HPLC法同时测定利胆排石片中4种蒽醌类成分的含量探索

秦黎明 李启彬

·实验研究·

HPLC法同时测定利胆排石片中4种蒽醌类成分的含量探索

秦黎明 李启彬

目的探讨高效液相色谱法(HPLC)同时对利胆排石片中4种蒽醌类成分含量测定情况。方法 指定具有丰富经验及专业知识的实验室检验人员完成各批次利胆排石片中4种蒽醌类成分含量检测工作, 将所得数据经专业分析后获得结论。结果 各批次利胆排石片中大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚等4种蒽醌类成分含量经HPLC测定后对比, 差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 利胆排石片经HPLC可同时对其4种蒽醌类成分含量进行准确测定, 有利于提高药品质量控制效果, 保障患者疗效及预后。

利胆排石片；高效液相色谱法；蒽醌类；含量测定

利胆排石片是临床常用的胆囊炎、胆结石治疗药物, 属于纯中药制剂。本文将探讨HPLC同时对利胆排石片中4种蒽醌类成分含量测定情况, 为提高利胆排石片质量控制效果提供可靠依据, 现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 试剂及仪器 ①试剂：广州白云山和记黄埔中药有限公司提供利胆排石片(批号20140521、20140809、20141217)、中国药品生物制品检定所提供4种蒽醌类成分对照品(大黄素、大黄酸、大黄素甲醚、大黄酚)、超纯水、色谱纯(甲醇)；②仪器：美国惠普公司(Hewlett-Packard Development Company, L.P., 简称HP)提供1100型高效液相色谱仪、美国沃特世公司(Waters)提供紫外检测器及Empower色谱工作站、德国赛多利斯集团(sartorius)提供cp 225D 电子天平, 大连依利特分析仪器有限公司提供SinoChron ODS-BP色谱柱(规格5 μm, 4.6 mm×200 mm)。

1.2 方法［1］指定具有丰富经验及专业知识的实验室检验人员完成各批次利胆排石片中4种蒽醌类成分含量检测工作。具体操作为：①制备对照品溶液：取对照品精密称量后放置于量瓶中(规格10 ml)并加入1 ml三氯甲烷, 震荡溶解并稀释定容后即得对照品储备液, 取适量稀释并制成对照品混合溶液, 其中大黄素甲醚、大黄酚、大黄素、大黄酸浓度分别为81.30、112.0、303.0、70.70 μg/ml；②制备供试品溶液：精密称定0.15 g利胆排石片(粉末)并加入25 ml甲醇定量, 给予1 h加热回流处理后自然冷却, 称重后利用甲醇补足失去重量, 摇晃使之混合均匀后过滤, 精密称取5 ml滤液并放置于烧瓶中, 将溶剂挥发后加入8%、10 ml盐酸溶液(分析纯)并给予2 min超声处理, 之后加入10 ml三氯甲烷并再次给予1 h加热回流, 待自然冷却后放置于分液漏斗中, 将容器经三氯甲烷洗涤后洗涤液放入同一分液漏斗,将三氯甲烷层分取并对酸液给予3次三氯甲烷提取(10 ml/次), 将提取液混合后减压回收, 残渣中加入1 ml三氯甲烷使之溶解并将其置于量瓶中(规格10 ml), 甲醇定容并摇匀,取滤液即得供试品溶液；③含量检测：波长调整为254 nm,色谱柱温度设定为试问, 进样量10 μl, 流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(分析纯)(80∶20, 流速1.0 ml/min)回归方程分别为大黄素甲醚Y=5.774×104X-4.083×103(r=0.9996)、大黄酚Y=8.145×104X-2.212×104(r=0.9997)、大黄素Y=5.698× 104X-8.351×103(r=0.9998)、大黄酸Y=3.515× 104X-3.809×103 (r=0.9999)。记录各批次利胆排石片中4种蒽醌类成分含量检测结果, 将所得数据经专业分析后获得结论。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差(-x±s)表示, 采用t检验；计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

各批次利胆排石片中大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚等4种蒽醌类成分含量经高效液相色谱法测定后对比,差异无统计学意义(P＞0.05), 提示各批次利胆排石片质量控制效果良好。见表1。

表1 各批次利胆排石片4种蒽醌类成分含量测定情况分析

3 讨论

利胆排石片组成成分包括木香、大黄、茵陈、黄芩、金钱草等十味中药, 诸药合用可达消积导滞、破气除胀、清热利湿、和胃利胆之功效, 临床主要用于治疗因湿热蕴毒、腑气不通引起的胆胀、胁痛等证(如胆石症、胆囊炎等)［2］。有研究显示, 药物质量将直接影响疾病治疗及预后效果。近年来由于人们自我保护意识逐渐增强, 对药物质量关注度也不断提高, 如何有效控制药物质量已成为广大医务工作者共同关心的热点问题。

研究表明, 以往利胆排石片质量标准主要涉及黄芩含量测定, 不利于全面掌握该药物有效成分及获得满意质量控制效果。HPLC操作简单、方便快捷, 将色谱条件设置合理后出峰时间快且峰形较好, 是临床常用的药品含量检测方法［3］。本文中利用HPLC对利胆排石片中4种蒽醌类成分含量实施同时测定可知, 其各批次检测结果对比并无显著差异, 提示利胆排石片质量控制效果较为理想。

综上所述, 利胆排石片经HPLC可同时对其4种蒽醌类成分含量进行准确测定, 有利于提高药品质量控制效果, 保障患者疗效及预后, 值得今后推广。

［1］ 张秋蓉, 王丽芳, 刘文燕.HPLC法同时测定胆宁片中5种蒽醌类衍生物含量.中国药物警戒, 2012, 9(1):3-6.

［2］ 徐冬艳, 刘斌.HPLC法测定降脂宁调脂抗氧化有效部位中4种蒽醌类成分的含量.北京中医药大学学报, 2010(3):203-206.

［3］ 肖晶, 杨杰, 高尚伟.HPLC法测定保健食品中蒽醌类成分的含量.中国食品卫生杂志, 2010, 22(1):27-30.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.31.211

2015-04-02］

463000 河南省驻马店市食品药品检验所