者中Ki-67高表达比率明显增高(P<0.05)，见表1。

2.2p53与乳腺IDC临床病理特征的关系p53阳性与月经状态、肿块大小、淋巴结转移、肿瘤分期及脉管癌栓均差异无统计学意义(P>0.05)，在ER、PR阳性的患者中，p53阳性的比率明显低于p53阴性患者(χ2=54.26 ,P<0.05),在Her-2阳性的患者P53阳性比率明显高于P53阴性患者(χ2=11.79，P<0.05)，见表1。

2.3Ki-67和Her-2在乳腺IDC中表达情况分析全组228例乳腺IDC患者中，Ki-67高表达占65%。亚组分析可见Her-2阳性乳腺IDC中Ki-67高表达率为88.6%，Her-2阴性组中Ki-67高表达率为51.4%,两者相比差异有统计学意义(χ2=32.62，P<0.05)，见表2。

2.4p53和Her-2在乳腺IDC中表达情况分析 全组乳腺IDC患者中p53阳性占47%，P53阳性在Her-2阳性乳腺IDC为58.0%，在Her-2阴性组为40.7%，两者相比，差异有统计学意义(χ2=11.79，P<0.05)，见表3。进一步分析显示，Ki-67在p53阳性与阴性患者中高表达率差异无统计学意义(χ2=2.56,P>0.05)。

3讨论

随着分子生物学技术的发展，乳腺癌被认为是一组高度分子异质性疾病，仅仅依据临床特征对乳腺癌进行分类已不能反映该病的本质，且对临床治疗的指导意义逐渐减弱[5]。目前已知ER、PR和Her-2是判断乳腺癌预后和指导治疗的重要分子标志物，其中Her-2 是乳腺癌预后不良的独立危险因素,Her-2阳性的乳腺癌患者往往具有生存期短,易转移和复发等特点[6-7]。然而曲妥珠单抗单药治疗对肿瘤缓解率不到30%，即使联合化疗依然会出现耐药或复发转移[7]。因此临床需要探索更多与乳腺癌患者复发与转移相关的生物学指标。

表1　乳腺IDC中p53、Ki-67的表达与临床病理特征的关系

表2　Her-2与Ki-67表达之间关系[例(%)]

注：Her-2阳性乳腺IDC中Ki-67高表达率与Her-2阴性组中Ki-67高表达率比较，χ2=32.62，P=0.000

表3　Her-2与p53表达之间关系[例(%)]

注：Her-2阳性乳腺IDC中，p53阳性表达率与Her-2阴性组中p53高表达率比较，χ2=11.79，P=0.003

Ki-67是与细胞增殖高度相关的核抗原，是Ki-67蛋白的简称，Ki-67广泛表达于增值活跃的组织中，而在静息细胞中的表达缺乏，这一特点使其被作为细胞核增殖标记基因[8-10]。乳腺癌组织中Ki-67 表达水平随着肿瘤恶性程度的增高而逐渐增高，与乳腺癌的预后密切相关[11-13]。本研究发现，Ki-67 在Her-2阳性乳腺IDC中表达明显高于Her-2阴性乳腺IDC，这与Her-2阳性乳腺癌恶性度高,预后欠佳等临床表现相符合。本研究发现，Ki-67高表达多见于激素受体阴性的患者，考虑可能与激素受体阳性的乳腺癌一般恶性程度低，生长及增殖速度慢有关。有研究显示[13]，Ki-67 在乳腺癌组织中高表达与乳腺癌原发肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移有密切关系，提示Ki-67 可作判断肿瘤侵袭力的标志。但王建法等[14]报道Ki-67 表达与乳腺癌临床分期有关，而与肿瘤大小、淋巴结转移无明显相关性。本研究结果显示Ki-67在绝经前及组织学分级高的患者中高表达，这也进一步说明了Ki-67 高表达提示肿瘤恶性度高，可以作为一种不良预测因子。

p53基因是乳腺癌中研究最多的抑癌基因，野生型p53主要通过诱导可逆或不可逆的细胞周期阻滞，提高DNA的修复能力和抑制新生血管形成，发挥其抑制增殖的作用，突变型p53失去其抑癌作用[15],突变型p53蛋白可促进细胞的恶性转化。p53基因在正常细胞中含量很低，一般检测不出来，但是突变型的p53基因产生的蛋白半衰期长达2~12个小时，较易被检测，免疫组织化学中只有突变型的P53基因的表达产物可以被检测出。本研究结果显示其突变率47%。大多数学者认为[4，15-16]，过度表达的p53提示原癌基因的扩增，促进肿瘤细胞活动，引起肿瘤深部浸润及转移，预后较差。本研究中，p53阳性与肿瘤大小、淋巴结转移、分期及病理分级等均无明显相关性，但Her-2阳性乳腺IDC患者中p53阳性表达率明显高于阴性组(58%，41%)，提示p53与Her-2在促进肿瘤发生发展方面可能有协同作用。

本研究发现，在Her-2阳性乳腺IDC患者中Ki-67髙表达及p53阳性表达明显升髙，提示三者可能在乳腺IDC的发生发展中具有协同作用。本研究还发现，尽管Her-2阳性乳腺IDC中Ki-67 和p53均为高表达，但Ki-67 髙表达率在p53阳性与阴性患者中差异无统计学意义，反之亦然，一方面可能与样本构成不同有关，另一方面肿瘤发生发展本身过程复杂，涉及多种基因多个调控因子的相互作用，三者之间的关系还有待于更深入的研究。

参考文献

[1]徐光炜，胡永昇，阚秀.中国10万妇女乳腺癌筛查初探[J].中国肿瘤，2010,19(9):565-568.

