HPLC法测定甲硫酸新斯的明注射液的含量

孙 莉

(安徽省芜湖市食品药品检验所，安徽芜湖 241001)

甲硫酸新斯的明是一种抗胆碱酯酶药，常用于重症肌无力、手术后功能性肠胀气及尿潴留等病的治疗，也能发挥改善眼睛调节功能，减轻眼结膜充血的作用。对于其制剂甲硫酸新斯的明注射液的含量测定，《中国药典》则采用半微量定氮法［1]，该方法取样量，操作繁琐，结果误差大。经过系统的试验，笔者采用HPLC法测定甲硫酸新斯的明注射液中甲硫酸新斯的明的含量，方法简便、准确、专属性强，获得了满意的结果。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪;紫外检测器(美国安捷伦公司);梅特勒-托利多AB265-S电子分析天平(德国梅特勒-托利多公司);UV-3900紫外可见分光光度计(日本日立公司)。甲硫酸新斯的明对照品(批号:100550-200401，中国药品生物制品检定所);甲硫酸新斯的明注射液4批(上海信谊金朱药业有限公司，批号120412;上海信谊金朱药业有限公司，批号120706;河南润弘制药股份有限公司，批号1208171;河南润弘制药股份有限公司，批号1302011);乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为二次去离子水。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱:Agilent ZORAX Eclipse XDB C18(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:0．05 moL·L－1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节 pH 为 3．0)—乙腈(90∶10)，流速为 1．0 mL·min－1，检测波长为215 nm，进样量:10 μL，柱温:室温。理论塔板数按甲硫酸新斯的明峰计算应不小于2 000，甲硫酸新斯的明与相邻杂质峰的分离度应符合要求，2．2项下溶液的色谱图见图1(a～b)。

2．2 溶液的制备

2．2．1 对照品溶液的制备 精密称取甲硫酸新斯的明对照品10．20 mg，置20 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2．2．2 供试品溶液的制备 取本品，用水稀释制成每1 mL中含甲硫酸新斯的明0．5 mg的溶液，作为供试品溶液。

2．3 线性关系考察 精密称取甲硫酸新斯的明对照品51．00 mg，置50 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0 mL 分别置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按拟定的色谱条件进行检测，记录色谱图，以甲硫酸新斯的明浓度(g·L－1)为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，得回归方程 Y=171．75+18 694X，r=0．999 9。表明甲硫酸新斯的明在0．102 ～1．02 g·L－1浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2．4 精密度、重复性及稳定性试验 分别取同一种对照品溶液(0．51 g·L－1)，在上述色谱条件下，重复测定6次，每次10μL，甲硫酸新斯的明峰面积的RSD为0．049%(n=6)，表明精密度良好。

分别取同一批甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)共6份，在上述色谱条件下进样，记录色谱图，甲硫酸新斯的明含量测定的RSD为0．046%，表明本法重复性好。

分别取同一种对照品溶液(0．51 g·L－1)，在室温下放置，分别于 0、2、4、6、8 h 进样，记录色谱图。甲硫酸新斯的明峰面积的RSD为0．17%，表明溶液的稳定性良好。

2．5 回收率试验 取已知含量的供试品溶液(120706)2 mL各9份，置10 mL容量瓶中，分别加入对照品溶液(1．02 g·L－1)0．8、1．0、1．2 mL 各 3份，用水稀释至刻度，摇匀，按2．1项下色谱条件，分别进样。记录色谱图与峰面积，本方法的平均回收率为99．57%，RSD为0．95%符合要求。

2．6 专属性试验

2．6．1 酸降解溶液的配制 精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)1 mL，置10 mL量瓶中，加5 mol·L－1盐酸溶液 100 μL，放置 30 min，加 5 mol·L－1氢氧化钠溶液100μL，加水稀释至刻度，摇匀。

第三，企业所得税。抵债资产的公允数据以及缴纳的其他税收金额是企业所得税的计税基础。重组债权的计税成本是贷款资产以及表内所需收取的利息，另外还需要对收到的抵债资产的公允价值与计税成本之间的差异，明确当期的利润或损失，并对所需缴纳得税款进行计算。抵债资产在持有环节获取的收益(如抵债资产用于租赁所发生的其他业务收入扣除其他业务支出后的差额)需按照规定申报缴纳企业所得税；商业银行抵债资产处置收入，应当按照抵债资产在处置环节的收入和支出申报缴纳企业所得税。

2．6．2 碱降解溶液的配制 精密量取甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)1 mL，置10 mL量瓶中，加5 mol·L－1氢氧化钠溶液 100 μL，放置 30 min，加5 mol·L－1盐酸溶液100μL，加水稀释至刻度，摇匀。

2．6．3 光降解溶液的配制 将甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)，置太阳光下放置24 h后，即得。

2．6．4 热降解溶液的配制 将甲硫酸新斯的明注射液(批号:120706)，置100℃水浴中加热3 h后，即得。

按上述色谱条件进样，记录色谱图(图1 c～f)。结果显示，本品在强酸和强碱破坏条件下，在保留时间为3．5 min附近降解物峰面积增大明显，杂质个数无明显增加，而在加热和光照条件下，样品降解不明显，在此色谱条件下，主峰的分离度约为8．5，表明该方法专属性良好。

2．7 检测限和定量限 取对照品溶液(0．102 g·L－1)用水稀释若干倍，在上述色谱条件下测定，以信噪比S/N=3计算检测限，甲硫酸新斯的明检测限约为1．0 ng。以信噪比S/N=10估算定量下限，约为4．0 ng。实配4．0 ng稀溶液，经检测通过。

2．8 样品含量测定 精密量取本品适量，加水稀释制成每1 mL中约含0．5 mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另取甲硫酸新斯的明对照品，同法操作，按外标法以峰面积计算，即得，结果见表1。

表1 样品含量测定结果

3 讨论

参照《中国药典》有关物质检查项下，笔者将流动相0．05 moL·L－1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH 为 3．0)—乙腈(90∶10)和 0．05 moL·L－1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节 pH为 3．0)—乙腈(90∶10)(含0．001 5 moL·L－1庚烷磺酸钠)进行了比较，发现0．001 5 moL·L－1庚烷磺酸钠对主峰的峰形及塔板无明显改善，故选择了相对简单的前者作为流动相。

从表1数据可以看出，药典采用的半微量定氮法所测得结果相对于液相方法均高出3% ～6%，可见药典方法的误差因素较多，而本文所采用的HPLC法检测甲硫酸新斯的明的含量结果可靠，可用于甲硫酸新斯的明注射液的质量控制。

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