[2]Liu AN,Sun P,Liu JN.Clinicopathologic characteristics and prognostic factors in patients with operable HER-2 overexpressing breast cancer[J].Asian Pac J Cancer Prev,2012,13(4):1197-1201.

[3]杨雪琴，李雁.Ki67 在乳腺癌的研究进展[J].武汉大学学报：医学版，2011，32(6)：852-856.

[4]Norherg T，Klanr S，Karl G，et al.Increased p53 mutation frequency during tumor progress,results from a breast cancer cohort[J].Cancer Ros，2001,61(22)：8317-8321.

[5]Gnant M，Harbeck N，Thomssen C.St.Gallen2011：summary of the consensus discussion[J].Breast Care(Basel)，20l1，6：136-141.

[6]李慧慧，马飞，曾瑄,等.乳腺癌Her-2的表达与临床病理特征的关系[J].中华医学杂志，2011,91(2)：76-80.

[7]Marty M,Cognetti F,Maranichi D,et al.Randomized phase II trial of the efficacy and safety of trastuzumab combined with docetaxelin patients with human epidermal growth factor receptor 2-positive metastatic breast cancer administered as first-line treatment: the M77001 Study Group[J].J Clin Oncol,2005,23(19):4265-4274.

[8]王桂芝,卢书信,张克政.caspase-3、bcl-2基因及Ki-67在胃癌前病变中的表达及意义[J].中国临床保健杂志,2004,7(3):198-200.

[9]徐本群，马娟，周琼，等.P16与Ki67的表达在子宫颈上皮内瘤变组织学诊断与分级中的临床意义[J].安徽医药,2013,17(9):1540-1542.

[10] 黄利,彭琼,甘惠中,等.p53蛋白、ki-67抗原和表皮生长因子受体在胃癌组织的表达及意义[J].中国临床保健杂志,2012,15(2):153-156.

[11] Milde-Langosch K,Kam T,Muller V,et al.Validity of proliferation markers KI-67,TOP2A,and RacGAP1 in molecular subgroups of breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat,2013,137(1):57-67.

[12] Yerushalmi R,Woods R,Ravdin PM,et al.KI-67 in breast cancer: prognostic and predictive potential[J].Lancet Oncol,2010,11(2):174-183.

[13] Klintman M，Bendahl PO，Grabau D，et al.The prognostic value of Ki-67 is dependent on estrogen receptor status and histological grade in premenopausal patients with node-negative breast cancer[J].Mod Pathol，2010，23(2)：251-259.

[14] 王建法，顾超，叶宣光.乳腺癌淋巴结转移与Ki-67、VEGF 表达的相关性及其临床意义[J].实用癌症杂志，2009，24(5)：450-451.

[15] Panahi M,Saki N,Ashourzadeh S,et al.Expressional correlation of human epidermal growth factor receptor 2,estrogen/progesterone receptor and protein 53 in breast cancer[J].Asian Pac Cancer Prev,2013,14(6):3699-3703.

[16] 李宝江，朱志华，王军亚,等.Ki67、p53、VEGF 和C-erbB-2 在乳腺癌组织中表达的相关性研究及其临床意义[J].癌症，2004，23(10):1176-1179.

The association between the expression of Ki-67,p53 and Her-2 in breast invasive ductal carcinomaDingLi*,PuChun,QiaoYu,LiJinmin,ZhangYongqiang(*DepartmentofMedicalOncology,BeijingHospital,Beijing100730,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the expression of Ki-67 and p53 in breast invasive ductal carcinoma(IDC) and the association between the human epidermal growth factor receptor 2 (Her-2) expression.MethodsA total of 228 breast IDC patients were retrospectively collected and analyzed..The expression of p53 and Ki-67 were detected by streptavidin-peroxidase (SP) immunohistochemistry assay.The association between expression of p53,Ki-67 and Her-2 were analyzed.ResultsKi-67 expression was statistically correlated with menopausal status and pathology grade (P<0.05),but there was no statistically significant difference in tumor size,clinical stages and lymph node metastasis (P>0.05).There was no significant correlation between p53 expression with menopausal status,pathology grade,tumor size and lymph node metastasis (P>0.05).The expression of Ki-67 and p53 were negatively correlated with estrogen receptor (ER) (P=0.00) and progesterone receptor (PR) (P=0.00),and positively correlated with Her-2 overexpression (P=0.00).The positive expression rates of p53 and Ki-67 in breast IDC patients with Her-2 positive were significantly higher than those in patients with Her-2 negative (P<0.05).However，there was no correlation between the expression of Ki-67 and p53 (P>0.05).ConclusionKi-67 and p53 could be used as prognostic factors in breast IDC,which may play a synergetic role in the carcinogenesis and progression of breast IDC.

[Key words]Carcinoma,ductal,breast;Genes,erbB-2;KI-67 antigen;Genes,p53

(收稿日期：2015-03-03)

Corresponding author:Zhang Yongqiang,Email: 13701314630@163.com

通信作者：张永强，博士，主任医师，Email:13701314630@163.com

作者简介：丁丽，副主任医师，Email:doctording2012@163.com

基金项目：国家自然科学基金(BJ-2011-046)

中图分类号:R737.9

文献标识码:A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2015.06.001